论放线菌放线菌菌株M25鉴定及其次级代谢产物活性大专

论文导读：.3%的液体培养基，28℃、260rpm培养条件下发酵96h所得发酵液的抑菌活性最强。对菌株M25发酵液进行热稳定性、酸碱稳定性及光稳定性的探讨，结果表明：菌株M25发酵液分别在60℃、70℃处理30min和60min，依然保持良好的抑菌活性；而在80℃处理30min后，抑菌活性大幅度降低，在90℃处理60min后活性消失；当pH在6-8的范围内抑菌活性相对稳
摘要：从一株以土壤中分离得到的放线菌菌株M25为探讨对象，综合形态特点、培养特点及16SrDNA序列分析等结果，参照《链霉菌鉴定手册》，初步鉴定放线菌菌株M25为链霉菌属中的灰红紫类群。对菌株M25的发酵制备历程进行探讨，确定培养基配方为大米粉0.5%、KNO30.2%、燕麦1%、MgSO40.05%、葡萄糖0.5%、NaCl0.1%、可溶性淀粉3%、K2HPO40.1%、酵母粉0.2%、CaCO30.3%、豆饼粉0.3%的液体培养基，28℃、260rpm培养条件下发酵96h所得发酵液的抑菌活性最强。对菌株M25发酵液进行热稳定性、酸碱稳定性及光稳定性的探讨，结果表明：菌株M25发酵液分别在60℃、70℃处理30min和60min，依然保持良好的抑菌活性；而在80℃处理30min后，抑菌活性大幅度降低，在90℃处理60min后活性消失；当pH在6-8的范围内抑菌活性相对稳定，抑菌圈直径基本没有变化，当pH为12时，抑菌活性显著降低；紫外和日光下连续照射9h抑菌圈直径下降幅度分别不超过9％和3％，保持了较高的抑菌活性。采取生长速率法测定菌株发酵液对供试的9种植物病原菌均有很强的抑制效果，其中对和谷镰刀菌、核盘菌、致病疫霉、辣椒疫霉、茄链格孢、褐孢霉、匍枝根霉的抑制效果最为显著，菌丝生长抑制率均达到80%从上，表明该菌株发酵液对植物病原菌具有广谱的抑制意义。采取盆栽检测法，对菌株M25发酵液进行活体药效的测定，结果表明：发酵液原液极为5倍稀释液对番茄灰霉病的防治效果分别为40.73％和20.98％。使用大孔树脂、SephadexLH-20等办法对发酵液中生物活性物质进行初步分离纯化，并用分析型高效液相色谱验证此分离纯化技术所得样品的纯度较高。关键词：放线菌论文链霉菌属论文发酵液论文次级代谢产物论文稳定性论文生物活性论文
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Abstract4-9
1 引言9-15

1.1 农用抗生素探讨的作用9-10

1.2 放线菌发酵代谢产物的农抗运用价值和作用10-11

1.3 放线菌的分类鉴定办法11-12

1.3.1 经典分类11

1.3.2 化学分类11-12

1.3.3 基因型分类12

1.3.4 多相分类12

1.4 生物活性测定12-13

1.4.1 离体生物活性测定13

1.4.2 活体药效测定13

1.5 发酵代谢产物的分离纯化技术13-14

1.6 探讨的内容、作用及技术路线14-15

2 材料与办法15-24

2.1 试验材料15-17

2.

1.1 供试菌株15

2.

1.2 主要试剂15

2.

1.3 培养基15-16

2.

1.4 试验仪器和设备16-17

2.2 试验办法17-24

2.1 菌种鉴定17-21

2.2 发酵液制备的探讨21

2.3 代谢产物稳定性的探讨21-22

2.4 生物活性测定22-23

2.5 生物活性物质初步分离纯化23-24

2.6 数据处理与分析24

3 试验结果与分析24-35

3.1 放线菌菌株M25菌种鉴定24-28

3.

1.1 形态观察24-25

3.

1.2 培养特点25

3.

1.3 16SrDNA鉴定结果25-28

3.2 发酵液制备历程的探讨28-30
3.

2.1 不同发酵时期发酵液中菌丝体形态28-29

3.

2.2 发酵时间与发酵液生物活性的联系29-30

3.3 发酵液稳定性的探讨30-32

3.1 温度对发酵液稳定性的影响30-31

3.2 酸碱对发酵液稳定性的影响31

3.3 光照对发酵液稳定性的影响31-32

3.4 生物活性测定32-34

3.4.1 离体生物活性测定结果32-33

3.4.2 活体药效测定结果33-34

3.5 生物活性物质分离纯化结果34-35

3.5.1 粗提物薄层层析活性验证结果34-35

3.5.2 样品纯度检测结果35

4 讨论35-37

4.1 放线菌的分类鉴定35

4.2 放线菌发酵历程的探讨35-36

4.3 放线菌发酵液稳定性的探讨36

4.4 放线菌发酵液生物活性的测定36

4.5 放线菌生物活性物质分离纯化36-37

5 结论37-38
致谢38-39
参考文献39-42
作者介绍42