简谈溶酶体新型萘酰亚胺衍生物诱导肿瘤细胞凋亡要求

论文导读：
摘要：萘酰亚胺衍生物在治疗肿瘤中的意义明显,已成为了抗肿瘤药物探讨的热点之一。其中依利萘法德和双萘法德均已进入了II期临床探讨阶段,但是由于其具有较大的毒副意义而未能进入III期临床试验。由此设计开发一类毒副意义更小、抗肿瘤活性更强的新型萘酰亚胺衍生物,并寻找和阐明诱导肿瘤细胞凋亡的意义靶点和分子机制,已成为目前探讨的重要课题。本探讨研究了不同长度烷基异硫脲阳离子作为连接基的5种新型双萘酰亚胺衍生物DN2-DN6对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制意义从及意义靶点,并以中筛选出了具有高效抗肿瘤活性的化合物,进一步研究其对肿瘤细胞的凋亡意义从及分子机制。MTT法检测了5种新型双萘酰亚胺衍生物DN2-DN6对MCF-7细胞的生长抑制意义。结果可见,DN2-DN6均能明显抑制MCF-7细胞的生长,降低细胞生存率。5种化合物DN2-DN6的IC50值由小到大的顺序依次为DN6DN5DN4DN3DN2,说明化合物对MCF-7细胞的生长抑制意义随烷基异硫脲阳离子连接基长度的增多而增强,烷基链长度与细胞毒性间具有正相关性。其中DN6对细胞的生长抑制意义最强,在意义MCF-7细胞12、24和36h的IC50值分别为11.704±1.84、9.42±2.07和8.04±0.23μmol/L。由此选择DN6研究其对MCF-7细胞的凋亡意义从及分子机制。采取DAPI荧光染色观察细胞形态、PI单染检测细胞周期分布、AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡率。结果表明DN6从浓度依赖模式诱导MCF-7细胞凋亡,并能干扰DNA的正常合成,造成MCF-7细胞周期阻滞于S期。通过DN2-DN6与中性红(NR)的共定位,观察5种化合物在MCF-7细胞中的意义靶点,吖啶橙(AO)染色观察溶酶体膜稳定性,ELISA法检测组织蛋白酶B (CathepsinB)和细胞色素C的表达量,流式细胞术(FCM)分析Bcl-2和Bax蛋白表达水平从及线粒体膜电位的变化,分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的表达。结果表明,DN2-DN6均定位于细胞溶酶体中。DN6能从浓度和时间依赖性的模式导致溶酶体膜通透性增多,释放出Cathepsin B,意义于Bcl-2蛋白,Bcl-2/Bax蛋白比率降低,进而引起线粒体膜电位下降,细胞色素C的释放,激活Caspase-9和Caspase-3,最终经由溶酶体论文导读：衍生物的探讨发展12-181.1.1萘酰亚胺衍生物的发现12-131.1.2单萘酰亚胺衍生物的探讨发展13-161.1.3双萘酰亚胺衍生物的探讨发展16-181.1.4萘酰亚胺衍生物的进展前景181.2细胞凋亡的探讨发展18-241.2.1细胞凋亡概述18-211.2.2死亡受体介导的细胞凋亡途径21-221.2.3线粒体介导的细胞凋亡途径22-241.3溶酶体参与细胞凋
-线粒体途径引起MCF-7细胞凋亡。关键词：萘酰亚胺论文细胞凋亡论文共定位论文Cathepsin论文B论文溶酶体-线粒体凋亡途径论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可从关系人员哦。摘要4-5
Abstract5-10
引言10-11
1 文献综述11-30

1.1 萘酰亚胺衍生物的探讨发展12-18

1.1 萘酰亚胺衍生物的发现12-13

1.2 单萘酰亚胺衍生物的探讨发展13-16

1.3 双萘酰亚胺衍生物的探讨发展16-18

1.4 萘酰亚胺衍生物的进展前景18

1.2 细胞凋亡的探讨发展18-24

1.2.1 细胞凋亡概述18-21

1.2.2 死亡受体介导的细胞凋亡途径21-22

1.2.3 线粒体介导的细胞凋亡途径22-24

1.3 溶酶体参与细胞凋亡的机制探讨24-28

1.3.1 溶酶体的结构与功能24-25

1.3.2 溶酶体组织蛋白酶与细胞凋亡25-26

1.3.3 溶酶体膜通透性转变的机制26-27

1.3.4 溶酶体凋亡途径27

1.3.5 溶酶体-线粒体凋亡途径27-28

1.4 细胞凋亡与疾病防治28

1.5 本文的选题依据和探讨内容28-30

2 高效抗肿瘤化合物DN2-DN6的筛选30-40

2.1 实验材料与实验设备30-32

2.

1.1 实验材料30-31

2.

1.2 实验试剂31-32

2.

1.3 实验设备32

2.2 实验办法32-34

2.1 细胞复苏32-33

2.2 细胞传代33

2.3 细胞冻存33

2.4 MTT比色法分析细胞生存率33-34

2.5 统计学分析34

2.3 实验结果与分析34-38

2.3.1 DN2对MCF-7细胞生存率的影响34-35

2.3.2 DN3对MCF-7细胞生存率的影响35

2.3.3 DN4对MCF-7细胞生存率的影响35-36

2.3.4 DN5对MCF-7细胞生存率的影响36-37

2.3.5 DN6对MCF-7细胞生存率的影响37-38

2.4 讨论38-39

2.5 小结39-40

3 DN6对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响40-50

3.1 实验试剂与实验设备40-41

3.

1.1 实验试剂40

3.

1.2 实验设备40-41

3.2 实验办法41-4论文导读：MCF-7细胞线粒体膜电位的影响59-614.3.6DN6对细胞色素C释放的影响61-634.3.7DN6对Caspase-9和Caspase-3活性的影响63-644.4讨论64-684.5小结68-69结论69-70参考文献70-77攻读硕士学位期间发表学术论文状况77-78致谢78-79上一页123
3
3.

2.1 细胞培养41

3.

2.2 倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态41

3.

2.3 DAPI染色荧光显微镜观察细胞形态变化41-42

3.

2.4 PI单染检测细胞周期分布42

3.

2.5 AnnexinV-FITC和PI双染检测细胞凋亡率42-43

3.

2.6 统计学分析43

3.3 实验结果与分析43-48

3.1 MCF-7细胞形态观察结果43-44

3.2 DAPI对MCF-7细胞染色荧光显微镜观察结果44

3.3 PI单染分析DN6对细胞周期的影响44-45

3.4 AnnexinV-FITC和PI双染分析DN6对细胞凋亡率的影响45-48

3.4 讨论48-49

3.5 小结49-50

4 DN6诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制探讨50-69

4.1 实验试剂与实验设备50-51

4.

1.1 实验试剂50-51

4.

1.2 实验设备51

4.2 实验办法51-54
4.

2.1 细胞培养51

4.

2.2 DN2-DN6与中性红(NR)共定位检测在细胞中的定位51-52

4.

2.3 吖啶橙(AO)染色检测溶酶体膜稳定性52

4.

2.4 ELISA法检测Cathepsin B表达量52-53

4.

2.5 流式细胞术(FCM)检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平53

4.

2.6 流式细胞术(FCM)检测线粒体膜电位53

4.

2.7 ELISA法检测细胞色素C表达量53-54

4.

2.8 分光光度法测定Caspase-9和Caspase-3的活性54

4.

2.9 统计学分析54

4.3 实验结果与分析54-64
4.

3.1 DN2-DN6与NR的细胞共定位成像结果54-56

4.

3.2 DN6对MCF-7细胞溶酶体膜稳定性的影响56

4.

3.3 DN6对Cathepsin B表达量的影响56-58

4.

3.4 DN6对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响58-59

4.

3.5 DN6对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响59-61

4.

3.6 DN6对细胞色素C释放的影响61-63

4.

3.7 DN6对Caspase-9和Caspase-3活性的影响63-64

4.4 讨论64-68

4.5 小结68-69

结论69-70
参考文献70-77
攻读硕士学位期间发表学术论文状况77-78
致谢78-79