阐释罗非鱼低聚木糖对奥尼罗非鱼生长、免疫功能和肠道菌群影响

论文导读：组的血清TP含量和P、CAT活力均高于对照组,其中400mg/kg组与对照组相比显著升高(P0.05)；第6周时,400mg/kg组的血清TP含量和SOD、P、CAT活力均显著高于对照组(P0.05)；第8周时,各添加组的血清SOD活力均显著高于对照组(P0.05)。注射嗜水气单胞菌96h后,添加组的存活率比对照组提升19

3.3%～255.8%。结果表明,在饲料中添加一定量

摘要：木论文探讨了在奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus×O.aureus)日粮中中添加低聚木糖(xyloopgosaccharides, XOS)对其生长性能、体成分、血液生化指标和抗嗜水气单胞菌感染能力以及对肠道形态结构、主要微生物数量的影响。同时采取变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),进一步探讨了低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道菌群种类组成的影响。1.低聚木糖对奥尼罗非鱼生长性能、体成分和血液生化指标及抗嗜水气单胞菌感染能力的影响。以基础饲料作为对照,按200、400、600、800和1000mg/kg分别添加低聚木糖配制试验饲料,对平均体重(5.09±0.12)g的奥尼罗非鱼进行为期8周的饲养试验。每2周取样测定血清总蛋白(TP)含量和碱性磷酸酶(P)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力,养殖结束时注射嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行感染试验,计算96h内的存活率。结果显示,第8周时,各低聚木糖添加组(除200mg/kg组外)奥尼罗非鱼的增重率(WGR)均高于对照组,但差别不显著(P0.05)；800mg/kg组蛋白质效率显著高于200mg/kg组(P0.05),而饲料系数则相反(P0.05)。全鱼粗蛋白、粗脂肪、灰分和水分含量在各组之间没有显著性差别(P0.05)。第4周时,添加组的血清TP含量和P、CAT活力均高于对照组,其中400mg/kg组与对照组相比显著升高(P0.05)；第6周时,400mg/kg组的血清TP含量和SOD、P、CAT活力均显著高于对照组(P0.05)；第8周时,各添加组的血清SOD活力均显著高于对照组(P0.05)。注射嗜水气单胞菌96h后,添加组的存活率比对照组提升193.3%～255.8%。结果表明,在饲料中添加一定量的低聚木糖对奥尼罗非鱼生长性能和体成分无显著影响,但显著升高血清TP含量和SOD、P、CAT活力,显著提升罗非鱼抗嗜水气单胞菌感染的能力。2.低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道形态和菌群结构的影响。在上面陈述的的养殖试验中,每2周取肠道进行双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacillus)和大肠杆菌(E. cop)选择性培养,测定其数量,第4周和8周时取肠道做组织切片,测定肠道肌层厚度和皱襞面积。结果显示,第4周和8周时,各添加组罗非鱼中肠肌层厚度和皱襞面积均显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,双歧杆菌数量在第4周时600mg/kg和800mg/kg组显著增加(P0.05),在第6周时400mg/kg组和600mg/kg组显著增加(P0.05)；乳酸杆菌数量在第8周时与对照组相比显著增加(P0.05)；大肠杆菌数量在各添加组随养殖时间延长呈下降走势,但各组之间在各时间段的差别没有达到显著水平(P0.05)。结果表明,饲料中添加低聚木糖能显著改善肠道形态,增加肌层厚度和皱襞面积,显著提升奥尼罗非鱼肠道双歧杆菌和乳酸杆菌数量。3.运用PCR结合变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术探讨低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道菌群种类组成的影响。在基础饲料中分别添加0、400、600和800mg/kg低聚木糖配制4和饲料,对平均体重(2.41±0.06)g的奥尼罗非鱼进行为期6周的饲养试验。分别在0周、第3周和第6周取样进行浅析。试验确立了肠道细菌DNA提取策略,建立了浅析罗非鱼肠道菌群变化的PCR-DGGE策略,并运用PCR-DGGE技术浅析了饲料中添加低聚木糖在不同时段对奥尼罗非鱼肠道微生物区系多样性的影响,结果表明,以奥尼罗非鱼肠道细菌中提取的DNA经PCR扩增后的16S rDNA序列片段的V3区序列,通过DGGE策略电泳后,其肠道中细菌种类较多。第3周时各试验组均保持假单胞菌(Pseudomonas)在肠道中定植,到第6周时,假单胞菌以低聚木糖添加组肠道中消失；除了第3周600mg/kg组和第6周400mg/kg组外,其余各组中均发现肠杆菌；第3周时400mg/kg组中发现硫代硫酸盐氧化细菌(Limnobacte)和克雷伯氏菌(Klebsiella);第3周600mg/kg组发现果胶杆菌(Pectobacterium);除第6周对照组外,其余各组均有假交替单胞菌(Pseudoalteromonas论文导读：
)。结果表明,假交替单胞菌能够在肠道中定植,肠道中菌群种类受到低聚木糖添加量的影响。关键词：奥尼罗非鱼论文低聚木糖论文生长性能论文免疫功能论文肠道菌群论文变性梯度凝胶电泳论文
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ABSTRACT9-12
缩略词表12-13
第一章 文献综述13-22

1.1 低聚木糖的概述及运用13-15

1.1 低聚木糖的来源13

1.2 低聚木糖的结构和特点13

1.3 低聚木糖在动物养殖中的运用13-15

1.2 鱼类肠道菌群的探讨15-19

1.2.1 肠道菌群的数量和组成15-16

1.2.2 鱼类肠道菌群的生理功能16-17

1.2.3 鱼类肠道菌群结构和组成的影响因素17-19

1.3 变性梯度凝胶电泳技术19-20

1.4 探讨目的及作用20-22

第二章 低聚木糖对奥尼罗非鱼生长、体成分、血液生化指标和抗嗜水气单胞菌感染的影响22-34

2.1 材料与策略22-25

2.

1.1 低聚木糖22

2.

1.2 试验饲料22-23

2.

1.3 试验用鱼及饲养管理23-24

2.

1.4 样品采集与测定24-25

2.

1.5 数据统计与浅析25

2.2 结果与浅析25-30

2.1 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼生长性能的影响25-26

2.2 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼体常规成分的影响26-27

2.3 词料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼血清SOD活力的影响27

2.4 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼血清P活力的影响27-28

2.5 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼血清CAT活力的影响28

2.6 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼血清TP含量的影响28-29

2.7 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼抗嗜水气单胞菌能力的影响29-30

2.3 讨论30-33

2.3.1 词料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼生长性能的影响30-31

2.3.2 词料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼体常规成分的影响31

2.3.3 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼血清生化指标的影响31-33

2.3.4 低聚木糖对奥尼罗非鱼抗嗜水气单胞菌感染能力的影响33

2.4 结论33-34

第三章 低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道形态和菌群结构的影响34-40

3.1 材料与策略34-35

3.

1.1 低聚木糖34

3.

1.2 试验饲料34

3.

1.3 试验鱼与饲养管理34

3.

1.4 样品采集与测定34-35

3.

1.5 统计浅析35

3.2 结果与浅析35-37
3.

2.1 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道形态结构的影响35-36

3.

2.2 饲料中添加低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道菌群的影响36-37

3.3 讨论37-38

3.1 低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道组织结构的影响37-38

3.2 低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道菌群的影响38

3.4 结论38-40

第四章 运用PCR-DGGE浅析低聚木糖对奥尼罗非鱼肠道菌群的影响40-54

4.1 材料与策略40-46

4.

1.1 低聚木糖40

4.

1.2 试验饲料40

4.

1.3 试验鱼及饲养管理40-41

4.

1.4 样品采集41

4.

1.5 试剂配制41-42

4.

1.6 DNA的提取42-43

4.

1.7 针对16S rDNA PCR扩增43-44

4.

1.8 16s rDNA V3区的扩增44

4.

1.9 DGGE条带的切割,重扩增及PCR产物的纯化44-45

4.

1.10 DGGE条带的克隆45-46

4.

1.11 16S rDNA序列浅析46

4.2 结果与浅析46-52
4.

2.1 肠道细菌DNA提取和16S rDNA V3区序列PCR46-49

4.

2.2 DGGE凝胶中各条带测序结果49-52

4.3 讨论52-53

4.4 结论53-54

参考文献54-66
附录66-67
致谢67-68