探索关节炎壮骨健膝方对退变关节软骨细胞“Wnt/β-catenin”通路影响

论文导读：
摘要：目的基于‘'Wnt/β-catenin"信号通路几个关键信号分子探究壮骨健膝方含药血清对退变软骨细胞的干预作用及机理,以分子生物学水平阐述壮骨健膝方保护关节软骨的部分微观机制与环节,为壮骨健膝方运用于临床提供实验依据。策略1.40只清洁级SD大鼠,随机分为正常血清组(给予0.9%生理盐水灌胃)与含药血清组(给予壮骨健膝方药液灌胃),连续灌胃5天,2次/日,于末次灌胃3h后腹主动脉采血,制各大鼠的正常血清及壮骨健膝方含药血清。2.取2周龄SD大鼠膝关节软骨建立离体培养的软骨细胞系统,运用形态学观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色进行鉴定；MTT检测1-5代软骨细胞增殖情况,绘制细胞增殖曲线。3.用10ng/ml IL-1β建立诱导退变软骨细胞模型,RT-PCR检测正常及诱导退变软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA的表达,Western Blot法检测正常及诱导退变软骨细胞中Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达。4.用正常血清和壮骨健膝方的含药血清分别干预IL-1β诱导退变的软骨细胞,RT-PCR检测两种血清作用于诱导退变软骨细胞不同时间段(24h、36h、48h、72h)后β-catenin、 GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA的表达,Western Blot法检测软骨细胞中Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达；ELISA法检测培养液中Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达。结果1.体外培养软骨细胞,经倒置显微镜下形态学观察、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色符合软骨细胞的生物学特性,传3代以内可以保持表型稳定。2.正常软骨细胞β-catenin mRNA的表达阳性强度低于IL-1β诱导退变的软骨细胞,而GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA的表达强度高于诱导退变的软骨细胞；正常软骨细胞Dkk-1、 sFRP-3蛋白的表达高于诱导退变的软骨细胞。3.不同血清作用于退变软骨细胞,含药血清组β-catenin mRNA的表达水平随时间而减弱,正常血清组随时间而增强；含药血清组GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA及Dkk-1、sFRP-3蛋白的表达水平随时间而增强,而正常血清组的表达随时间减弱；含药血清组软骨细胞培养液中Dkk-1、sFRP-3的蛋白表达水平随时间逐渐增强,正常血清组两种蛋白的表达均随时间而逐渐减弱。结论IL-1β诱导的软骨细胞退变历程伴随着"Wnt/β-catenin"信号通路的激活；壮骨健膝方含药血清对诱导退变的软骨细胞有保护作用,该作用可能与壮骨健膝方含药血清通过降低退变软骨细胞内β-catenin的水平,推动GSK-3β、Dkk-1、sFRP-3mRNA和蛋白的表达,使进入核内的β-catenin减少,以而抑制‘'Wnt/β-catenin"信号通路的激活有关。关键词：骨性关节炎论文壮骨健膝方论文Wnt论文β-catenin论文GSK-3β论文Dkk-1论文sFRP-3论文
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Abstract6-9
前言9-11
实验材料11-13
实验策略13-22
结果22-31
讨论31-35
结论35-36
参考文献36-38
中英文缩略词表38-39
文献综述39-44
参考文献42-44
致谢44-45
作者介绍45