浅析干细胞人毛囊间充质干细胞重编程诱导为iPS细胞

论文导读：胞的来源和数量一直是干细胞组织工程探讨领域的重点和难点。胚胎干细胞（ESCs）的获得及其向多种组织细胞诱导的成功，曾给许多认为是不治之症的患者带来存活和康复的希望，但很快受到的困扰而举步维艰；成体干细胞的异体运用虽可回避不足，但又受到免疫排斥和疾病传播风险的限制；iPS细胞的技术突破为倍受争议的人胚胎干细
摘要：干细胞的来源和数量一直是干细胞组织工程探讨领域的重点和难点。胚胎干细胞（ESCs）的获得及其向多种组织细胞诱导的成功，曾给许多认为是不治之症的患者带来存活和康复的希望，但很快受到的困扰而举步维艰；成体干细胞的异体运用虽可回避不足，但又受到免疫排斥和疾病传播风险的限制；iPS细胞的技术突破为倍受争议的人胚胎干细胞（hESCs）的运用提出了新的解决案例，并已经取得一些重大成果，目前是一旦传递多能性因子的载体以及诱导的低效率不足得到解决，那么重编程靶细胞的选择即成为亟待解决的当务之急。为建立一种来源丰富、取材方便，取材对机体无损害且可重复获得的自体干细胞作为重编程靶细胞的来源，本实验以人毛囊间充质干细胞（hHF-MSCs）的分离、培养、扩增及鉴定入手，并以hHF-MSCs为靶细胞，进行了去分化重编程为iPS细胞的实验探讨。通过直接拔取人头发的方式，首次在人毛囊组织中发现具有多向分化潜能的干细胞。经细胞表面抗原以及中胚层细胞谱系等多向分化能力的检测，证实了我们获得的毛囊源性干细胞的间充质性质，并确定为人毛囊间充质干细胞（hHF-MSCs），这不仅是本探讨的重要发现，也为后续实验奠定了坚实的基础。随后我们探讨组以hHF-MSCs作为探讨的靶细胞，通过Yamanaka因子（Oct4，Sox2，c-Myc，Klf4）的导入，首次将其成功的重编程为iPS细胞。通过碱性磷酸酶染色，人胚胎干细胞特异性细胞表面抗原SSEA-4，SSEA-3，Tra-1-60，Tra-1-81等检测，内源性多能性基因Oct4endo，Sox2endo，Nanog，Cripto，FoxD3，Lin28等表达是否上调的检测，核型浅析以及免疫缺陷小鼠体内畸胎瘤形成实验，证实了hHF-MSC-derived iPSCs具有和hESCs相同的特点，以而首次将hHF-MSCs重编程为iPS细胞获得成功，为hHF-MSC-derived iPSCs的进一步运用提供了重要的实验基础。综上所述，本实验通过hHF-MSCs体外分离培养、扩增的技术系统的建立和将hHF-MSCs重编程为iPS细胞的成功，分别获得了hHF-MSCs和hHF-MSC-derivediPSCs。两种细胞的获得不仅对干细胞来源等的基础探讨是一重大突破，也可以用hHF-MSC-derived iPSCs代替hESCs进行组织发生、药物筛选、再生医学等的许多重大基础探讨，也为组织工程材料的构建提供新的种子细胞来源。同时，为运用iPSCs进行疾病的个体化治疗提供新的途径。关键词：诱导性多潜能干细胞论文人毛囊间充质干细胞论文胚胎干细胞论文
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中文摘要5-7
ABSTRACT7-9
英文缩略词表9-12
第1篇 前言12-14
第2篇 文献综述14-44
第1章 人胚胎干细胞探讨概况15-19
1 干细胞及干细胞分类15-16
2 人胚胎干细胞16-18
3 hESCs 探讨面对的不足18-19
第2章 iPSCs 的探讨19-38
1 iPSCs 产生的历史回顾19-20
2 体细胞重编程为多潜能干细胞20-21
3 目前获得 ESCs 以及 iPSCs 的方式21-23
4 iPSCs 的诱导对策23-35
5 iPSCs 探讨有着的不足35-36
6 iPSCs 探讨的前景36-38
第3章 人毛囊间充质干细胞诱导为 iPSCs 的探讨38-44
1 间充质干细胞38
2 人毛囊间充质干细胞38-40
3 将人毛囊间充质干细胞诱导为 iPSCs40-44
第3篇 实验探讨44-107
第1章 hHF-MSCs 的分离培养及鉴定44-59

1.1 hHF-MSCs 的分离培养44-47

1.2 hHF-MSCs 的鉴定47-56

1.3 讨论56-58

1.4 小结58-59

第2章 hHF-MSCs 重编程诱导为 iPSCs59-89
2.1 pLV-EF1α-CDNA-IRES-EGFP 及慢病毒包装质粒pVSVG，Δ8.91 的提取及酶切鉴定59-64

2.2 hHF-MSCs 的支原体检测，核型检测及分子印迹检测64-69

2.3 分别携带有 O论文导读：支原体检测，核型检测及分子印迹检测100-1033.6讨论103-1063.7小结106-107第4篇结论107-108课题革新性总结108-110参考文献110-125作者介绍及在学期间所取得的科研成果125-126致谢126上一页12
ct4，Sox2，c-Myc 和 Klf4 慢病毒的生产及慢病毒滴度的测定69-73
2.4 感染靶细胞 hHF-MSCs 最适感染复数（Multippcity of Infection, MOI）的确定73-76

2.5 hHF-MSC-derived iPSCs 的产生76-85

2.6 讨论85-88

2.7 小结88-89

第3章 hHF-MSC-derived iPSCs 多能性的鉴定89-107
3.1 hHF-MSC-derived iPSCs 的形态学特点和碱性磷酸酶检测89-90
3.2 hHF-MSC-derived iPSCs 的多能性表面标记物检测90-92
3.3 hHF-MSC-derived iPSCs 内、外源性多能性基因的表达92-98

3.4 hHF-MSC-derived iPSCs 的畸胎瘤检测98-100

3.5 hHF-MSC-derived iPSCs 的支原体检测，核型检测及分子印迹检测100-103

3.6 讨论103-106

3.7 小结106-107

第4篇 结论107-108
课题革新性总结108-110
参考文献110-125
作者介绍及在学期间所取得的科研成果125-126
致谢126