阐释骨关节炎慢病毒介导siRNA沉默ADAMTS-5在体外培养大鼠软骨细胞中作用

论文导读：5siRNA的慢病毒颗粒，然后转导入大鼠软骨细胞。通过real-timePCR和Westernblot策略检测转导后软骨细胞ADAMTS-5基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果：成功包装大鼠含ADAMTS-5siRNA慢病毒颗粒。ADAMTS-5siRNA能顺利转入软骨细胞，转染率为80%；以Real-timePCR结果可以看出，大鼠关节软骨细胞中ADAMTS-5mRNA的表达量，干扰组显著低
摘要：目的：构建ADAMTS-5siRNA慢病毒载体，探讨慢病毒载体介导的siRNA对大鼠离体软骨细胞中ADAMTS-5基因表达的影响。策略：针对ADAMTS-5基因RNAi有效靶点构建大鼠pGCSIL-GFP-ADAMTS-5siRNA表达质粒，利用慢病毒包装系统，在293T细胞中进行包装生产含ADAMTS-5siRNA的慢病毒颗粒，然后转导入大鼠软骨细胞。通过real-time PCR和Westernblot策略检测转导后软骨细胞ADAMTS-5基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果：成功包装大鼠含ADAMTS-5siRNA慢病毒颗粒。ADAMTS-5siRNA能顺利转入软骨细胞，转染率为80%；以Real-time PCR结果可以看出，大鼠关节软骨细胞中ADAMTS-5mRNA的表达量，干扰组显著低于阴性对照组，差别有显著性作用（P0.05）,Western blot结果显示， ADAMTS-5蛋白表达量，干扰组低于阴性对照组，差别有显著性作用（P0.05）。结论：利用慢病毒载体把ADAMTS-5siRNA转入大鼠软骨细胞，使软骨细胞的ADAMTS-5基因沉默，为进一步阐明siRNA沉默ADAMTS-5基因防治骨关节炎的分子机制提供基础。关键词：RNA干扰（RNAi）论文siRNA论文软骨细胞论文慢病毒论文骨关节炎论文ADAMTS-5论文
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ABSTRACT6-7
前言7-10
实验材料与策略10-22
结果22-29
讨论29-30
结论30-31
参考文献31-33
综述33-50
参考文献43-50
缩略语索引50-51
攻读学位期间完成论文51-52
致谢52-53