试谈抗病毒鸡基因工程复合抗病毒制剂冻干、安全性及体外抗病毒活性
最后更新时间:2024-01-15
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论文导读:
摘要:病毒性疫病在动物疫病中占有比例很大,而且发病率和死亡率呈上升走势,病毒性疫病日益成为危害养殖业健康进展的首要因素,目前,病毒性疾病尚无特效药物可以治疗,为了探讨开发一种无耐药残留性的基因工程抗病物,解决当前兽医临床上无高效广谱抗病物可用的困境,本探讨对以ChIFN-α-pnker-ChIL-2蛋白为主要成份的鸡基因工程复合抗病毒制剂进行了冻干、安全性及体外抗病毒活性的探讨。筛选不同配方的鸡基因工程复合抗病毒制剂冻干保护剂,分别采取在110℃,15min和115℃,20min条件下高压灭菌处理的不同比例脱脂奶粉、蔗糖、海藻糖以及维生素C组成的不同保护剂配方为佐剂,对鸡基因工程复合抗病毒制剂进行冻干试验,通过外观检查、pH值检测、复水性检测及效价测定等指标以鉴定冻干后制剂的性状,最终筛选出理想的冻干保护剂配方;将普通水剂型和冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂分别置于4℃、-20℃、-70℃条件下进行保存期试验。对鸡基因工程复合抗病毒制剂进行无菌检查、细菌内毒素检查、生物检验(豚鼠检验、小白鼠检验、乳鼠检验、鸡体检验)和生物安全检验(氨苄青霉素(Amp)残留检测、大肠杆菌菌体蛋白(E.cop P)残留测定)以检测制剂的安全性。分别测定鸡基因工程复合抗病毒制剂在CEF细胞上抗滤泡性口炎病毒(VSV)及传染性法氏囊病毒(IBDV)的活性以检测制剂的体外抗病毒活性。结果表明:采取脱脂奶粉+蔗糖和脱脂奶粉+蔗糖+海藻糖+维生素C组成的不同冻干保护剂配方为佐剂,经110℃,15min的高压灭菌方式处理后,与鸡基因工程复合抗病毒制剂混合冻干,结果外观良好,pH值为7.3,与冻干前保持一致,平均复水时间不超过5s,冻干后制剂抗病毒活性效价为220,表明这两种配方能够起到良好的冻干保护效果。保存期试验结果为在-70℃条件下,水剂和冻干剂型鸡基因工程复合抗病毒制剂最长放置1年效价均无下降,而在4℃和-20℃保存条件下,普通水剂分别于90d、180d后效价开始显著下降,而冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂的效价均无显著降低,表明所筛选的冻干保护剂配方能够较好地发挥对鸡基因工程复合抗病毒制剂的保护作用,显著延长鸡基因工程复合抗病毒制剂的保存期。安全性试验中无菌检查结果合格,细菌内毒素检查结果为阴性,豚鼠、小白鼠及乳鼠全部健活,经前后称量比较,体重全部增加,氨苄青霉素(AM)残留检测结果为阴性,大肠杆菌菌体蛋白(E.cop P)残留量为0.16μg/mL,低于样品蛋白总量0.1%,合格。鸡基因工程复合抗病毒制剂在CEF细胞上抑制滤泡性口炎病毒(VSV)及传染性法氏囊病毒(IBDV)病变的生物学活性分别高达5.243×10~6IU/mL和6.554×10~5IU/mL,具有良好的体外抗病毒活性。本探讨筛选出了鸡基因工程复合抗病毒制剂的冻干保护剂,生产出鸡基因工程复合抗病毒冻干制剂,外观性状好、性质稳定,能够显著延长保存期,解决了水剂型制剂热稳定性差、不易长期保存和远距离运输等不足,同时证明鸡基因工程复合抗病毒制剂安全性良好,在体外具有良好的抗VSV和IBDV病毒活性。本探讨为鸡基因工程复合抗病毒制剂的产业化生产、制剂的新兽药注册和临床推广运用工作奠定了一定基础。关键词:鸡基因工程复合抗病毒制剂论文冻干论文安全性论文体外论文抗病毒活性论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要2-4
ABSTRACT4-8
第1章 文献综述8-19
制剂冻干探讨19-26
3.
4.
第5章 结论46-47
缩略语词汇表53-54
致谢54-55
攻读硕士学位期间的探讨成果55
摘要:病毒性疫病在动物疫病中占有比例很大,而且发病率和死亡率呈上升走势,病毒性疫病日益成为危害养殖业健康进展的首要因素,目前,病毒性疾病尚无特效药物可以治疗,为了探讨开发一种无耐药残留性的基因工程抗病物,解决当前兽医临床上无高效广谱抗病物可用的困境,本探讨对以ChIFN-α-pnker-ChIL-2蛋白为主要成份的鸡基因工程复合抗病毒制剂进行了冻干、安全性及体外抗病毒活性的探讨。筛选不同配方的鸡基因工程复合抗病毒制剂冻干保护剂,分别采取在110℃,15min和115℃,20min条件下高压灭菌处理的不同比例脱脂奶粉、蔗糖、海藻糖以及维生素C组成的不同保护剂配方为佐剂,对鸡基因工程复合抗病毒制剂进行冻干试验,通过外观检查、pH值检测、复水性检测及效价测定等指标以鉴定冻干后制剂的性状,最终筛选出理想的冻干保护剂配方;将普通水剂型和冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂分别置于4℃、-20℃、-70℃条件下进行保存期试验。对鸡基因工程复合抗病毒制剂进行无菌检查、细菌内毒素检查、生物检验(豚鼠检验、小白鼠检验、乳鼠检验、鸡体检验)和生物安全检验(氨苄青霉素(Amp)残留检测、大肠杆菌菌体蛋白(E.cop P)残留测定)以检测制剂的安全性。分别测定鸡基因工程复合抗病毒制剂在CEF细胞上抗滤泡性口炎病毒(VSV)及传染性法氏囊病毒(IBDV)的活性以检测制剂的体外抗病毒活性。结果表明:采取脱脂奶粉+蔗糖和脱脂奶粉+蔗糖+海藻糖+维生素C组成的不同冻干保护剂配方为佐剂,经110℃,15min的高压灭菌方式处理后,与鸡基因工程复合抗病毒制剂混合冻干,结果外观良好,pH值为7.3,与冻干前保持一致,平均复水时间不超过5s,冻干后制剂抗病毒活性效价为220,表明这两种配方能够起到良好的冻干保护效果。保存期试验结果为在-70℃条件下,水剂和冻干剂型鸡基因工程复合抗病毒制剂最长放置1年效价均无下降,而在4℃和-20℃保存条件下,普通水剂分别于90d、180d后效价开始显著下降,而冻干型鸡基因工程复合抗病毒制剂的效价均无显著降低,表明所筛选的冻干保护剂配方能够较好地发挥对鸡基因工程复合抗病毒制剂的保护作用,显著延长鸡基因工程复合抗病毒制剂的保存期。安全性试验中无菌检查结果合格,细菌内毒素检查结果为阴性,豚鼠、小白鼠及乳鼠全部健活,经前后称量比较,体重全部增加,氨苄青霉素(AM)残留检测结果为阴性,大肠杆菌菌体蛋白(E.cop P)残留量为0.16μg/mL,低于样品蛋白总量0.1%,合格。鸡基因工程复合抗病毒制剂在CEF细胞上抑制滤泡性口炎病毒(VSV)及传染性法氏囊病毒(IBDV)病变的生物学活性分别高达5.243×10~6IU/mL和6.554×10~5IU/mL,具有良好的体外抗病毒活性。本探讨筛选出了鸡基因工程复合抗病毒制剂的冻干保护剂,生产出鸡基因工程复合抗病毒冻干制剂,外观性状好、性质稳定,能够显著延长保存期,解决了水剂型制剂热稳定性差、不易长期保存和远距离运输等不足,同时证明鸡基因工程复合抗病毒制剂安全性良好,在体外具有良好的抗VSV和IBDV病毒活性。本探讨为鸡基因工程复合抗病毒制剂的产业化生产、制剂的新兽药注册和临床推广运用工作奠定了一定基础。关键词:鸡基因工程复合抗病毒制剂论文冻干论文安全性论文体外论文抗病毒活性论文
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ABSTRACT4-8
第1章 文献综述8-19
1.1 概述8-9
1.2 IFN 探讨进展9-11
1.2.1 IFN 的生物功能9-10
1.2.2 IFN 的作用机制10
1.2.3 鸡 IFN-α国内外探讨进展10-11
1.3 IL-2 的探讨进展11-14
1.3.1 白细胞介素-2 的生物学功能11-12
1.3.2 IL-2 的运用12-13
1.3.3 鸡 IL-2 的探讨进展13-14
1.4 干扰素冷冻干燥探讨进展14-17
1.4.1 冷冻干燥原理及历程14-15
1.4.2 药品冻干损伤和保护机理15-16
1.4.3 干扰素的冻干工艺16-17
1.5 探讨目的与作用17-19
第2章 鸡基因工程复合抗病毒论文导读:制剂冻干探讨19-26
2.1 材料19
2.2 策略19-21
2.1 冻干保护剂的准备19-20
2.2 冻干工艺20
2.3 鸡基因工程复合抗病毒制剂冻干制品的检测20-21
2.4 鸡基因工程复合抗病毒制剂保存期试验21
2.3 结果21-24
2.3.1 外观检查21
2.3.2 pH 值检测21
2.3.3 复水性21
2.3.4 效价测定21-23
2.3.5 鸡基因工程复合抗病毒制剂(水剂和冻干剂型)保存期试验结果23-24
2.4 讨论24-26
第3章 鸡基因工程复合抗病毒制剂安全性试验26-373.1 试验仪器和材料26-28
3.1.1 主要实验材料26
3.1.2 主要仪器设备26
3.1.3 试剂盒26-27
3.1.4 主要培养基的配制27-28
3.1.5 稀释液、冲洗液的配制28
3.2 试验策略28-343.
2.1 物理形状28
3.2.2 无菌检验28-29
3.2.3 细菌内毒素检验29-31
3.2.4 安全检验31-32
3.2.5 生物安全32-34
3.3 结果34-363.1 物理性状34
3.2 无菌检验34
3.3 细菌内毒素检验34
3.4 安全试验34-35
3.5 生物安全试验35-36
3.4 讨论36-37
第4章 鸡基因工程复合抗病毒制剂体外抗病毒活性试验37-464.1 鸡基因工程复合抗病毒制剂在 CEF 细胞上抗 VSV 活性测定37-40
4.1.1 材料37
4.1.2 实验策略37-38
4.1.3 结果与浅析38-40
4.2 鸡基因工程复合抗病毒制剂在 CEF 细胞上抗 IBDV 活性测定40-444.
2.1 材料40-41
4.2.2 实验策略41-42
4.2.3 结果与浅析42-44
4.3 讨论44-46第5章 结论46-47
5.1 鸡基因工程复合抗病毒制剂的冻干探讨46
5.2 鸡基因工程复合抗病毒制剂的安全性试验46
5.3 鸡基因工程复合抗病毒制剂的体外抗病毒活性试验46-47
参考文献47-53缩略语词汇表53-54
致谢54-55
攻读硕士学位期间的探讨成果55