浅论辛伐他汀内皮祖细胞在高眼压视神经损伤修复中作用初步怎样

论文导读：
摘要：一、急性原发性闭角型青光眼患者外周血内皮祖细胞数量变化目的：观察急性原发性闭角型青光眼(acute primary angle-closure glaucoma, APACG)患者外周血内皮祖细胞(endothepal progenitor cells, EPCs)数量的变化规律,探讨EPCs在APACG患者眼压升高导致视神经损伤中的作用。策略：采取队列探讨设计,试验为前瞻性探讨。选取天津医科大学总医院眼科确诊的APACG患者30例为APACG组,健康体检者20例为正常对照组。所有入选者取外周静脉血2ml,经反复离心过滤后,通过流式细胞仪鉴定EPCs,观察APACG患者外周血EPCs数量的变化,并对其相关影响因素(视神经损害程度、经药物治疗后眼压、空腹血糖、血脂、青光眼病程及有无心血管疾病)进行浅析。结果：两组患者间性别、年龄、血管危险因素、血液生化指标的差别均无统计学作用(P0.05),APACG组患者眼压显著高于正常对照组,差别有统计学作用(P0.001)。外周血EPCs为CD34、CD133双阳性反应,APACG组及正常对照组外周血EPCs数量分别为(48±22)个/ml和(65±20)个/ml,两组间差别有统计学作用(P=0.004)。l期与3期视神经损害者外周血EPCs数量分别为(60±19)个/ml和(34±7)个/ml,差别有统计学作用(Z=-3.015,P=0.002)。APACG组患者外周血EPCs数量与药物治疗后的平均眼压在一定范围内呈负相关(r=-0.835,P0.05),与空腹血糖水平、血脂水平、青光眼病程间均无显著相关性(r=0.343,P=0.227：r=-0.203,P=0.419；r=0.198,P=0.610)。APACG组有心血管疾病与无心血管疾病患者间外周血EPCs计数分别为(56±22)个/ml和(35±15)个／ml,差别有统计学作用(P=0.005)。结论：APACG患者外周血EPCs数量较正常人显著减少,提示青光眼发生进展的病理因素对外周血EPCs数量有一定影响。二、大鼠高眼压模型视网膜神经节细胞凋亡及外周血内皮祖细胞数量的变化目的：观察大鼠高眼压模型外周血EPCs数量及视网膜神经节细胞(Retinal gangpon cells, RGCs)凋亡的变化,探讨EPCs在高眼压视神经损伤修复中的作用。策略：采取多波长激光532nm绿光光凝角巩膜缘静脉和上巩膜静脉的策略建立大鼠高眼压模型,单眼造模。将100只大鼠随机分为正常对照组20只、激光对照组(眼压正常)30只和高眼压模型组50只。对正常对照组20只、激光对照组制备成功后3天、7天、3周时(每组10只大鼠)及高眼压模型组大鼠在造模其与EPCs数量变化的联系,探讨HIF-lα、VEGF-A、SDF-1对EPCs动员、招募的影响以及EPCs对血管内皮功能的影响。策略：将190只大鼠随机分为正常对照组20只、激光对照组(眼压正常)20只和高眼压模型组150只。正常对照组10只、激光对照组10只及高眼压模型组在造模成功后3天、7天、3周、2月、3月时(每个时间点20只大鼠),行股动脉放血10ml,离心后取血清,ELISA技术检测外周血VEGF-A、SDF-1、NO及ET-1水平。正常对照组10只、激光对照组10只及高眼压模型组在造模成功后3天、7天、3周、2月、3月时(每个时间点10只大鼠),脱颈处死大鼠,摘除眼球取视网膜组织,Western blot技术检测视网膜HIF-lα的蛋白水平。结果：(1)HIF-1α蛋白在正常视网膜中呈低浓度表达,眼压升高3天表达显著上升,7天时达到高峰,随后有所下降,但仍高于正常对照组。(2)正常对照组、大鼠高眼压模型3天、7天、3周、2月、3月组外周血VEGF-A为84.89±4.89ng/L,59.24+6.37ng/L,58.36±5.68ng/L,54.98±5.91ng/L,59.99±5.12ng/L,64.78±5.94ng/L。与正常对照组相比，眼压升高外周血VEGF-A均显著降低(P0.001)。(3)正常对照组、大鼠高眼压模型3天、7天、3周、2月、3月组外周血SDF-1为229.43±11.61pg/ml,218.34±11.3g/ml,298.51±3

2.02pg/ml,294.1论文导读：

6±11.90pg/ml,301.10±14.61pg/ml,307.49±20.46pg/ml。与正常对照组及眼压升高3天相比,眼压升高7天、3周、2月、3月外周血SDF-1均显著升高(P0.001)。(4)正常对照组、大鼠高眼压模型3天、7天、3周、2月、3月组外周血NO为36.74±5.19μmol/L,32.87±4.30μmol/L,45.67±4.48μmo1/L,41.29±5.00μmol/L,41.04±5.15μmo1/L,41.45±4.82μmol/L。与正常对照组相比,眼压升高3天外周血NO显著降低(P=0.038),眼压升高7天、3周、2月、3月外周血NO显著升高(P0.05)。(5)正常对照组、大鼠高眼压模型3天、7天、3周、2月、3月组外周血ET-1为72.73±6.41ng/L,57.96±4.42n/L,70.86±12.14n/L,77.37±9.95n/L,76.57±5.85n/L,77.41±7.43n/L。与正常对照组相比,眼压升高3天外周血ET-1显著降低(P0.001)。结论：眼压升高使视网膜组织缺血、缺氧,HIF-lα表达升高,推动骨髓EPCs的动员,外周血VEGF-A水平降低,SDF-1水平升高,进而推动EPCs向缺血、缺氧的视网膜组织转移,外周血EPCs、NO及ET-1呈时间依赖性变化。提示HIF-1α、VEGF-A、SDF-1可能通过参与EPCs的动员和迁移,在高眼压视神经损伤修复历程中发挥作用,并对血管内皮功能产生影响。四、辛伐他汀对大鼠高眼压模型RGCs凋亡、外周血EPCs数量及视网膜HIF-lα外周血及视网膜VEGF-A、SDF-1、NO、ET-1的影响目的：观察辛伐他汀对大鼠高眼压模型眼压、RGCs凋亡、外周血EPCs数量及视网膜HIF-lα、外周血及视网膜VEGF-A、SDF-1、NO、ET-1的影响,探讨辛伐他汀推动EPCs的动员在青光眼视神经损伤修复历程中的作用。策略：将100只大鼠随机分为正常对照组(CON,10只)、高眼压模型组(OH,30只)、高眼压辛伐他汀干预组(SV,30只)和高眼压生理盐水组(NS,30只)。高眼压辛伐他汀干预组为高眼压造模成功后,随机选取大鼠30只,以20mg/kg辛伐他汀溶于1ml生理盐水进行灌胃。高眼压生理盐水组为高眼压造模成功后,随机选取大30只,以1ml/只／天进行灌胃。SV组于开始药物干预后3天、7天、3周检测眼压1次,行内眦静脉取血1.5ml采取流式细胞仪测定外周血EPCs数量,3周时脱颈处死后取右眼(6眼)进行视网膜HE染色、凋亡细胞检测以及免疫组织化学法Bal-2、Bax检测。NS组于3天、7天、3周检测眼压1次,行内眦静脉取血1.5m1测定外周血EPCs数量。将160只大鼠随机分为正常对照组(CON,30只)、高眼压模型组(OH,50只)、高眼压辛伐他汀干预组(SV,50只)和高眼压生理盐水组(NS,30只)。CON组10只、OH组20只、SV组20只和NS组10只(共60只)于开始药物干预后3周行股动脉放血10ml,离心后取血清,采取ELISA技术检测外周血VEGF-A、SDF-1、NO及ET-1的水平。CON组10只、OH组10只、SV组10只和NS组10只(共40只)于开始药物干预后3周脱颈处死动物,摘除眼球,采取western blot技术检测视网膜HIF-1α蛋白水平。CON组10只、OH组20只、SV组20只和NS组10只(共60只)于开始药物干预后3周脱颈处死动物,摘除眼球,采取ELISA技术检测视网膜VEGF-A、SDF-1、NO及ET-1的水平。结果：(1)高眼压模型组于眼压升高3天、7天、3周的平均眼压分别为37.4±1.5mmHg,31.8±4.1mmHg,25.9±2.2mmHg;高眼压辛伐他汀干预组3天、7天、3周的平均眼压分别为38.0±3.7mmHg,33.9±2.9mmHg,24.9±3.2mmHg.辛伐他汀对大鼠眼压未体现出显著影响(P0.05)。(2)高眼压模型组于眼压升高后3天、7天、3周外周血EPCs数量分别为(121.3±22.4)、(81.3±23.7)、(46.1±15.8)个/ml；高眼压辛伐他汀干预组3天、7天、3周外周血EPCs数量分别为(138.5±41.4)、(论文导读：L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组视网膜NO无显著变化(P=0.159)。(7)正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组外周血ET-1分别为72.68±6.35n/L、77.84±7.98n/L、87.62±5.49n/L、78.13±7.66ng/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组外周血ET-1显著升高(P0.001)。正常对照组、大鼠高眼压模型
77.9±22.0)、(65.0±13.6)个/m1。服用辛伐他汀3天和3周外周血EPCs均较高眼压模型组显著升高(P0.05)。(3)辛伐他汀干预组大鼠与高眼压模型组相比,HE染色视网膜各层形态稍整齐；Bcl-2阳性细胞数未见显著差别,Bax阳性细胞比例降低,TUNEL阳性细胞比例显著降低。(4)正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组外周血VEGF-A分别为83.75±4.76ng/L、53.47±5.36ng/L、80.35±8.62ng/L、54.29±5.28ng/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组外周血VEGF-A显著升高(P0.001)。正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组视网膜VEGF-A分别为43.43±5.33ng/L、23.54±5.38n/L、32.83±5.64ng/L、22.60±5.98ng/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组视网膜VEGF-A显著升高(P0.001)。(5)正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组外周血SDF-1分别为230.62±11.27pg/ml、296.28±12.14pg/ml、265.74±39.71pg/ml、291.72±12.21pg/ml。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组外周血SDF-1显著降低(P=0.001)。正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组SDF-1分别为227.41±18.38pg/ml、187.72±19.19pg/ml212.14±23.71pg/ml、185.63±19.26pg/ml。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组视网膜SDF-1显著升高（P0.001)。(6)正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组外周血NO分别为36.26±4.95μmo1/L、41.16±4.97μmol/L、44.31±4.14μmol/L、40.94±4.31μmol/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组外周血NO显著升高(P=0.044)。正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组视网膜NO分别为38.54±3.53μmol/L、32.20±3.74μmo1/L、30.52±3.94μmol/L、31.16±3.36μmo1/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组视网膜NO无显著变化(P=0.159)。(7)正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组外周血ET-1分别为72.68±6.35n/L、77.84±7.98n/L、87.62±5.49n/L、78.13±7.66ng/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组外周血ET-1显著升高(P0.001)。正常对照组、大鼠高眼压模型组、高眼压辛伐他汀干预组、高眼压生理盐水组视网膜ET-1分别为53.13±2.07ng/L、28.39±3.33ng/L、39.09±4.81n/L、28.20±2.65ng/L。与高眼压模型组相比,辛伐他汀干预组视网膜ET-1显著升高(P0.001)。结论：辛伐他汀通过推动视网膜HIF-lα表达,提升外周血及视网膜VEGF-A水平,推动骨髓中EPCs动员入血,增加外周血EPCs数量；同时升高视网膜SDF-1水平,推动EPCs向缺血、缺氧的视网膜组织转移,推动血管内皮修复,减轻视网膜损害,减少视网膜细胞凋亡。提示辛伐他汀通过推动EPCs的动员对高眼压视神经损伤修复具有有益作用,并可能成为青光眼治疗新的途径。关键词：外周血论文内皮祖细胞论文青光眼论文高眼压论文辛伐他汀论文
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Abstract9-17
缩略语/符号说明17-19
前言19-21
探讨背景19-21
第一部分 急性原发性闭角型青光眼患者外周血内皮祖细胞数量的变化21-28
资料和策略21-25
结果25-26
讨论26-27
小结27-28
第二部分 大鼠高眼压模型视网膜神经节细胞凋亡及外周血内皮祖细胞数量的变化28论文导读：
-44
材料和策略28-33
结果33-38
讨论38-43
小结43-44
第三部分 大鼠高眼压模型视网膜HIF-1α、外周血VEGF-A、SDF-

1、NO、ET-1 的变化及其与EPCs的联系44-66

材料和策略44-49
结果49-52
讨论52-65
小结65-66
第四部分 辛伐他汀对大鼠高眼压模型RGCs凋亡、外周血EPCs数量及视网膜HIF-1α,外周血及视网膜VEGF-A、SDF-

1、NO、ET-1的影响66-80

材料和策略66-67
结果67-73
讨论73-79
小结79-80
参考文献80-94
发表论文和参加科研情况说明94-95
综述一：青光眼与血管内皮功能障碍95-110
参考文献102-110
综述二：青光眼与血管内皮祖细胞110-134
参考文献122-134
致谢134