浅议蛋白质胃癌浸润转移相关质膜蛋白鉴定及CDH4/R-Cadherin功能学

论文导读：、进展是一个涉及多种基因和多种蛋白质的相互作用以及多种信号通路的相互调节的复杂历程。鉴于细胞质膜蛋白在生命活动历程中的重要作用以及在药物治疗领域的关键地位，对胃癌细胞质膜蛋白的探讨将有助于进一步了解肿瘤浸润、转移的机制，为药物探讨提供新的思路。本探讨采取荧光素/生物素双标记——亲和素纯化富集技术对胃癌细
摘要：胃癌的发生、进展是一个涉及多种基因和多种蛋白质的相互作用以及多种信号通路的相互调节的复杂历程。鉴于细胞质膜蛋白在生命活动历程中的重要作用以及在药物治疗领域的关键地位，对胃癌细胞质膜蛋白的探讨将有助于进一步了解肿瘤浸润、转移的机制，为药物探讨提供新的思路。本探讨采取荧光素/生物素双标记——亲和素纯化富集技术对胃癌细胞质膜蛋白进行富集纯化，并联合鸟法蛋白质组学技术获得了直观、大量、完整的与胃癌浸润相关的质膜蛋白谱。通过gene ontology数据库及pubmed数据库对细胞质膜蛋白的生物学功能归类、浅析后发现，在所筛选出的36种质膜蛋白中，HSP90、R-cadherin、AIFM1、S100A9等4种质膜蛋白已被证实与胃癌的发生、进展相关。由CDH4基因编码的R-cadherin，是钙黏蛋白家族成员之一。本探讨验证了其在细胞水平和组织水平上均有表达，且在胃癌中呈低表达。为明确R-cadherin在胃癌中的作用，本探讨以正常胃粘膜上皮中克隆出CDH4基因，构建其真核表达载体并将其转染至胃癌细胞株BGC-823后，进而筛选出稳定转染CDH4的胃癌细胞株。转染后细胞的生长增殖实验、细胞划痕实验及Transwell小室功能实验结果显示，CDH4可抑制胃癌细胞的增殖能力，降低胃癌细胞的迁移运动能力和黏附能力。本探讨结果说明，CDH4/R-cadherin可抑制胃癌细胞的恶性生物学行为；CDH-4是胃癌的潜在肿瘤抑制基因，R-cadherin可能成为抗肿瘤药物的靶标。关键词：R-cadherin论文CDH4论文胃肿瘤论文质膜蛋白论文蛋白质组学论文
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中文摘要8-9
英文摘要9-10
引言10-12
材料和策略12-27

一、细胞株和菌株12

二、主要质粒12

三、主要仪器12-13

四、主要试剂13

五、常用溶液配制13-14

六、实验策略14-27

结果27-36

一、胃癌细胞株 BGC-823 细胞活体荧光标记结果27

二、胃癌细胞浸润转移相关质膜蛋白的鉴定结果27-29

三、CDH4 的基因扩增片段29

四、重组过表达质粒的连接酶切鉴定29-30

五、CDH4 在组论文导读：九、划痕实验检测转染前后BGC-823细胞的细胞迁移的差别34十、Transwell小室检测CDH4基因对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响34-36讨论36-41一、胃癌质膜蛋白的富集纯化技术36-37二、胃癌浸润转移相关的质膜蛋白37-39三、CDH4/R-cadherin与胃癌39-41结论41-42参考文献42-46致谢46-47附件47-50参考文献49-50上一
织及细胞水平中的实时定量 PCR 结果30-31
六、HSP90、AIFM1 及 S100A9 在细胞水平中的实时定量 PCR 结果31-32
七、Western blotting 检测 R-Cadherin 蛋白相关结果32-33
八、MTT 检测 CDH4 对胃癌细胞增殖的影响33-34
九、划痕实验检测转染前后 BGC-823 细胞的细胞迁移的差别34
十、Transwell 小室检测 CDH4 基因对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响34-36
讨论36-41

一、胃癌质膜蛋白的富集纯化技术36-37

二、胃癌浸润转移相关的质膜蛋白37-39

三、CDH4/R-cadherin 与胃癌39-41

结论41-42
参考文献42-46
致谢46-47
附件47-50
参考文献49-50