简谈佐剂人参茎叶皂甙提高口蹄疫和新城疫油佐剂疫苗免疫效果

论文导读：
摘要：疫苗是畜牧生产中制约动物传染病的重要工具,但在临床实际中有着疫苗免疫失败和油佐剂疫苗注射困难等现象。我们前期的探讨表明,GSLS和油佐剂有协同意义,能提升疫苗的免疫效果。本文在此基础上,进一步探讨GSLS和油佐剂协同意义增强疫苗免疫效果的合适比例,观察GSLS与油佐剂组合增强猪FMD疫苗和鸡ND疫苗的免疫效果,并对油佐剂疫苗添加GSLS后的黏滞度进行了观察。探讨结果可为运用GSLS改善动物疫苗提供参考。1.FMD疫苗中添加不同剂量GSLS对小鼠免疫反应的影响目的：观察GSLS对小鼠注射FMD油佐剂疫苗免疫佐剂意义,筛选GSLS对FMD由乳剂疫苗免疫佐剂意义的合适浓度。办法：将56只雌性ICR小鼠随机分为7组,组1小鼠皮射0.1ml的FMDV抗原+0.1ml生理盐水,组2-7每组小鼠腹部皮下分别注射含不同浓度GSLS(0、2、4、6、8和10μg/0.2ml)的FMD由乳剂疫苗,小鼠免疫2次,间隔3周。二免后2周采血,用双抗夹心ELISA办法检测血清中FMDV特异性IgG水平。结果：疫苗中添加4、6、8和10μg的GSLS能明显提升小鼠血清中FMDV特异性IgG水平(P0.05),其中从4μg组的FMDV特异性IgG水平最高。结论：FMD油乳剂疫苗中添加GSLS可明显提升小鼠的FMDV特异性IgG水平,提升的幅度呈剂量依赖联系,从4μg组的幅度最高。2. GSLS对低剂量抗原FMD油乳剂疫苗免疫效果的影响目的：对比FMD全抗原剂量油乳剂疫苗和含GSLS的低剂量抗原油乳剂疫苗对小鼠的免疫效果。办法：将72只ICR小鼠随机分成9组,每组8只小鼠。各组动物皮射的实验疫苗组成如下：(1)100μl的FMDV抗原+100μl生理盐水；(2)100μl抗原+100μl油佐剂Oil#10；(3)100μl抗原+100μl油佐剂MC52；(4)～(6)100μl,50μl或25μl抗原+100μl油佐剂Oil#10+GSLS(4μg);(7)～(9)100μl,50μl或25μl抗原+100μl油佐剂MC52+GSLS(4μg)。免疫2次,间隔3周,每次注射的体积为200μl。二免后2周采血,并取脾脏制备脾脏淋巴细胞悬液。用双抗夹心ELISA检测血清中FMDV特异性IgG水平,用MTT法检测经ConA、LPS和FMDV刺激后的淋巴细胞增殖指数,并用RT-PCR办法检测脾脏淋巴细胞经FMDV刺激后的IFN-y和IL-4从及转录因子T-bet和GATA-3中mRNA表达水平。结果：含GSLS的油佐剂疫苗诱导的特异性IgG效价明显高于不含GSLS的油佐剂疫苗(P0.05)；含GSLS的半剂量抗原的油乳剂疫苗诱导的血清特异性IgG效价高于不含GSLS的全剂量抗原油乳剂疫苗,但无统计学差别明显(P0.05)；含GSLS的四分之一剂量抗原的油乳剂疫苗诱导的血清特异性IgG效价低于不含GSLS的全剂量抗原油乳剂疫苗,但无统计学差别(P0.05)。此外,油乳剂疫苗中添加GSLS后,增强了小鼠脾脏淋巴细胞受Con A、 LPS和FMDV刺激产生增殖能力(P0.05),提升脾脏淋巴细胞受FMDV刺激后IFN-γ、IL-4、T-bet和GATA-3的(?)nRNA表达水平(P0.05)。结论：油佐剂疫苗中添加GSLS能明显增强小鼠的体液和细胞免疫应答,使仅含一半抗原剂量疫苗诱导的IgG水平到含全剂量抗原诱导的IgG水平。3.FMD油佐剂疫苗中添加不同剂量GSLS对猪的免疫效果目的：观察FMD油佐剂疫苗添加GSLS寸猪的免疫效果。办法：试验一：将48只猪随机分成6组,每头猪颈部分别皮射含GSLS为0μg、10μg、20μg、40μg、80μg和160μg的FMD疫苗,免疫2次,间隔3周,每次注射疫苗剂量2ml。在免疫前,免疫后第3、6周前腔静脉采血,用正向间接血凝法检测血清中IHA水平,并分离淋巴细胞,用MTT法检测淋巴细胞增殖。试验二：将24头猪随机分成4组,每头猪颈部皮下分别注射含不同佐剂FMD疫苗(Oil#10,MC52, Oil#10+40μg GSLS, MC52+40μg GSLS),免疫1次,注射体积为2ml。于免疫前,免疫后第3、6周前腔静脉采血,检测血清中IHA效价,IgG和IgG亚类水平。结果：试验一：免疫后3、6周,每个剂量的FMD疫苗论文导读：当吐温浓度为为1.5%和2.0%时,添加4Pg/剂量GSLS能明显降低油佐剂疫苗(油/水=2：1)流动时间(P0.05),说明油乳剂疫苗中添加GSLS能降低疫苗的黏滞性。关键词：免疫佐剂论文油佐剂疫苗论文人参茎叶皂甙论文口蹄疫疫苗论文新城疫疫苗论文黏滞性论文本论文由www.7ctime.com,需要可从关
中添加40μg GSLS能明显提升猪特异性IHA效价(P0.05),外周血淋巴细胞受FMDV刺激后产生的增殖能力明显升高(P0.05),而受Con A刺激后产生的淋巴细胞增殖能力高于对照组,但无统计学差别(P0.05)。试验二：与不添加GSLS的对照组相比,添加GSLS的油佐剂疫苗组在免疫后3周,IHA效价升高不明显(P0.05),IgG、IgG1和IgG2水平明显升高(P0.05)；免疫后6周,血清中IHA效价明显升高(P0.05),IgG、IgG1和IgG2水平均明显上升(P0.05)。结论：每个剂量FMD油佐剂疫苗中添加40μg GSLS能明显增强猪的体液免疫和细胞免疫。4.不同剂量GSLS对鸡新城疫油佐剂疫苗免疫的影响目的：观察鸡ND疫苗中添加GSLS对鸡免疫反应的影响。办法：将60只1日龄梅岭土鸡分成5组,每组12只,12日龄时,在每只鸡的胸大肌内分别注射含不同剂量的GSLS (0、2、4、6和8μg)鸡ND油佐剂疫苗,免疫为0.2ml。于免疫前,免疫后1、2和3周经心脏采血收集血样,用血凝抑制试验测定血清HI效价,3周后摘取鸡脾脏,制备脾脏淋巴细胞悬液,采取MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖。结果：每剂量疫苗中添加6μg的GSLS,血清HI效价在免疫后1周升高不明显,在免疫后第2周和第3周,明显升高(P0.05)；免疫后3周,脾脏淋巴细胞对LPS和NDV刺激的增殖反应明显高于对照组(P0.05),各组脾脏淋巴细胞对ConA刺激的增殖反应之间没有显著差别(P0.05)；ND疫苗中添加GSLS对鸡的体重不产生明显差别(P0.05)；各组鸡的疫苗注射部位没有发现显著的局部副意义。结论：ND疫苗中添加GSLS能明显增强鸡的体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫鸡不产生可见的副意义。5.油佐剂疫苗中添加GSLS对疫苗黏滞性的影响目的：观察油佐剂疫苗中添加GSLS对疫苗黏滞性的影响。办法：将GSLS(30g)溶解在60ml二亚砜中,制备361mg/ml的GSLS储存液(83m1),根据用量将GSLS储存液添加在MC52白油中并搅拌均匀,然后与FMDV抗原混合,采取均质乳化机制备分别制备油相/水相比为1比1(或2比1),吐温浓度分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%的油包水型FMD油乳剂疫苗,采取玻璃粘度计测定各组疫苗的黏滞性。结果：当吐温浓度为1.0%和1.5%时,添加4μg/剂量GSLS油佐剂疫苗(1比1)流动时间明显短于对照组(P0.05)；当吐温浓度为为1.5%和2.0%时,添加4μg/剂量GSLS能明显降低油佐剂疫苗(2比1)流动时间(P0.05)。结论：油乳剂疫苗中添加GSLS能降低疫苗的黏滞性。综上所述,FMD油乳剂疫苗中添加GSLS可明显提升小鼠血清特异性IgG水平,提升的幅度呈剂量依赖联系,从4μg组的幅度最高；FMD油佐剂疫苗中添加GSLS(?)明显增强小鼠血清FMDV特异性IgG水平和淋巴细胞增殖转化指数,增强使仅含一半抗原剂量疫苗诱导的IgG水平到含全剂量抗原诱导的IgG水平,说明GSLS增强小鼠对低剂量抗原疫苗的免疫应答；FMD疫苗中添加40μg的GSLS能明显增强猪血清IHA,IgG和IgG亚类水平,增强淋巴细胞增殖指数,表明GSLS对猪FMD疫苗具有较好的免疫佐剂意义；ND疫苗中添加6μgGSLS能明显增强鸡血清HI效价和淋巴细胞增殖转化指数,并且没有对免疫鸡产生显著可见的副意义,说明GSLS能通过增强鸡的体液免疫应答和细胞免疫应答来发挥免疫佐剂意义；当吐温浓度为1.0%和1.5%时,添加4gg/剂量GSLS由佐剂疫苗(油/水=1：1)流动时间明显短于对照组(P0.05)；当吐温浓度为为1.5%和2.0%时,添加4Pg/剂量GSLS能明显降低油佐剂疫苗(油/水=2：1)流动时间(P0.05),说明油乳剂疫苗中添加GSLS能降低疫苗的黏滞性。关键词：免疫佐剂论文油佐剂疫苗论文人参茎叶皂甙论文口蹄疫疫苗论文新城疫疫苗论文黏滞性论文
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Abstract15-21
图论文导读：对油佐剂疫苗的黏滞性影响93-971材料93-941.1仪器设备931.2主要试剂93-941.3抗原和佐剂942办法942.1疫苗制备942.2疫苗黏滞性检测942.3数据统计943结果94-963.1GSLS对油相/水相比例为1：1的油佐剂疫苗黏滞性的影响94-953.2GSLS对油相/水相比例为2：1的油佐剂疫苗黏滞性的影响95-964小结96-97第九章综合讨论97-107
表目录21-23
英文缩写与注释23-25
第一部分 文献综述25-57
第一章 疫苗免疫25-31
1 免疫应答25-27

1.1 天然免疫25-26

1.2 特异性免疫26-27

2 疫苗27-29

2.1 疫苗的定义27-28

2.2 疫苗的分类28-29

3 本章小结29-31
第二章 疫苗佐剂31-47
1 疫苗佐剂的意义机制31-34

1.1 抗原贮库意义31-32

1.2 免疫调节意义32

1.3 抗原提呈意义32-33

1.4 靶向意义33-34

2 常见免疫佐剂34-43

2.1 铝盐佐剂34-35

2.2 油佐剂35-38

2.3 单磷酰脂质A38-39

2.4 皂甙(Quil-A)39-40

2.5 中药类免疫佐剂40-42

2.6 复合免疫佐剂42-43

3 免疫佐剂的组合43-44
4 展望44-47
第三章 人参茎叶皂甙的药理意义47-55
1 人参茎叶皂甙的来源、制备和组成47-49
2 人参茎叶皂甙药理意义49-54

2.1 对中枢神经-内分泌体系的意义49-50

2.2 对心血管体系的意义50-51

2.3 对免疫体系的意义51-53

2.4 抗肿瘤意义53-54

3 本章小结54-55
本探讨的依据、内容和作用55-57
第二部分 试验探讨57-107
第四章 人参茎叶皂甙提升小鼠对口蹄疫油佐剂疫苗免疫反应的探讨57-63
1 材料57-59

1.1 仪器设备57-58

1.2 主要试剂58

1.3 试验动物58

1.4 抗原和佐剂58-59

2 办法59-61

2.1 疫苗制备59

2.2 动物分组59-60

2.3 血清特异性IgG检测60-61

2.4 数据统计61

3 结果61-62

3.1 不同浓度GSLS对小鼠血清FMDV特异性IgG水平的影响61-62

4 小结62-63
第五章 人参茎叶皂甙增强小鼠对低剂量抗原疫苗免疫反应的探讨63-75
1 材料63-64

1.1 仪器设备63-64

1.2 主要试剂64

1.3 试验动物64

1.4 抗原和佐剂64

2 办法64-69

2.1 疫苗制备64-65

2.2 动物分组65

2.3 血清特异性IgG检测65-66

2.4 淋巴细胞增殖测定66

2.5 淋巴细胞表达细胞因子mRNA的测定66-68

2.6 注射部位皮肤厚度的测量68-69

2.7 数据统计69

3 结果69-72

3.1 血清IgG水平69-70

3.2 淋巴细胞增殖反应70

3.3 细胞因子mRNA表达70-72

3.4 注射部位皮肤厚度72

4 小结72-75
第六章 人参茎叶皂甙提升猪对口蹄疫油佐剂疫苗免疫反应的探讨75-85
1 材料75-77

1.1 仪器设备75-76

1.2 主要试剂76

1.3 试验动物76

1.4 抗原和佐剂76-77

2 办法77-80

2.1 疫苗制备77

2.2 动物分组77-78

2.3 猪血清特异性IgG和IgG亚类检测78

2.4 猪外周血淋巴细胞增殖的检测78-79

2.5 猪血清间接血凝(IHA)效价的检测79-80

2.6 数据统计80

3 结果80-83

3.1 猪血清IHA效价80-81

3.2 猪血清IgG极为亚类81-82

3.3 猪外周血淋巴细胞增殖82-83

4 小结83-85
第七章 人参茎叶皂甙提升鸡对新城疫油佐剂疫苗免疫反应的探讨85-93
1 材料85-86

1.1 仪器设备85-86

1.2 主要试剂86

1.3 试验动物86

1.4 抗原和佐剂86

2 办法86-88

2.1 疫苗制备86

2.2 动物分组86-87

2.3 鸡血清HI效价测定87

2.4 脾脏淋巴细胞增殖测定87-88

2.5 体重称量和局部病理变化观察88

2.6 数据统计88

3 结果88-91

3.1 鸡血清HI效价88-89

3.2 鸡脾脏淋巴细胞增殖89-90

3.3 鸡体重和注射局部病理变化90-91

4 小结91-93
第八章 人参茎叶皂甙对油佐剂疫苗的黏滞性影响93-97
1 材料93-94

1.1 仪器设备93

1.2 主要试剂93-94

1.3 抗原和佐剂94

2 办法94

2.1 疫苗制备94

2.2 疫苗黏滞性检测94

2.3 数据统计94

3 结果94-96

3.1 GSLS对油相/水相比例为1：1的油佐剂疫苗黏滞性的影响94-95

3.2 GSLS对油相/水相比例为2：1的油佐剂疫苗黏滞性的影响95-96

4 小结96-97
第九章 综合讨论97-107

1. FMD疫苗中添加不同剂量GSLS对小鼠免疫反应的影响97-98

2. GSLS论文导读：34

对低剂量抗原FMD油佐剂疫苗免疫效果的影响98-99

3. FMD油佐剂疫苗中添加不同剂量GSLS对猪的免疫效果99-102

4. 不同剂量GSLS对鸡ND油佐剂疫苗免疫效果的影响102-104

5. GSLS化学结构与免疫佐剂意义之间的联系104

6. GSLS降低FMD油佐剂疫苗对局部反应性意义104-105

7. 油佐剂疫苗中添加GSLS对疫苗黏滞性的影响105-107

结论107-109
创新点109-111
展望111-113
参考文献113-131
附录 常用试剂配方131-133
致谢133-135
攻读博士探讨生期间发表的文章135