试述解离促红细胞生成素（EPO）糖基化修饰位点傅立叶变换离子回旋共振质谱法怎么

论文导读：32.4.2O-连接糖肽的二级质谱浅析33-352.4.3N-连接糖肽的二级质谱浅析35-382.5本章小结38-39第三章傅立叶变换-离子回旋共振质谱法对rhEPO中糖基化结构的浅析探讨39-593.1仪器及试剂39-403.1.1实验仪器39-403.1.2实验试剂403.2rhEPO酶解后样品的直接质谱浅析40-423.2.1酶解后样品的脱盐处理403.2.2脱盐后样品的质谱
摘要：兴奋剂中重组蛋白的检测是一项非常艰巨的工作,其中典型蛋白质如rhEPO自1990年WADA和IOC禁用到2000年检测策略出台用了十年多的时间。但此检测历程耗时费力,对检验员实验技艺的要求也很高,而且所有这些策略都有产生检测假阳性的可能。傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS)具有高分辨率,高灵敏度,宽的质量范围,多重独特的裂解技术,可以鉴定蛋白质翻译后修饰位置及修饰结构,实现混合物中目标物的准确检测,具有很好的定量优势,不仅在肽类兴奋剂滥用检测中有良好的运用前景,而且在临床低含量蛋白质基体样品的准确测量中有很高的实用价值。重组人促红细胞生成素(rhEPO)是一种具有典型代表性的糖蛋白,含有三个N-连接糖基化位点和一个O-连接糖基化位点。本探讨采取蛋白酶Glu-C有效的酶解了EPO-a样品,利用液相色谱-线性离子阱质谱法鉴定了EPO-a样品酶解后的多肽片段和糖肽片段,通过碰撞活化解离(CAD)浅析,推导出O-连接糖肽糖链的结构。但对于N-连接糖肽的浅析,由于其在线性离子阱质谱上响应较低,进行二级碎裂的时候,由于母离子浓度较小,难以得到有效的糖链碎裂片段。采取傅立叶变换离子回旋共振质谱法(FT-ICRMS),利用CAD技术和电子捕获解离(ECD)技术的互补性,进一步浅析了rhEPO-α中O-连接糖基化位点及糖基化结构,成功鉴定了O-连接糖基化结构,并对O-连接糖肽的两种不同价态的ECD断裂方式做了进一步的探讨浅析,同时对N-连接糖基化结构进行了初步浅析。本探讨工作为EPO的检测鉴定提供了一种简单快速的检测策略,同时为糖蛋白中0-连接糖基化位点的探讨提供了一种新策略,为开发准确可靠的肽类兴奋剂rhEPO基体检测策略奠定了基础。关键词：重组人促红细胞生成素(rhEPO)论文傅立叶变换离子回旋共振质谱法(FT-ICRMS)论文液相色谱-线性离子阱质谱法(LC-LTQ-MS)论文糖基化位点论文电子捕获解离(ECD)论文碰撞活化解离(CAD)论文
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摘要6-8
ABSTRACT8-14
第一章 综述14-26

1.1 促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)15-17

1.1 EPO的结构特点16

1.2 重组EPO(rhEPO)16-17

1.2 竞技体育中EPO的检测17-19

1.2.1 EPO的检测难点17-18

1.2.2 EPO的检测策略18-19

1.3 傅立叶变换-离子回旋共振质谱法在蛋白质糖基化浅析探讨中的运用19-23

1.3.1 傅立叶变换-离子回旋共振质谱的基本原理及其解离技术20-22

1.3.2 傅立叶变换-离子回旋共振质谱在蛋白质糖基化浅析中的探讨近况22-23

1.4 傅立叶变换离子回旋共振质谱法浅析EPO糖基化修饰位点的探讨优势及作用23-24

1.5 探讨目标和内容24-26

1.5.1 探讨目标24-25

1.5.2 探讨内容25-26

第二章 酶解EPO肽段的液相色谱质谱联用技术浅析探讨26-39

2.1 仪器及试剂26-27

2.

1.1 实验仪器26-27

2.

1.2 实验试剂27

2.2 rhEPO的酶解27-28

2.1 酶的选择27-28

2.2 酶解条件28

2.3 rhEPO酶解样品的液相色谱质谱定性浅析策略28-29

2.3.1 液相条件29

2.3.2 质谱条件29

2.4 结果与讨论29-38

2.4.1 一级质谱浅析29-33

2.4.2 O-连接糖肽的二级质谱浅析33-35

2.4.3 N-连接糖肽的二级质谱浅析35-38

2.5 本章小结38-39

第三章 傅立叶变换-离子回旋共振质谱法对rhEPO中糖基化结构的浅析探讨39-59

3.1 仪器及试剂39-40

3.

1.1 实验仪器39-40

3.

1.2 实验试剂40

3.2 rhEPO酶解后样品的直接质谱浅析40-42
3.

2.1 酶解后样品的脱盐处理40

3.

2.2 脱盐后样品的质谱浅析40-42

3.3 rhEPO酶解后糖肽组分的液相收集42-44

3.1 液相条件42

3.2 糖肽组分的收集42-44

3.4 N-连接糖肽组分的论文导读：浅析44-493.4.1N-连接糖肽组分的CAD浅析44-473.4.2N-连接糖肽组分的ECD浅析47-493.5O-连接糖肽组分的浅析49-583.5.1O-连接糖肽组分的CAD浅析50-513.5.2O-连接糖肽组分的ECD浅析51-583.6本章小结58-59第四章结论59-60符号说明60-61参考文献61-66攻读硕士学位期间发表的学术论文66上一页12
FT-ICR MS浅析44-49

3.4.1 N-连接糖肽组分的CAD浅析44-47

3.4.2 N-连接糖肽组分的ECD浅析47-49

3.5 O-连接糖肽组分的FT-ICR MS浅析49-58

3.5.1 O-连接糖肽组分的CAD浅析50-51

3.5.2 O-连接糖肽组分的ECD浅析51-58

3.6 本章小结58-59

第四章 结论59-60
符号说明60-61
参考文献61-66
攻读硕士学位期间发表的学术论文66