阐释骨髓移植WIP1在端粒功能障碍引起干细胞衰老及骨髓衰竭中作用

论文导读：致谢5-6摘要6-7Abstract7-81.引言8-122.材料与策略12-242.1.实验动物、试剂及相关仪器12-152.1.1实验动物122.1.2试剂12-142.1.3主要实验仪器14-152.2实验策略15-242.2.1G3WIP1双基因敲除小鼠的建立及PCR策略鉴定小鼠基因型15-172.2.2骨髓细胞,脾脏细胞的分离17-192.2.3流式细胞仪浅析骨髓淋系及
摘要：WIP1(Wild-type p53-induced phosphatase)是一癌基因,在众多癌症细胞中高表达,同时是p53负反馈调节环路的重要组成成分,参与调控细胞的稳态平衡。已有的探讨发现,p53及其上下游基因在端粒依赖的衰老进程中起重要作用。然而,对于WIP1基因在端粒功能障碍而引起的衰老历程中的调节作用还不清楚。我们通过杂交,建立WIP1和Terc双基因敲除小鼠品系。进一步互交,建立WIP1基因缺失的G3Terc-/-(第三代端粒酶缺失)小鼠。在此基础上,利用外周骨髓浅析、体内造血重建实验以及竞争性骨髓移植实验等手段,对WIP1和Terc双基因敲除小鼠的成年鼠及衰老小鼠的HSC的功能探讨。实验结果显示WIP1敲除能够延长端粒酶缺失G3小鼠的寿命。WIP1缺失没有改善G3小鼠骨髓中M细胞(CD11b+),B细胞(B220+),CD4+T,CD8+T的比例。在干细胞水平,WIP1缺失的G3小鼠中最纯的干细胞(SLAM)数目较G3小鼠显著增加,而长期造血干细胞(LT),短期造血干细胞(ST)的数目没有转变。在祖细胞水平,共同髓系祖细胞(CMP),粒细胞髓系祖细胞(GMP),巨核细胞红系祖细胞(MEP)以及共同淋系祖细胞(CLP)的数目没有变化。骨髓竞争性移植实验和干细胞竞争性移植实验结果显示,供体为G3W1P1-/-来源的小鼠骨髓长期造血干细胞造血重建能力低于G3小鼠。提示WIP1缺失没有改善G3小鼠的造血重建能力。在对脾脏的中M细胞(CD11b+),B细胞(B220+),CD4+T,CD8+T的浅析结果显示,WIP1缺失没有改善G3小鼠的脾脏中髓系浸润现象。其他组织器官的称重结果显示,与G3小鼠相比,G3WIP-/-小鼠脾脏,大脑,肝脏的重量没有变化,肾脏,心脏,雄性小鼠的睾丸重量有显著的增加。结果提示,WIP1缺失延长端粒功能障碍小鼠的寿命,但是没有改善造血系统的衰老。关键词：WIP1论文端粒酶缺失小鼠论文骨髓造血干细胞论文竞争性骨髓移植论文
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摘要6-7
Abstract7-8

1. 引言8-12

2. 材料与策略12-24

2.

1. 实验动物、试剂及相关仪器12-15

2.

1.1 实验动物12

2.

1.2 试剂12-14

2.

1.3 主要实验仪器14-15

2.2 实验策略15-24

2.1 G3WIP1双基因敲除小鼠的建立及PCR策略鉴定小鼠基因型15-17

2.2 骨髓细胞,脾脏细胞的分离17-19

2.3 流式细胞仪浅析骨髓淋系及髓系细胞19

2.4 流式细胞仪浅析骨髓长期造血干/祖细胞比例19-20

2.5 磁珠法富集.造血干细胞及进一步染色浅析/分选20-21

2.6 骨髓造血干细胞自我更新及重建造血实验21-23

2.7 流式细胞仪浅析外周血中各系细胞数量和比例23-24

2.8 统计学浅析24

3. 实验结果24-37

3.1 PCR鉴定G3WIP1小鼠基因型24-25

3.2 WIP1敲除能够延长端粒酶缺失小鼠的寿命25-27

3.3 WIP1敲除没有改善G3骨髓中的BMT比例27-28

3.4 WIP1缺失的G3小鼠中骨髓干/祖细胞的数目浅析28-31

3.5 竞争性移植实验检测WIP1敲除后G3 HSC(造血干细胞)自我更新和造血重建能力31-32
3.6 长期造血干细胞移植实验检测WIP1敲除G3小鼠HSC自我更新和造血重建能力32-34

3.7 WIP1敲除没有改善脾脏中髓系细胞入侵34-35

3.8 组织器官称重35-37

4. 讨论37-39

5. 结论39-41

6. 参考文献41-43

附录43