浅议干扰素-λ1对慢性HBV感染青少年患者外周血来源树突状细胞功能影响-要求
最后更新时间：2024-03-23
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论文导读：
摘要：目的：现探讨认为乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）主要通过宿主免疫应答与免疫反应引起肝细胞的损伤和破坏，由于宿主的免疫反应不同HBV感染所引起的临床体现和转归各不相同。根据免疫学特点，婴幼儿期HBV感染自然历程在临床上可以分为四期，①免疫耐受期；②免疫清除期；③非活动HBV携带状态；④再活动期，目前HBV感染慢性化的确切机制尚不明确。HBV感染后树突状细胞(dendritic cell，DC)抗原提呈功能低下可能是HBV感染慢性化的理由之一。DC是目前所知机体内功能最强的APC(antigen-presenting cell，APC)，DC作为机体内免疫反应的始动、调节和效应者，具有激括CD8+CTL和CD4+T辅助细胞的能力，制约着体内免疫反应的历程，因而DC已成为机体免疫应答的中心环节。DC最大特点是能够显著刺激初始T细胞进行增殖，而巨噬细胞和B细胞仅能刺激己活化或记忆性T细胞，所以DC在免疫应答诱导中具有独特地位，是机体免疫应答的始动者。成熟DC可高表达CD80、CD83、CD86和HLA-DR的细胞表面分子。干扰素λ(interferon-λ，IFN-λ)是2003年由美国科学Kotenko和Sheppard等运用生物信息学手段以人的基因组同发现的一类新型干扰素，包括IFN-λ_1(IL-29)，IFN-λ2(IL-28A)和IFN-λ3(IL-28B)。近年探讨发现干扰素λ主要来源于DC并且对DC的成熟和功能具有重要调节作用。探讨发现IFN-λ_1能诱导DC的成熟以及增强它的抗原提呈功能。关于报道干扰素λ在丙型病毒性肝炎中的探讨进展很多，但在慢性HBV感染历程中对DC功能的影响在国内外报道很少。本探讨旨在探讨干扰素λ_1对HBV慢性感染青少年患者免疫耐受期与免疫清除期外周血来源DC细胞功能的影响及临床作用。策略：选取青少年慢性HBV感染者34例，其中免疫耐受期18例，免疫清除组16例，健康对照10例。所有慢性乙型肝炎患者均行肝组织活检，炎症分级为G0~G4，纤维化程度分为S0~S4。1体外DC培养：留取受试者和正常者新鲜外周静脉血，密度梯度离心法分离PBMC，无血清培养基悬浮沉淀细胞，收集贴壁细胞分三组：单独组(重组人白介素-29)；正常培养组（重组人白介素-4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）；IFN-λ_1组（重组人白介素-4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素-29）共同培养，均培养7天。2培养历程中在倒置显微镜下观察各组DC成熟状态3收集成熟DC用PE-DC80、PE-CD83、PE-CD86和PE-HLA-DR抗体进行染色，流式细胞仪检测表达情况。4收集细胞培养上清液，ELISA法检测INF-γ，IL-12分泌情况。结果：1DC形态学观察：PBMC经2-4小时贴壁后，可见部分细胞悬浮，多数为B细胞和外周血DC；单独组（IL-29）在培养第2、5和7天后未见贴壁细胞有形态转变，延长至11天后仍未变化；正常培养组（IL-4、GM-C）与IFN-λ_1组（IL-4、GM-C和IL-29）培养过夜后贴壁细胞数量有所减少，细胞体积小；诱导培养2天后可见贴壁细胞伸展，形态显著转变，培养5天后细胞形态不规则，粗细不等的毛刺多而密，成典型的DC形态；第7天DC表面突起更加显著；在IFN-λ_1组（IL-4、GM-C和IL-29）可见细胞成簇，并且大量突起交织。2流式细胞术检测细胞表面标志结果：培养7天后，免疫耐受组和免疫清除组DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达均低于正常对照组，差别具有统计学作用（p0.01）；免疫清除组DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达高于免疫耐受组，差别具有统计学作用（p0.01）；经过IL-29诱导后DC高表达CD80、CD83、CD86和HLA-DR并且免疫清除期患者的表达显著高于免疫耐受期，差别具有统计学作用（p0.05）3细胞培养上清液检测结果：免疫清除期比免疫耐受期患者DC分泌IL-12和IFN-γ功能强，但均显著低于正常人，差别具有统计学作用（p0.05）。通过IL-29联合培养诱导后可显著提升DC分泌IL-12和IFN-γ细胞因子功能，差别具有统计学作用（p0.05）。结论：1利用患者外周血获取PBMC，运用贴壁培养法去除悬浮细胞可成功获得DC。单独加入IL-29培养不能诱导DC成熟，加入IL-4、GM-C联合培养后能显著推动和诱导外周血来源DC的成熟。2慢性HBV感染者中免疫耐受期患者DC功能较正常人和免疫清除期患者显著降低，DC功能的缺失是青少年HBV感染后免疫耐受的理由之一。3经体外IFN-λ_1处理后慢性HBV感染者中免疫耐受期和免疫清除患者的DC功能显著增强，IFN-λ_1在体外能推动DC成熟和调节DC的抗原提呈功能，IFN-λ_1具有很强的免疫调节能力。IFN-λ_1有可能成为治疗慢性乙型肝炎的新选择。关键词：乙型肝炎病毒论文慢性乙型肝炎论文干扰素-λ1论文树突状细胞论文细胞培养论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要4-7
英文摘要7-11
前言11-13
材料与策略13-17
结果17-19
附图19-38
附表38-40
讨论40-44
结论44-45
参考文献45-49
综述 干扰素-λ在病毒性肝炎中的探讨进展49-64
参考文献58-64
致谢64-65
个人简历65
摘要：目的：现探讨认为乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）主要通过宿主免疫应答与免疫反应引起肝细胞的损伤和破坏，由于宿主的免疫反应不同HBV感染所引起的临床体现和转归各不相同。根据免疫学特点，婴幼儿期HBV感染自然历程在临床上可以分为四期，①免疫耐受期；②免疫清除期；③非活动HBV携带状态；④再活动期，目前HBV感染慢性化的确切机制尚不明确。HBV感染后树突状细胞(dendritic cell，DC)抗原提呈功能低下可能是HBV感染慢性化的理由之一。DC是目前所知机体内功能最强的APC(antigen-presenting cell，APC)，DC作为机体内免疫反应的始动、调节和效应者，具有激括CD8+CTL和CD4+T辅助细胞的能力，制约着体内免疫反应的历程，因而DC已成为机体免疫应答的中心环节。DC最大特点是能够显著刺激初始T细胞进行增殖，而巨噬细胞和B细胞仅能刺激己活化或记忆性T细胞，所以DC在免疫应答诱导中具有独特地位，是机体免疫应答的始动者。成熟DC可高表达CD80、CD83、CD86和HLA-DR的细胞表面分子。干扰素λ(interferon-λ，IFN-λ)是2003年由美国科学Kotenko和Sheppard等运用生物信息学手段以人的基因组同发现的一类新型干扰素，包括IFN-λ_1(IL-29)，IFN-λ2(IL-28A)和IFN-λ3(IL-28B)。近年探讨发现干扰素λ主要来源于DC并且对DC的成熟和功能具有重要调节作用。探讨发现IFN-λ_1能诱导DC的成熟以及增强它的抗原提呈功能。关于报道干扰素λ在丙型病毒性肝炎中的探讨进展很多，但在慢性HBV感染历程中对DC功能的影响在国内外报道很少。本探讨旨在探讨干扰素λ_1对HBV慢性感染青少年患者免疫耐受期与免疫清除期外周血来源DC细胞功能的影响及临床作用。策略：选取青少年慢性HBV感染者34例，其中免疫耐受期18例，免疫清除组16例，健康对照10例。所有慢性乙型肝炎患者均行肝组织活检，炎症分级为G0~G4，纤维化程度分为S0~S4。1体外DC培养：留取受试者和正常者新鲜外周静脉血，密度梯度离心法分离PBMC，无血清培养基悬浮沉淀细胞，收集贴壁细胞分三组：单独组(重组人白介素-29)；正常培养组（重组人白介素-4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）；IFN-λ_1组（重组人白介素-4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素-29）共同培养，均培养7天。2培养历程中在倒置显微镜下观察各组DC成熟状态3收集成熟DC用PE-DC80、PE-CD83、PE-CD86和PE-HLA-DR抗体进行染色，流式细胞仪检测表达情况。4收集细胞培养上清液，ELISA法检测INF-γ，IL-12分泌情况。结果：1DC形态学观察：PBMC经2-4小时贴壁后，可见部分细胞悬浮，多数为B细胞和外周血DC；单独组（IL-29）在培养第2、5和7天后未见贴壁细胞有形态转变，延长至11天后仍未变化；正常培养组（IL-4、GM-C）与IFN-λ_1组（IL-4、GM-C和IL-29）培养过夜后贴壁细胞数量有所减少，细胞体积小；诱导培养2天后可见贴壁细胞伸展，形态显著转变，培养5天后细胞形态不规则，粗细不等的毛刺多而密，成典型的DC形态；第7天DC表面突起更加显著；在IFN-λ_1组（IL-4、GM-C和IL-29）可见细胞成簇，并且大量突起交织。2流式细胞术检测细胞表面标志结果：培养7天后，免疫耐受组和免疫清除组DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达均低于正常对照组，差别具有统计学作用（p0.01）；免疫清除组DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达高于免疫耐受组，差别具有统计学作用（p0.01）；经过IL-29诱导后DC高表达CD80、CD83、CD86和HLA-DR并且免疫清除期患者的表达显著高于免疫耐受期，差别具有统计学作用（p0.05）3细胞培养上清液检测结果：免疫清除期比免疫耐受期患者DC分泌IL-12和IFN-γ功能强，但均显著低于正常人，差别具有统计学作用（p0.05）。通过IL-29联合培养诱导后可显著提升DC分泌IL-12和IFN-γ细胞因子功能，差别具有统计学作用（p0.05）。结论：1利用患者外周血获取PBMC，运用贴壁培养法去除悬浮细胞可成功获得DC。单独加入IL-29培养不能诱导DC成熟，加入IL-4、GM-C联合培养后能显著推动和诱导外周血来源DC的成熟。2慢性HBV感染者中免疫耐受期患者DC功能较正常人和免疫清除期患者显著降低，DC功能的缺失是青少年HBV感染后免疫耐受的理由之一。3经体外IFN-λ_1处理后慢性HBV感染者中免疫耐受期和免疫清除患者的DC功能显著增强，IFN-λ_1在体外能推动DC成熟和调节DC的抗原提呈功能，IFN-λ_1具有很强的免疫调节能力。IFN-λ_1有可能成为治疗慢性乙型肝炎的新选择。关键词：乙型肝炎病毒论文慢性乙型肝炎论文干扰素-λ1论文树突状细胞论文细胞培养论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要4-7
英文摘要7-11
前言11-13
材料与策略13-17
结果17-19
附图19-38
附表38-40
讨论40-44
结论44-45
参考文献45-49
综述 干扰素-λ在病毒性肝炎中的探讨进展49-64
参考文献58-64
致谢64-65
个人简历65