探究黄芩黄芩苷对TGF-β_1诱导人肾小管上皮细胞转分化中Smad3、Smad7表达影响及作用

论文导读：
摘要：背景肾小管间质纤维化(Renal Interstitial Fibrosis,RIF)是各种慢性肾脏病进展至终末期肾病历程中必有和重要的体现。肌成纤维细胞(Myofibroblast,MF)的产生及其在肾间质中的聚积和随后发生的肾小管萎缩被认为是RIF的核心因素。MF的来源一直备受瞩目。近10年来,有关报道提出,肾小管上皮-间充质转分化(epithetpal mese nchymal transition,EMT)可能是MF的主要来源之一。由此肾小管EMT在RIF发生进展中的作用日益受到重视。引起肾小管EMT的因素很多,包括损伤、炎症和生长因子等,其中转化生长因子-β1(tranorming growth factor-β1,TGF-β1)在肾小管上皮细胞发生EMT中的作用也越来越受到关注。中药提取物黄芩苷(Baicapn)具有抗RIF、肺纤维化及肝纤维化的作用,其抗RIF的作用机制是否通过抑制肾小管EMT,需要进一步探讨。目的本课题采取细胞培养的策略,体外观察黄芩苷对TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞(human renal tubular epithepal cell,HK-2)转分化作用的影响,探讨黄芩苷抗RIF的可能作用机制,为临床运用黄芩苷抗RIF提供论述依据。策略选取处于对数期生长的HK-2细胞,分为6个试验组：(1)空白对照组：仅加入胎牛血清的DMEM培养基；(2)TGF-β1诱导组：选择5μg/L TGF-βl作为有效诱导浓度；(3)干预组：5μg/L TGF-β1+40μmol/L黄芩苷；(4)干预组：5μg/LTGF-β1+80μmol/L黄芩苷；(5)干预组：5gg/L TGF-β1+160gmol/L黄芩苷；(6)干预组：5μg/L TGF-β1+320μmol/L黄芩苷。基于本课题前期探讨证实,12h后TGF-β1诱导的HK-2即发生了形态学转变,且随着时间的延长,细胞转变越显著。故本实验选取培养72h时的细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,并于24h、48h、72h时观察细胞增殖情况；并利用RT-PCR法检测培养72h时的各组细胞表达Smad3mRNA、Smad7mRNA情况。结果1.空白对照组细胞培养72h时,细胞形状呈方形或轻度多角形变,具有典型的铺路石样特点。TGF-β1诱导组体现为细胞拉长、肥大,变长梭形,细胞间隙论文导读：
变大,胞浆透明度下降,丧失了铺路石样生长方式。黄芩苷各组细胞变形程度均轻于TGF-β1诱导组,且随着黄芩苷浓度的增加,细胞发生梭形变的程度逐渐减轻,当黄芩苷浓度增加到320μmol/L时,HK-2细胞形态基本维持正常。2.5μg/LTGF-β1诱导组能显著诱导HK-2细胞增殖,并随着时间延长增殖能力逐渐增强,与空白对照组相比有显著性差别(P0.05)；用黄芩苷进行干预后,其促细胞增殖作用受到显著抑制,且各干预组随着黄芩苷浓度的增加,抑制作用越显著,但40μmol/L黄芩苷组抑制作用较弱,而160μmol/L、320μmol/L黄芩苷组细胞抑制作用基本相等。3.TGF-β1诱导的HK-2细胞培养72h时, Smad3mRNA的表达量显著上升,Smad7mRNA则显著下降。不同浓度黄芩苷进行干预后,随着黄芩苷浓度增加,细胞Smad3mRNA表达量逐渐降低,Smad7mRNA表达量逐渐增加。40μmol/L黄芩苷组HK-2细胞Smad3mRNA、Smad7mRNA表达量更接近于TGF-β1诱导组。160μmol/L、320μmol/L黄芩苷组细胞Smad3mRNA、Smad7mRNA表达量更接近于空白对照组,但这两组之间无统计学差别。结论1.5μg/L TGF-β1可诱导HK-2细胞转化为长梭形细胞,而黄芩苷可抑制这一转变。2.黄芩苷可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖。3.黄芩苷抑制HK-2细胞转分化作用与Smad7表达增高和Smad3表达降低有关。4.黄芩苷浓度增加至160μmol/L时,抑制HK-2细胞转分化作用不再增强。关键词：TGF-β_1论文黄芩苷论文Smad3论文Smad7论文转分化论文
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Abstract9-12
前言12-14
1 材料与策略14-22

1.1 材料14-15

1.2 主要仪器15

1.3 主要试剂配制15-17

1.4 策略17-22

1.4.1 细胞培养与传代17

1.4.2 细胞冻存17

1.4.3 细胞复苏17

1.4.4 实验设计17-18

1.4.5 细胞形态学观察18

1.4.6 MTT法检测黄芩苷对TGF-β_1诱导的HK论文导读：附录49-50攻读学位期间发表文章情况50-51致谢51-52个人简历52上一页123
-2细胞增殖的影响18
1.4.7 利用RT-PCR法检测黄芩苷对TGF-β_1诱导的HK-2细胞表达Smad3mRNA、Smad7mRNA的情况18-22

1.

4.8 统计学浅析22

2 结果22-28

2.1 黄芩苷对TGF-β_1诱导的HK-2细胞形态转变22-24

2.2 黄芩苷对TGF-β_1诱导的HK-2细胞增殖的作用24-25

2.3 黄芩苷对TGF-β_1诱导的HK-2细胞表达Smad3 mRNA、Smad7mRNA的变化25-28

2.3.1 Smad3 mRNA的表达25

2.3.2 Smad7 mRNA的表达25-28

3 讨论28-33
4 结论33-34
参考文献34-38
综述：TGF-β_1/Smads信号传导通路与肾间质纤维化联系的探讨38-49
参考文献45-49
附录49-50
攻读学位期间发表文章情况50-51
致谢51-52
个人简历52