分析干细胞添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性影响

论文导读：
摘要：胚胎干细胞是由内细胞团分离培养得到的,在适当的条件下能分化成所有类型的细胞。为筛选出能够维持绵羊类胚胎干细胞多能性的因子,以实验室建系的oESC-pke为材料,培养细胞8d,以形态、增殖、P以及多能性候选基因Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Lin28mRNA表达量的变化,浅析绵羊类胚胎干细胞的多能性,确定维持绵羊类胚胎干细胞多能性的因子。主要探讨结果：在N2B27/CH中,添加PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PDhLIF/BMP4培养8d,通过与本实验室原培养系统N2B27/CH/bFGF相比,结果显示,添加PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PD/hLIF/BMP4oESC-pke细胞都表达P与Sox2、Oct4免疫荧光蛋白；添加PD、PD/hLIF oESC-pke细胞之间的结合致密,oESC-pke细胞的生长速度减慢；而添加PD/BPM4、PD/hLIF/BMP4oESC-pke细胞之间的结合疏松,oESC-pke细胞的生长速度增快。添加PD和PD/hLIF使多能性候选基因Lin28与c-Myc表达量升高差别极显著(P0.01),Nestin的表达量降低差别极显著(P0.01),加入PD/hLIF使Oct4表达量升高差别极显著(P0.01),添加PD/BPM4、PDhLIF/BMP4使多能性候选基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4的表达量降低差别极显著(P0.01),Nestin与Lin28的表达量降低差别极显著(P0.01)。在培养系统N2B27/CH/bFGF中,分别加入PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PDhLIF/BMP4培养细胞8d,与N2B27/CH/bFGF相比,结果显示：P染色及Sox2与Oct4免疫荧光蛋白染色结果表明,添加不同因子后oESC-pke显示胚胎干细胞多能性,添加PD多能性候选基因Oct4与Klf4mRNA的表达量升高差别显著(P0.01),Nestin与Lin28的表达量降低差别极显著(P0.01),Sox2与c-Myc升高差别不显著。添加hLIF/PD使多能性候选基因Oct4的表达量表达量升高差别极显著(P0.01),c-Myc、Klf4、Lin28表达量升高差别不显著,Nestin、Sox2表达量降低差别不显著。添加PD/BPM4、 PD/hLIF/BMP4使Oct4、Sox2、Nestin表达量降低差别显著(P0.01),使Lin28、c-Myc、Klf4表达量降低差别不显著。分别将选出的N2B27/CH/PD、N2B27/CH/PD/hLIF、N2B27/CH/bFGF/PD、N2B27/CH/bFGF/PD/hLIF进行培养,结果显示,添加PD、PD/hLIF与bFGF/PD、bFGF/PD/hLIF相比,oESC-pke细胞表达碱性磷酸酶、生长速度快、细胞之间的结合更加致密,且多能性候选基因Sox2与Oct4表达免疫荧光蛋白。添加PD与bFGF/PD相比,oESC-pke细胞多能性候选基因Oct4、Klf4与c-Myc的表达量升高差别极显著(P0.01),Sox2的表达量升高差别不显著,c-Myc与Nestin的表达量降低差别极显著(P0.01)。关键词：绵羊类胚胎干细胞论文多能性调控因子论文候选基因论文体外培养论文
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Abstract5-8
第1章 引言8-16

1.1 目的与作用8-9

1.2 细胞因子探讨进展9-11

1.3 多潜能性候选基因的探讨进展11-14

1.4 实验思路与探讨内容14-16

第2章 在无bFGF培养系中添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响16-34

2.1 材料与策略16-25

2.2 结果与浅析25-32

2.3 讨论32-34

第3章 bFGF培养系统中添加不同的因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响34-40

3.1 材料与策略34

3.2 结果与浅析34-38

3.3 讨论38-40

第4章 bFGF对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响40-45

4.1 材料与策略40

4.2 结果与浅析40-44

4.3 讨论44-45

第5章 结论45-46
参考文献46-49
致谢49-50
作者介绍50