鱼头多糖分离提取、纯化及功能鉴定

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摘要：在鱼等水产品加工中产生的下脚料约占原料鱼的40%-45%。开展水产品加工下脚料和废弃物的综合利用,可变废为宝,生产出各种农业、轻工、医药、环保和食品行业所需的新产品,大大提高水产品的附加值,降低主导产品的成本,取得较高的经济、生态和社会效益。因此,鱼加工废弃物的开发利用越来越受到本科毕业论文范文。本课题以淡水鱼鱼头为原料,研究了鱼头多糖的不同提取方法和最佳提取条件,了鱼头多糖的体外抗氧化实验的研究,还了一系列细胞培养的实验来研究其功能财务管理论文。单因素实验,均匀设计和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验确定了鱼头多糖的最佳提取方法以及最优提取条件,即提取温度30℃,乙醇浓度75%,料液比1:5.5,提取时间13h和提取液浓度1mol/L。体外抗氧化实验证明:鱼头多糖对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基都有一定的清除作用,且能达到较高的清除率。鱼头多糖对超氧阴离子自由基和羟自由基的半数清除浓度分别为0.41mg/mL和1.98 mg/mL。MTT实验,鱼头多糖对白血病细胞K562和肝癌细胞BEL7402都有抑制作用。对K562细胞和BEL7402细胞的形态观察可知,鱼头多糖对K562细胞和BEL7402细胞的确有杀伤作用,但是细胞的死亡方式不是凋亡毕业论文致谢。鱼头多糖作用于K562细胞后,多糖作用时间的增加,S期比例增加,G_0/G_1和G_2/M比例减少;鱼头多糖作用的BEL7402细胞则无周期变化,仅仅出现凋亡细胞数增多的现象毕业生论文。在多糖作用72h后,凋亡细胞的比例分别为K562细胞21.28%,BEL7402细胞11.80%毕业论文。这,鱼头多糖对BEL7402细胞周期分布无影响,且凋亡现象不,并伴有的坏死现象。关键词：鱼头多糖论文SDS-PAGE论文K562细胞论文BEL7402细胞论文体外抗氧化论文MTT法论文细胞周期论文
摘要4-5
ABSTRACT5-9

1.前言9-23

1.1 水产资源综述9-11

1.1 我国水产资源简介9

1.2 我国水产加工9-10

1.3 鱼头简介10-11

1.2 多糖11-14

1.2.1 多糖的生理活性11-12

1.2.2 多糖抗癌的研究进展12-13

1.2.3 活性多糖在食品中的应用13-14

1.3 体外抗氧化概述14-21

1.3.1 抗氧化与自由基15-18

1.3.2 协助体内抗氧化的物质18

1.3.3 抗氧化的方法18-21

1.4 本课题的研究内容及21-23

2.与方法23-37

2.1 23-25

2.

1.1 实验仪器23

2.

1.2 试剂23-25

2.

1.3 实验细胞25

2.

1.4 实验原料25

2.2 实验方法25-37

2.1 鱼头比例的测定25

2.2 鱼头常规成分的检验25-26

2.3 鱼头多糖的乙醇-氢氧化钠提取方法26

2.4 鱼头多糖的水提取方法26-27

2.5 鱼头多糖的生理盐水提取方法27

2.6 鱼头多糖的弱碱提取方法Ⅰ27

2.7 鱼头多糖的弱碱提取方法Ⅱ27

2.8 单因素实验确定各种提取方法最佳提取条件27-28

2.9 鱼头的多糖含量的测定28

2.10 鱼头粗多糖的蛋白质含量的测定28-30

2.11 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)30-32

2.12 鱼头多糖的纯化方法32-33

2.13 鱼头多糖体外抗氧化能力的测定33-34

2.14 鱼头多糖的红外光谱分析34

2.15 细胞系及细胞培养34-35

2.16 MTT法检测鱼头多糖的胞毒作用35

2.17 HE染色35-36

2.18 细胞周期分布的测定36-37

3.结果与讨论37-65

3.1 鱼头等各占鱼体比例测定结果37

3.2 鱼头常规成分的检验结果37

3.

2.1 杂质测定结果37

3.

2.2 鱼头的水分含量测定结果37

3.

2.3 鱼头的脂肪含量测定结果37

3.3 乙醇-氢氧化钠提取方法的最佳提取条件37-39

3.4 水、生理盐水及弱碱提取方法Ⅰ的最佳提取条件39-40

3.5 弱碱提取方法Ⅱ的最佳提取条件40-45

3.6 多糖含量的测定结果45-46

3.6.1 多糖标准曲线的绘制45

3.6.2 多糖含量的测定结果45-46

3.7 蛋白含量的测定结果46-47

3.7.1 Fopn-酚法测定蛋白质含量标准曲线的绘制46

3.7.2 Fopn-酚法测定蛋白质含量的测定结果46

3.7.3 微量凯氏定氮法(Micro-Kjeldahl)总氮含量测定结果46-47

3.8 SDS-PAGE所得结果47-48

3.9 鱼头多糖最佳提取方法的确定48-49

3.9.1 各种提取方法的优缺点48

3.9.2 最佳提取方法的确定48-49

3.10 DEAE Sephadex A-25(DEAE葡聚糖凝胶A-25)柱纯化结果49-50

3.11 鱼头多糖红外光谱实验结果50-52

3.12 鱼头多糖体外抗氧化实验结果52-58

3.1

2.1 鱼头多糖清除DPPH·(1,2-二苯代苦味肼基自由基)实验结果52-55

3.1

2.2 鱼头多糖清除超氧阴离子(O~(2-)·)作用结果55-56

3.1

2.3 鱼头多糖清除羟自由基(·OH)能力的测定结果56-58

3.1

2.4 抗氧化实验58

3.13 鱼头多糖对肿瘤细胞的增殖抑制作用58-60

3.14 HE染色观察细胞形态变化60-61

3.15 鱼头多糖对细胞周期分布影响的结果61-65

4.65-67

5.展望67-68

6.参考文献68-73

7.攻读硕士学位期间论文发表情况73-74

8.致谢74