阐释素绿色木霉菌素发酵优化、提取分离及结构鉴定

论文导读：得了绿色木霉菌素物质成分的主要信息。通过对红外光谱谱图剖析可知，三个色素成分谱图曲线大致相同，每个物质又有不同的吸收谱带，素物质中出现了羟基、氨基、、亚、羧基及烯键、炔键、苷键、酯键的特点峰，各物质又不同程度地含有芳香骨架，其在紫外扫描光谱中也得到了印证。由此可知色素物质含有的官能团较多，
摘要：本论文以绿色木霉菌(Trichoderma viride)为试验菌株，首先对其所产生的素进行发酵动力学特点的探讨，然后对绿色木霉菌进行定向培养使其产生更多的素，在最优培养基组成及发酵条件下对素发酵液进行提取、分离和物质鉴定，得出绿色木霉菌素5个组分物质组成结构，为开发一种新型的微生物代谢产生的天然色素提供探讨依据。本论文的主要探讨成果如下：1、绿色木霉菌(T. viride)素发酵液不同稀释倍数的溶液在290nm及380nm处有最大吸收峰，该素最大吸收波长与已有较多报道的红曲素的最大吸收波长(370、388nm)相近。在T. viride产素的液态发酵历程中，通过测定菌体干重、吸光值（色价）、残糖浓度和pH值，得到T. viride液态发酵历程中菌体生长、素合成和底物消耗的动力学参数变化曲线。以发酵历程曲线可以得出绿色木霉菌体生长和素的合成属于部分生长偶联型。2、在培养基碳源、氮源组成，装液量及摇床转速、接种量、培养时间及培养温度等单因素实验的基础上，采取Box-Behnken设计及响应面浅析法优化T. viride产天然素的培养基组成和发酵工艺条件。结果表明，在试验范围内，T. viride产素的优化培养条件为：马铃薯液态培养基（250g·L-1马铃薯浸汁，2g·L-1Na2HPO4），外加碳源选择21.7g·L-1木糖，摇瓶装液量为50mL/250mL，培养温度35℃，接种量6%(v/v)，摇床转速120r·min-1，培养时间152h。在优化培养条件下发酵液素的色价为52.8±0.8U·mL-1。马铃薯培养基中添加尿素、硫酸铵、蛋白胨、牛肉浸粉等氮源会抑制素的生成。3、利用薄层层析与红外及紫外光谱联用的策略快速、高效地获得了绿色木霉菌素物质成分的主要信息。通过对红外光谱谱图剖析可知，三个色素成分谱图曲线大致相同，每个物质又有不同的吸收谱带，素物质中出现了羟基、氨基、、亚、羧基及烯键、炔键、苷键、酯键的特点峰，各物质又不同程度地含有芳香骨架，其在紫外扫描光谱中也得到了印证。由此可知色素物质含有的官能团较多，结构比较复杂。在紫外光谱扫描中，三个显著的紫外吸收峰位置及强度表明了该类色素物质为含有由少到多环的芳香烃类物质，其中成分b、c两者都是稠环芳烃，可能是萘、蒽、菲等并各自有不同的取代基及官能团。4、通过对绿色木霉菌的素及代谢物的溶剂提取及分步萃取，及正相柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析和高效液相色谱（HPLC）的分离策略，运用电子喷雾质谱（ESI-MS），1H-1H COSY，13C-1H COSY，HMBC和NOESY在内的一维和二维核磁共振技术进行鉴定，共得到5个纯品化合物。分别为:化合物E1-2、2,4-已二烯酸、Viridenepoxydiol、Sorbiquinol、Vertinopde。其中E1-2为以未报道的新化合物，且E1-2、Sorbiquinol、Vertinopde均为首次以T. viride中分离出。关键词：绿色木霉菌论文素论文液态发酵条件论文结构鉴定论文核磁共振论文
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Abstract5-9
1．文献综述9-13

1.1 天然色素9

1.2 天然色素的生产9-10

1.2.1 以植物中提取9

1.2.2 以动物中提取9-10

1.2.3 微生物发酵法10

1.2.4 合成法10

1.3 微生物色素10-11

1.3.1 微生物素11

1.4 绿色木霉菌11-12

1.4.1 绿色木霉菌素的稳定性12

1.5 天然色素的浅析技术12-13

1.5.1 高效液相色谱技术（HPLC）12

1.5.2 气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）12

1.5.3 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS，HPLC-MS）12-13

2. 引言13-15

3. 材料与策略15-23

3.1 材料15-16

3.

1.1 菌株15

3.

1.2 培养基15

3.

1.3 仪器15

3.

1.4 试剂15-16

3.2 实验策略16-23
3.2.1 绿色论文导读：素发酵液的吸收光谱特性234.1.2绿色木霉菌素溶液的朗伯比尔定律验证23-244.1.3绿色木霉菌素发酵动力学指标测定结果24-274.2绿色木霉菌产素的培养基优化探讨27-334.2.1不同碳源对T.viride发酵产素的影响27-294.2.2不同氮源对T.viride发酵产素的影响294.2.3装液量及摇床转速对素代谢
木霉菌产素的动力学特点16-18
3.

2.2 素的培养基及培养条件优化18-19

3.

2.3 绿色木霉菌素的 TLC 分离与初步鉴定19-20

3.

2.4 素及代谢产物的分离及结构鉴定20-23

4. 结果和浅析23-53

4.1 绿色木霉菌产素的动力学探讨23-27

4.

1.1 绿色木霉菌素发酵液的吸收光谱特性23

4.

1.2 绿色木霉菌素溶液的朗伯比尔定律验证23-24

4.

1.3 绿色木霉菌素发酵动力学指标测定结果24-27

4.2 绿色木霉菌产素的培养基优化探讨27-33
4.

2.1 不同碳源对 T. viride 发酵产素的影响27-29

4.

2.2 不同氮源对 T. viride 发酵产素的影响29

4.

2.3 装液量及摇床转速对素代谢的影响29

4.

2.4 接种量对素代谢的影响29-30

4.

2.5 培养时间及培养温度对代谢素的影响30

4.

2.6 Box-Behnken 设计及响应面浅析30-32

4.

2.7 最优工艺条件的验证32-33

4.3 绿色木霉菌素的 TLC 分离与初步鉴定33-37
4.

3.1 色素物质薄层展开结果33-34

4.

3.2 红外光谱扫描结果34-36

4.

3.3 紫外-可见光谱扫描结果36-37

4.4 绿色木霉菌素的分离与结构鉴定37-53

4.1 样品的初步萃取结果37

4.2 乙酸乙酯部位柱层析分离37-38

4.3 薄层层析检测各个流份组成及合并结果38-39

4.4 各个化合物的分离结果39-52

4.5 以绿色木霉菌素及发酵物中所分离出的化合物小结52-53

5. 讨论53-54

6. 结论54-56

参考文献56-61
致谢61-62
个人介绍62-63
攻读硕士期间发表的论文63