简析草乌二萜生物碱分离纯化及中药指纹图谱

论文导读：
摘要：二萜生物碱是乌头属、翠雀属、飞燕草属及绣线菊属植物中的活性成分,具有镇痛、抗炎和抗心律失常等生理活性意义。以植物中提取分离二萜生物碱一直是科研工作者关注的课题。本论文采取反相高效液相制备色谱分离纯化二萜生物碱,并分别采取HPLC-MS技术和1HNMR技术,建立了草乌等药材的质量制约办法。具体内容如下：在反相高效液相色谱法中,生物碱的色谱峰拖尾是一种长期有着的现象,它将降低生物碱的分离分析效果。本论文探讨了色谱柱和流动相对二萜生物碱分离的影响,经筛选确定色谱柱为HCEC18,流动相为0.2%甲酸水溶液-乙腈,二萜生物碱的拖尾现象得从有效消除,首次在酸性流动相且不加盐的条件下,从反相高效液相制备色谱分离纯化二萜生物碱。从草乌中二萜生物碱为目标化合物,对新办法进行分离验证,取得较好的实验结果：以草乌粗产品中分离出4个二萜生物碱,其纯度均高于98.0%。通过NMR和MS对其进行了结构鉴定,确定2个已知二萜生物碱：乌头碱和14-苯甲酰乌头原碱,同时发现2个新二萜生物碱：1,15-dimethoxy-3-hydroxy-14-benzoyl-16-ketoneopne和8-ethoxyl-14-Benzoyl-15-methyoxyaconine。当草乌中二萜生物碱和其它组分同时检测,非二萜生物碱很难一起被检测出,致使样品信息不完整。本论文采取HPLC-MS技术,建立了草乌的指纹图谱。本办法能有效增多指纹图谱的信息量,更准确反映样品的特点。同时用中药指纹图谱相似度评价软件对不同来源的草乌极为炮制品进行可量化的分析,得到其相似度值,进而对样品进行有效的鉴定,绘制特点指纹曲线,通过聚类分析来直观显示样品的近似程度和差别。结果显示本指纹图谱具有一定的专属性,能够反映草乌极为炮制品质量的差别。建立了一种基于大孔吸附树脂法的中药1HNMR指纹图谱办法。采取大孔吸附树脂富集草乌等药材中的有效成分,从1HNMR为检测手段,结合主成分分析和体系聚类分析,进一步评价样品的质量。本指纹图谱办法具有较高的重复性和特点性,能够准确反映中药中有效成分的分布。关键词：二萜生物碱论文HPLC-MS论文~1H论文NMR论文中药指纹图谱论文草乌论文
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Abstract5-9
引言9-11
1 文献综述11-25

1.1 二萜生物碱11-18

1.1 二萜生物碱分类11-16

1.2 二萜生物碱的药理意义及构效联系16-18

1.2 反相高效液相制备色谱法在生物碱分离中的探讨18-20

1.2.1 固定相19

1.2.2 流动相19-20

1.3 中药指纹图谱20-24

1.3.1 中药指纹图谱的探讨作用20

1.3.2 中药指纹图谱的分析办法20-21

1.3.3 HPLC-MS指纹图谱21

1.3.4 ~1H NMR指纹图谱21-24

1.4 探讨背景及作用24-25

2 大孔吸附树脂法分离草乌中二萜生物碱的工艺探讨25-39

2.1 试剂与仪器25-26

2.2 实验办法26-31

2.1 草乌提取液的制备26

2.2 标准品乌头碱的制备26

2.3 二萜生物碱的含量测定办法26-28

2.4 乌头碱的HPLC分析办法28-29

2.5 大孔吸附树脂实验29-31

2.3 结果与讨论31-39

2.3.1 草乌提取液中二萜生物碱的含量测定31

2.3.2 乌头碱的HPLC分析31-33

2.3.3 色谱柱的确定33-34

2.3.4 大孔吸附树脂的筛选34-35

2.3.5 树脂动态吸附和剖析条件的选择35-37

2.3.6 实验结果的验证37-39

3 二萜生物碱的反相高效液相制备色谱分离办法探讨39-61

3.1 试剂与仪器39

3.2 实验办法39-41

3.

2.1 草乌提取液的制备39-40

3.

2.2 大孔吸附树脂富集草乌中二萜生物碱40

3.

2.3 高效制备液相色谱法分离纯化化合物140

3.

2.4 高效制备液相色谱法分离纯化化合物2-440-41

3.3 结果与讨论41-59

3.1 反相高效液相制备色谱分离纯化二萜生物碱41-42

3.2 化合物的结构鉴定42-59

3.4 小结59-61

4 草乌的HPLC-MS指纹图谱探讨61-87

4.1 试剂与仪器61-62

4.2 实验办法62-65

4.

2.1 供试品制备62-63

4.

2.2 HPLC-MS分析办法63-65

4.3 结果与讨论65-86
4.

3.1 提取办法单因素的考察65-68

4.

3.2 样品中总二萜生物碱的含量测定68-69

4.

3.3 色谱条件的考察69-70

4.

3.4 草乌中二萜生物碱的HPLC-MS分析70论文导读：

-76
4.

3.5 办法学的考察76

4.

3.6 指纹图谱的建立76-83

4.

3.7 相似度评价83-84

4.

3.8 特点指纹曲线84-85

4.

3.9 聚类分析85-86

4.4 小结86-87
5 草乌的~1HNMR指纹图谱探讨87-95

5.1 试剂与仪器87

5.2 实验办法87-88

5.

2.1 中药总特点提取物A的制备87

5.

2.2 中药总特点提取物B的制备87

5.

2.3 草乌的~1H NMR分析办法87-88

5.3 结果与讨论88-93
5.

3.1 中药总特点提取物A的主成分分析88-89

5.

3.2 中药总特点提取物B的主成分分析89-93

5.

3.3 聚类分析93

5.4 小结93-95
6 基于大孔吸附树脂法的中药~1HNMR指纹图谱探讨95-106

6.1 试剂与仪器95

6.2 实验办法95-96

6.

2.1 中药总特点提取物的制备95-96

6.

2.2 ~1H NMR分析办法96

6.3 结果与讨论96-105
6.

3.1 中药总特点提取物96-98

6.

3.2 延胡索的~1H NMR指纹图谱建立98-103

6.

3.3 苦地丁的~1H NMR指纹图谱103-104

6.

3.4 紫花地丁的~1HNMR指纹图谱104-105

6.

3.5 混淆药材的鉴别105

6.

3.6 同属植物的鉴别105

6.4 小结105-106
7 结论与展望106-107

7.1 结论106

7.2 展望106-107

创新点107-108
附录108-112
参考文献112-119
附图119-123
致谢123-124
作者介绍124
攻读博士学位期间科研项目及科研成果124-126