浅论染色体肢带型肌营养不良—家系8例sarcoglycan基因序列

论文导读：.3.4DNA扩增30-323.3.5回收PCRn产物与PMD-18Tvector连接323.3.6连接产物转化大肠杆菌32-333.3.7重组质粒提取33-343.3.8PCR验证重组质粒343.3.9质粒交由上海生工生物工程有限公司进行测序343.3.10测序结果比对运用DNAMANVersion5.2进行核酸及蛋白质序列比对34-35第4章结果35-41

4.1获得sarcoglycan血液全

摘要：目的：肢带型肌营养不良症（Limb-girdle muscular dystrophy，LGMD）是一种遗传方式和临床症状都高度不均一的常染色体遗传性肌营养不良症,主要体现为进行性的肩胛带和骨盆带肌无力和萎缩，仅有少数累及延髓肌及呼吸肌，属于进行性肌营养不良（Progressive muscular dystrophy，PMD）的一种。LGMD有两个分型，从LGMD1和LGMD2分别表示常染色体显性遗传(1型)和常染色体隐性遗传(2型)。LGMD2又可分为A～K11个亚型，其中根据临床症状又分轻型和重型，重型的为C～F，编码γ-、α-、β-、δ-sarcoglycan。本探讨对一个疑似为肢带型肌营养不良症（LGMD2型）（重型）的家系进行sarcoglycan外显子测序，寻找突变位点，指导基因快速筛选及快速确诊，降低患儿的出生率。办法：探讨对象来自一个吉林省榆树市近亲结婚的怀疑LGMD家系，构建家系图并进行家系分析。根据临床体现及遗传模式考虑LGMD2型（重型）。抽取全基因组DNA，通过PCR进行扩增，对PCR扩增产物进行基因序列分析。结果：家系分析证明该家系符合常染色体隐性遗传，对sarcoglycan外显子进行测序发现δ-sarcoglycan exon3有突变位点，可能是导致肢带型肌营养不良的致病性突变位点。综上，肢带型肌营养不良类型考虑为LGMD2F的可能性较大。结论：建立了对LGMD2型sarcoglycan基因检测的办法，运用于LGMD的早期筛查及快速确诊，为产前诊断提供可靠的依据，为今后的进一步基因治疗作出了基础探讨。近亲结婚往往是导致常染色体隐性遗传病的重要因素，避开近亲结婚可防止此类疾病的发生。关键词：肢带型肌营养不良论文常染色体隐性遗传论文sarcoglycan论文DNA测序论文外显子论文
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Abstract5-9
第1章 引言9-10
第2章 综述10-24
第1节 肢带型肌营养不良症10-19
2.

1.1 概述10-12

2.

1.2 肌营养不良症分子学论述12-14

2.

1.3 临床体现、实验室检查及发病机制14-18

2.

1.4 治疗18-19

第2节 基因、基因突变与基因诊断19-22

2.1 基因19

2.2 基因突变19-20

2.3 基因诊断20-22

第3节 单基因遗传病22-24

2.3.1 概念22

2.3.2 常染色体隐性遗传22

2.3.3 近亲结婚与常染色体隐性遗传22-24

第3章 资料与办法24-35
第1节 探讨对象24-26
第2节 实验材料26-27
3.

2.1 试剂26

3.

2.2 试剂盒26

3.

2.3 相关仪器26-27

第3节 实验办法27-35

3.1 全基因组的提取27-28

3.2 人的 sarcoglycan 外显子序列的定位及获取28

3.3 引物28-30

3.4 DNA 扩增30-32

3.5 回收 PCRn 产物与 PMD-18T vector 连接32

3.6 连接产物转化大肠杆菌32-33

3.7 重组质粒提取33-34

3.8 PCR 验证重组质粒34

3.9 质粒交由上海生工生物工程有限公司进行测序34

3.3.10 测序结果比对运用 DNAMAN Version

5.2 进行核酸及蛋白质序列比对34-35

第4章 结果35-41

4.1 获得 sarcoglycan 血液全基因组35

4.2 对 4 种 sarcoglycan exon 经 PCR 扩增后进行测序发现δ-sarcoglycan exon3 有突变点35-41
第5章 讨论41-44
第6章 结论44-45
参考文献45-48
作者介绍及在学期间所取得的科研成果48-49
致谢49