探讨圆环猪圆环病毒2型高密度培养大专

论文导读：22-241.1材料22-231.2策略23-242结果24-262.1PCR扩增242.2传代次数24-252.3病毒的增殖25-262.4D-氨基葡萄糖处理262.5病毒的TCID_(50)测定263讨论26-28参考文献28-30Abstract30-32第四章微载体培养PK15细胞实验条件的优化32-40摘要321、材料与策略32-341.1材料32-331.2细胞培养331.3活细胞计数33-342结果34-35
摘要：本论文探讨了PCV2接种到PK15细胞中传代,微载体培养PK15细胞的关键工程参数进行优化,新型生物反应器技术高密度发酵工艺生产细胞和病毒PCV2,试验分三部分：试验一,将经鉴定为PCV2阳性无菌处理的组织样品上清液接种到无PCV污染的PK-15细胞中传代,PCV2病毒组织培养中添加D-氨基葡萄糖作用可有效地推动PCV2病毒的增殖,但细胞不产生病变。运用PCR策略能检测出细胞培养的病毒增殖和毒价,测定了PCV2病毒培养收获时间,试验表明PCV2病毒在PK15细胞培养可连续传代,增殖病毒,并能间隔一段时间内可以不断收获病毒液。试验二,对微载体培养PK15细胞的细胞接种密度、微载体浓度和细胞培养基等培养历程中的关键工程参数进行优化。试验表明以微载体接种细胞密度4.5×104cells个/mg、微载体浓度5mg/ml在低糖DMEM培养基中培养方式效果最为理想。优化的培养工艺适用于病毒疫苗的生产。试验三,探讨了反应器、转瓶、方瓶不同培养系统生产PCV2,对转瓶不同参数下的病毒效价情况进行优化比较,最终参数分别以1:10稀释种毒后接种、接种24hr的PK15细胞、5～7mg/mL微载体浓度和维持液低糖DMEM+0.2%水解乳蛋白(LH)的培养方式效果最为理想。关键词：组织培养论文微载体论文PK15细胞论文猪圆环病毒2型论文
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ABSTRACT7-8
前言8-10
第一章 猪圆环病毒2型培养及疫苗研制10-18
第一节 猪圆环病毒2型培养10-11
第二节 猪圆环病毒2型疫苗11-15

2.1 PCV2灭活疫苗11-12

2.2 PCV2弱毒疫苗12

2.3 PCV2基因工程疫苗12-15

参考文献15-18
第二章 微载体技术运用18-22
第一节 微载体技术培养技术在医学上的运用19-20
第二节 微载体技术培养技术在兽医上的运用20-21
参考文献21-22
第三章 猪圆环病毒2型组织培养的探讨22-32
摘要22
1 材料与策略22-24

1.1 材料22-23

1.2 策略23-24

2 结果24-26

2.1 PCR扩增24

2.2 传代次数24-25

2.3 病毒的增殖25-26

2.4 D-氨基葡萄糖处理26

2.5 病毒的TCID_(50)测定26

3 讨论26-28
参考文献28-30
Abstract30-32
第四章 微载体培养PK15细胞实验条件的优化32-40
摘要32

1、材料与策略32-34

1.1 材料32-33

1.2 细胞培养33

1.3 活细胞计数33-34

2 结果34-35

2.1 用DMEM培养基方瓶培养PK15细胞的生长34

2.2 培养基对PK15细胞生长的影响34

2.3 微载体浓度对PK15细胞生长的影响34-35

2.4 细胞接种密度对PK15细胞生长的影响35

2.5 不同规格生物反应器培养PK15细胞的生长35

3 讨论35-37
参考文献37-38
Abstract38-40
第五章 PK15细胞微载体技术规模化培养猪圆环病毒2型的探讨40-48
摘要：40-41

1、材料与策略41-42

1.1 材料41

1.2 策略41-42

2 结果42-45

2.1 常规方瓶培养PCV2毒价42-43

2.2 感染剂量对PCV2增殖的影响43

2.3 微载体浓度对PCV2增殖的影响43-44

2.4 感染时间对病毒增殖的影响44

2.5 维持液体对病毒增殖的影响44-45

2.6 不同培养系统中病毒效价的比较45

3 讨论45-46
参考文献46-47
Abstract:47-48
本论新之处48-50
论文发表情况50-52
致谢52