浅析多态性TGF-β1基因多态性与左向右分流型先心病实验前言

论文导读：β1基本结构和功能25-264.3SNP概念和其探讨作用264.4TGF-β1与先心病心肌纤维化26-274.5TaqMan探针实时荧光定量PCR实验及在本探讨中的运用27-284.5.1探针及引物设计284.5.2标准曲线的制作284.5.3实验重复性284.6Harding-Weinberg平衡法则28-294.7本实验的局限性及展望29-30第五章结论30-31参考文献31-35综述35-49参
摘要：目的通过检测左向右分流型先天性心脏病患儿血细胞中TGF-β1基因多态性位点+869T/C表达水平,探讨TGF-β1与左向右分流型先天性心脏病心肌纤维化的相关性,以及基因位点+869T/C基因多态性在心肌纤维化历程中的作用。策略随机选择同期行手术治疗或心脏彩超证实有左向右分流型先天性心脏病(室间隔缺损、房间隔缺损、动脉导管未闭)患儿43例,其中男26例、女17例,年龄0.28～8岁,平均1.43±2.65岁。匹配正常健康儿童35例,其中男23例、女12例,年龄0.39～7岁,平均2.51±2.24岁。获得其父母知情同意后晨起空腹采静脉血,提取血细胞中的DNA,通过建立TGF-β1/β-actin实时荧光定量PCR检测策略对临床样本进行检测,比较两组间两个不同等位基因的基因拷贝数分布频率,浅析+869T/C基因拷贝数变异与心肌纤维化的联系。结果(1)利用紫外分光光度仪对提取的总DNA进行光度吸收测量,OD26o/OD280在1.7-1.9之间,表明DNA的纯度及浓度在理想范围内；总DNA电泳结果显示：240bp和137bp条带清晰,无拖尾；灰度比大于1,表明DNA完整性好。(2) TGF-β1+869T/C和β-actin的标准曲线线性联系良好,相联系数(R2)均大于0.99。TGF-β1+869T/C标准曲线方程为:Y=-0.2964X+7.8603,R2=0.999; β-actin的标准曲线方程为：Y=-0.2888X+0.9989,R2=0.9989。(3)实验组和对照组+869/β-actin比值分别为0.0881±0.0397(n=43)和0.0436士0.0061(n=35),t=2.632(n=78,p0.05),差别有统计学作用。(4)实验组和对照组三种基因型(TC, TT, CC)实际值和预测值经卡方检验测得p0.05,差别无统计学作用。结论(1)利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术证实人类基因组中TGF-β1基因在左向右分流型先天性心脏病患儿中高表达。(2)左向右分流型先心病组与正常对照组比较不同基因型TGF-β1+869基因位点有着T/C突变。(3)本实验运用的TaqMan探针实时荧光定量PCR法具有高度的特异性和可靠性,是理想的检测基因表达水平的策略。关键词：左向右分流型先天性心脏病论文心肌纤维化论文转化生长因子-β1论文基因多态性论文实时荧光定量PCR论文
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ABSTRACT5-8
英文缩写注解8-9
第一章 前言9-11
第二章 材料和策略11-18

2.1 实验材料11-13

2.

1.1 探讨对象11

2.

1.2 仪器设备11

2.

1.3 主要试剂11-13

2.

1.4 常用试剂配制13

2.2 实验策略13-17

2.1 标本采集13

2.2 模板DNA的抽提及纯化13-16

2.3 Taqman荧光定量PCR检测策略的建立16-17

2.3 统计学策略17-18

第三章 结果18-25

3.1 各组标本总DNA浅析18-19

3.

1.1 总DNA纯度评价18

3.

1.2 DNA质量评价18-19

3.

1.3 克隆DNA质量评价19

3.2 标准曲线的各项参数19-21

3.3 TaqMan探针实时荧光定量PCR重复性检测21-22

3.4 TaqMan探针实时荧光定量PCR结果的统计学浅析22

3.5 基因测序结果及统计学浅析22-25

3.5.1 基因测序结果22-23

3.5.2 Hardy-Weinberg平衡检验23-25

第四章 讨论25-30

4.1 先天性心脏病的流行病学调查和其发病机制的探讨进展25

4.2 TGF-β1基本结构和功能25-26

4.3 SNP概念和其探讨作用26

4.4 TGF-β1与先心病心肌纤维化26-27

4.5 TaqMan探针实时荧光定量PCR实验及在本探讨中的运用27-28

4.5.1 探针及引物设计28

4.5.2 标准曲线的制作28

4.5.3 实验重复性28

4.6 Harding-Weinberg平衡法则28-29

4.7 本实验的局限性及展望29-30

第五章 结论30-31
参考文献31-35
综述35-49
参考文献43-49
致谢49-50