探究单色光530nm单色光照射对体外培养Müller细胞生长及细胞因子表达影响

论文导读：化学法检测530nm单色光在不同光照度光照意义后视网膜Müller细胞促凋亡蛋白Bax和抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果1.光学显微镜下观察：视网膜Müller细胞经不同光照度意义后，其细胞形态均呈典型的多角形，细胞大小均匀，边界清晰。125LUX、250LUX组与对照组对比生长曲线无显著转变（p=0.117），500LUX组光照12h、24h后生长曲线增长减缓
摘要：探讨背景与目的我国近视眼的发生率呈逐年增高走势，已成为严重的社会公共不足。目前对近视眼的病因及发病机制尚不完全清楚。多年来用于近视眼探讨的动物模型主要有形觉剥夺和光学离焦性动物模型。近年来探讨表明单色光照射可诱导动物产生近视眼，可能成为一种新的近视眼模型，其诱发机制尚不清楚。视网膜Müller细胞是视网膜上最主要的神经胶质细胞之一，通过合成与分泌多种细胞因子参与视网膜的病理、生理历程。形觉剥夺性近视眼动物模型的探讨表明，视网膜Müller细胞可能通过转变细胞因子的合成与分泌，参与近视眼的形成。在单色光照射诱导近视眼发生的历程中视网膜Müller细胞是否发挥意义，从及它所分泌的细胞因子会产生怎样的转变，体外实验尚无此方面的探讨。本实验采取单色光照射体外培养的永生化大鼠视网膜Müller细胞，初步探讨530nm单色光对Müller细胞生长及细胞因子表达的变化。办法1.光镜下观察视网膜Müller细胞在不同光照度意义下的细胞形态，MTT比色法检测视网膜Müller细胞在不同光照度意义下的生长曲线，流式细胞术（FCM）检测不同光照度意义后视网膜Müller细胞的细胞周期。2.逆转录聚合酶连反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western-Blot）分别检测530nm单色光在不同光照度意义Müller细胞后，转化生子因子-β1（tranorming growthfactor-beta1, TGF-β1）的表达。3. RT-PCR和Western-Blot分别检测530nm单色光在不同光照度意义Müller细胞后，诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表达。4. RT-PCR、Western-Blot和免疫细胞化学染色法检测530nm单色光在不同光照度光照Müller细胞后，碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的表达。5.免疫细胞化学法检测530nm单色光在不同光照度光照意义后视网膜Müller细胞促凋亡蛋白Bax和抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果1.光学显微镜下观察：视网膜Müller细胞经不同光照度意义后，其细胞形态均呈典型的多角形，细胞大小均匀，边界清晰。125LUX、250LUX组与对照组对比生长曲线无显著转变（p=0.117），500LUX组光照12h、24h后生长曲线增长减缓（p12=0.013，p24=0.001）。流式细胞术检测各光照组细胞G2/G1值均降低，500LUX组显著降低，与对照组、250LUX组对比差别具有统计学作用（p=0.028，p=0.038）。2. TGF-β1的表达：RT-PCR结果显示，250LUX组TGF-β1的表达明显高于500LUX组（p=0.006）；Western-Blot结果显示，125LUX、250LUX、500LUX组A值均降低，从500LUX组下降最为明显，组间对比差别具有统计学作用（F=31.816，p＜0.01）。3. iNOS的表达：RT-PCR结果显示，125LUX、250LUX组iNOS mRNA表达依次上调，250LUX组与对照组对比差别具有统计学作用（p=0.001），500LUX表达下调（p=0.000）；Western-Blot结果显示， iNOS蛋白表达，125LUX、250LUX、500LUX组A值均降低，从250LUX组下降最为明显，组间对比差别具有统计学作用（F=114.989，p＜0.01）。4. bFGF的表达：RT-PCR结果显示，125LUX、250LUX组bFGF mRNA的表达依次上调（p=0.020, p=0.000），500LUX组表达下调（p=0.005）；Western-Blot结果显示，bFGF蛋白表达，组间对比差别具有统计学作用（F=185.604，p0.001），与对照组对比，250LUX和500LUX光照组细胞bFGF表达上调（p=0.000, p=0.022），从250LUX光照组上调最显著；免疫细胞化学染色，250LUX组与500LUX组Müller细胞胞质中可见大量棕褐色颗粒状物质，阳性表达率显著高于对照组，差别具有统计学作用（F=205.984，p＜0.01）。5.凋亡蛋白表达：促凋亡蛋白Bax的论文导读：
表达，实验组Müller细胞胞膜上可见大量棕褐色颗粒状物质，阳性表达显著高于对照组，差别具有统计学作用（F=41.955，p＜0.01）；抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达，实验组与对照组Müller细胞胞质及胞膜中均未见阳性表达。结论1.530nm单色光对体外培养Müller细胞的细胞周期及细胞因子的表达产生影响。2.光照强度是影响近视眼发生进展的一个重要因素。关键词：单色光论文Müller细胞论文近视论文转化生长因子-β1论文诱导型一氧化氮合成酶论文碱性成纤维细胞生长因子论文
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Abstract7-11
引言11-14
参考文献12-14

1.材料与办法14-23

1.1 材料14-15

1.2 仪器15-16

1.3 办法16-23

2.数据处理23-24

3.结果24-40

4.讨论40-43

参考文献43-45
全文总结45-46
综述46-56
参考文献52-56
缩略词表56-57
攻读学位期间公开发表的论文57-58
致谢58-59