试议平滑肌MiR-18b通过AD2调节TGF-β1诱导人毛囊间充质干细胞分化为平滑肌细胞

论文导读：和ESCs27-283.4miRNAs和iPSCs28-293.5miRNA和成体干细胞29-303.6miRNA和平滑肌30-34第三篇实验探讨34-66第1章人毛囊间充质干细胞的鉴定34-421.1实验材料34-351.2实验办法35-371.3实验结果37-391.4讨论39-42第2章毛囊间充质干细胞分化为平滑肌细胞42-54

2.1实验材料42-432实验办法43-483实验结果48-52

摘要：干细胞能定向诱导分化为机体几乎所有组织中具有特定功能的终末细胞，进而修复或替代因外伤或疾病而丧失功能的组织或细胞是该领域探讨的重大突破，但其准确的调控机制远未解决。本实验拟从人毛囊源性间充质干细胞（hHF-MSCs）为起始细胞，在将其诱导分化为平滑肌细胞(Cs)的探讨中，聚焦于miRNA在这一分化历程中所起的意义，并试图在miRNA的靶基因上寻找突破。材料取自引产胎儿的头皮，分离出hHF-MSCs，在对其干性及多向分化潜能做出鉴定之后，从5ng/ul TGF-β1诱导hHF-MSCs分化为Cs，用免疫荧光、流式细胞术、Western blot、RT-PCR及qRT-PCR检测诱导后的Cs特异性标记物表达；通过免疫荧光、qRT-PCR检测TGF-β1诱导miR-18b意义之后的hHF-MSCs向C分化特异性标记物的表达；通过双荧光素酶报告基因检测体系证实miR-18b在这一历程中的靶点。结果显示：1.多潜能性hHF-MSCs在TGF-β1诱导下分化为Cs，mRNA和蛋白水平上表达α-A、calponin；2.在TGF-β1诱导hHF-MSCs向Cs分化历程中，miR-18b表达逐渐降低；3.分别转染agomir-18b或antagomir-18b的hHF-MSCs，再用TGF-β1意义7天之后，α-A和calponin表达降低或升高；4.检测并验证AD2基因是miR-18b的靶点；5.将hHF-MSCs敲减AD2，再转染antagomir-18b之后，用TGF-β1诱导，发现抑制miR-18b不再推动Cs分化，证明miR-18b通过AD2调节TGF-β1诱导hHF-MSCs向Cs分化。综上所述，本实验建立了以毛囊中分离、培养及扩增hHF-MSCs的标准化技术；通过TGF-β1诱导hH-FMSCs分化为Cs，并在此历程中探讨了miR-18b对分化的意义；首次证实了miR-18b通过意义于靶基因AD2推动hHF-MSCs向Cs分化。结果不仅为揭示干细胞定向诱导分化的分子机制提出了新的见解，对其在损伤修复与再生医学中的实际运用也具有重要指导价值。关键词：毛囊论文间充质干细胞论文平滑肌细胞论文miR-18b论文TGF-β1论文Smad2论文
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中文摘要5-8
Abstract8-14
第一篇 前言14-16
第二篇 文献综述16-34
第1章 干细胞16-20

1.1 胚胎干细胞及 iPS 细胞16-17

1.2 成体干细胞17-20

第2章 干细胞的平滑肌细胞分化20-26

2.1 微环境调节与干细胞的 Cs 分化20-22

2.2 组蛋白修饰和 Cs 分化22-26

第3章 miRNAs 与干细胞分化26-34

3.1 miRNA 的概况26

3.2 miRNAs 的生物合成和功能26-27

3.3 miRNAs 和 ESCs27-28

3.4 miRNAs 和 iPSCs28-29

3.5 miRNA 和成体干细胞29-30

3.6 miRNA 和平滑肌30-34

第三篇 实验探讨34-66
第1章 人毛囊间充质干细胞的鉴定34-42

1.1 实验材料34-35

1.2 实验办法35-37

1.3 实验结果37-39

1.4 讨论39-42

第2章 毛囊间充质干细胞分化为平滑肌细胞42-54

2.1 实验材料42-43

2.2 实验办法43-48

2.3 实验结果48-52

2.4 讨论52-54

第3章 miR-18b 通过 AD2 调节 TGF-β1 诱导的 HF-MSCs 向 Cs 分化54-66

3.1 实验材料54

3.2 实验办法54-57

3.3 实验结果57-63

3.4 讨论63-66

第四篇 结论66-68
课题创新性总结68-70
参考文献70-86
作者介绍及在学期间所取得的科研成果86-87
致谢87