罗非鱼下脚料酶解产物中抗菌肽初步探讨

论文片段—272与方法27-362.127-292.1.1实验272.1.2主要试剂272.1.3主要仪器设备27-282.1.4检测培养基282.1.5指示菌悬液的制备28-292.2方法29-362.2.1预处理292.2.2酶解292.2.3灭酶292.2.4最佳酶解条件的确定29-302.2.5初步抑菌作用试验302.2.6抗菌活性的检测30-332.2.7抗菌肽的分离制备33-342.2.8抗菌肽的纯化342.2.罗非鱼下脚料论文,酶解论文,抗菌肽论文,抑菌活性论文,
摘要：抗菌肽是一类广泛存在于生物体中的小分子多肽,具有抗菌活性强、抗菌谱广、合成和杀菌速度快、不易产生耐药性等特点,有望新一代的抗菌制剂。罗非鱼长期生活于富含各种各样微生物的水环境中,为了适应生存使其形成了防御功能的抗菌肽。为了具有抑菌活性的抗菌肽,开展罗非鱼下脚料的深加工利用,提高综合效益、减少环境污染;为罗非鱼下脚料的深加工利用理论基础。本研究以罗非鱼下脚料为原料,经过试验最佳酶解条件为:选用2709碱性蛋白酶,酶解温度为55℃,pH为9.0,底物浓度为10%,加酶量为4000 U/g,酶解时间5h论文。酶解液在4℃下,以12000 rpmin的速度离心20 min,上清液经分子质量截留为1 ku的超滤,分子质量小于1 ku的粗肽组分,再经离子交换和反相蛋白质液相色谱( FPLC)分析,两种具有高活性的抗菌肽F21和F22其相对分子质量为528.6和504.2教学论文。F21对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtips)、大肠杆菌(Escherichia cop)和金葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的MIC分别为3.44μg/ml,4.72μg/ml和6.54μg/ml。F22对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金葡萄球菌的MIC分别为3.28μg/ml,2.55μg/ml和7.31μg/ml。F21和F22在等电点、离子特性和疏水特性等非常,并且具有较高的热稳定性文化论文。首次从罗非鱼下脚料中酶解了具有活性的抗菌肽。关键词：罗非鱼下脚料论文酶解论文抗菌肽论文抑菌活性论文
摘要3-4
Abstract4-9
1 前言9-27

1.1 抗菌肽的特点、来源、分类和作用机理9-15

1.1 抗菌肽的特点9-10

1.2 抗菌肽的来源与分类10-13

1.3 抗菌肽的作用机理及作用特点13-14

1.4 抗菌肽的生物活性14-15

1.2 抗菌肽的分子生物学15-18

1.2.1 抗菌肽基因的分子生物学15-16

1.2.2 抗菌肽基因的合成16

1.2.3 抗菌肽基因的表达调控16-17

1.2.4 抗菌肽的基因工程17-18

1.3 抗菌肽的制备方法18-19

1.3.1 提取法18-19

1.3.2 固相合成法19

1.4 抗菌肽的应用19-24

1.4.1 在医药工业中的应用19-23

1.4.2 在食品工业中的应用23

1.4.3 饲料工业23-24

1.5 抗菌肽应用中解决的问题及应用前景24-25

1.6 罗非鱼抗菌肽25

1.7 本课题研究及内容25-27

2 与方法27-36

2.1 27-29

2.

1.1 实验27

2.

1.2 主要试剂27

2.

1.3 主要仪器设备27-28

2.

1.4 检测培养基28

2.

1.5 指示菌悬液的制备28-29

2.2 方法29-36

2.1 预处理29

2.2 酶解29

2.3 灭酶29

2.4 最佳酶解条件的确定29-30

2.5 初步抑菌作用试验30

2.6 抗菌活性的检测30-33

2.7 抗菌肽的分离制备33-34

2.8 抗菌肽的纯化34

2.9 抗菌肽的性质34-36

3 结果与分析36-50

3.1 最佳酶解条件的选择36-41

3.

1.1 温度对抑菌活性的影响36

3.

1.2 pH 对抑菌活性的影响36-37

3.

1.3 加酶量对抑菌活性的影响37-38

3.

1.4 底物浓度对抑菌活性的影响38

3.

1.5 时间对抑菌活性的影响38-39

3.

1.6 酶解条件正交试验39-40

3.

1.7 酶的选择40-41

3.2 最佳酶解条件下所得的粗肽产品的抑菌活性41-44
3.

2.1 粗肽产品对枯草芽孢杆菌抑菌活性41-42

3.

2.2 粗肽产品对大肠杆菌的抑菌活性42-43

3.

2.3 粗肽产品对金葡萄球菌的抑菌活性43-44

3.3 对几株不同菌株抑菌效果的比较44

3.4 抗菌肽的分离纯化44-47

3.4.1 样品的制备及阳离子交换分离44-45

3.4.2 反相FPLC 分析45-47

3.5 抗菌肽的性质47-50

3.5.1 纯度及分子量的检测47-48

3.5.2 茚三酮反应48

3.5.3 最低抑菌浓度(MIC)的测定48

3.5.4 热稳定性48-50

4 讨论50-51
5 51-52
参考文献52-60
致谢60