探索载体构建pEGFPN1-TRAIL真核表达载体实验

论文导读：
摘要：目的：构建含人TRAIL114-281AA基因片段的真核表达载体pEGFPN1-TRAIL，同时从空载体pEGFPN1质粒为对照，转染人肝癌细胞系HepG2细胞，初步探讨TRAIL基因是否能在HepG2细胞中过表达。为进一步的体外探讨及体内探讨奠定基础。办法：从FL15116质粒为DNA模板，PCR法扩增TRAIL114-281AA基因片段。胶回收试剂盒回收目的基因TRAIL片段，连接TRAIL片段与PMD18-T克隆载体，连接产物转化体会态细胞DH5，挑取单克隆菌落培养，提取质粒，经酶切及PCR鉴定后，送TARA公司测序，将测序正确的质粒命名PMD18-T-TRAIL，HindⅢ和BamHI限制性内切酶分别酶切质粒PMD18-T-TRAIL和pEGFPN1，胶回收TRAIL片段与pEGFPN1长片段，将TRAIL片段插入pEGFPN1长片段，经PCR及酶切鉴定后，将重组质粒pEGFPN1-TRAIL及空载体pEGFPN1采取脂质体转染法转染至HepG2细胞，RT-PCR法检测TRAIL基因的表达状况。结果：PCR扩增出TRAIL114-281AA基因片段，与PMD18-T连接产物PMD18-T-TRAIL重组质粒经PCR及酶切鉴定均得到一条约500bp大小的目的基因条带，经基因测序，比对测序结果序列正确且均无突变。TRAIL片段与pEGFPN1长片段连接产物pEGFPN1-TRAIL重组质粒，经PCR及酶切鉴定得到一条约500bp大小的目的基因条带。将pEGFPN1-TRAIL重组质粒成功转染至人肝癌细胞系HepG2细胞，荧光显微镜下观察到细胞在蓝色激发光下发绿色荧光，RT-PCR法检测出TRAIL片段在肝癌细胞系中高表达。结论：成功构建了表达人TRAIL114-281AA基因片段的真核表达载体pEGFPN1-TRAIL重组质粒。脂质体法分别转染pEGFPN1-TRAIL重组质粒及空载体pEGFPN1质粒入HepG2细胞后，RT-PCR检测实验组TRAIL基因在HepG2细胞中过表达。为下一步探讨TRAIL114-281AA基因片段对肝癌意义的体外功能探讨及体内实验奠定了基础，TRAIL基因有望成为治疗肝癌的一种新型基因疗法。关键词：TRAIL论文真核表达载体论文HepG2细胞论文
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摘要5-7
Abstract7-9
目录9-10
前言10-12
材料与办法12-26
结果26-28
讨论28-29
结论29-30
附图30-35
附表35-41
参考文献41-45
综述：TRAIL极为受体与HCC治疗的探讨发展45-58
摘要45-47
1 TRAIL基因极为受体的功能47-48
2 靶向TRAIL治疗HC8-51
3 TRAIL基因载体的构建治疗HCC51-53
4 展望53-55
参考文献55-58
附录58-59
个人简历59
攻读学位期间发表的学术论文59