谈述沙门氏菌基于invA基因电化学DNA传感器构建及用于沙门氏菌快速高灵敏检测工作

论文导读：部分19-213.1材料和仪器19-203.2试验策略20-214实验结果21-264.1电化学表面表征21-244.2实验条件的优化24-254.3线性范围考察254.4特异性考察25-265小结26-27参考文献27-31第二章电化学传感器检测沙门氏菌31-391引言312实验部分31-342.1材料和仪器31-322.2试验策略32-343实验结果34-363.1凝胶成像34-353.2沙
摘要：沙门氏菌，是世界范围内最常见的食源性致病菌之一，主要通过污染的动物性食品（主要有肉类、家禽、蛋类和牛奶）传播。致病性沙门菌主要引起人类和动物的食物中毒、胃肠炎、伤寒和败血症等疾病，沙门氏菌不仅是公共卫生健康的重大不足，还给部分国家带来严重的经济负担。由此，为有效地预防和制约疾病发生，建立一种快速、简便、灵敏的检测沙门氏菌的策略是非常必要的。电化学DNA传感器以其灵敏度高，简单快速，选择性好，成本低廉的显著优点而成为一种运用广泛的检测手段。传统检测沙门氏菌的策略主要包括细菌培养，酶联免疫浅析(ELISA)和特异性聚合酶链式扩增反应（PCR），但是均存一定的缺点，为克服沙门氏菌传统检测策略的局限性，本探讨通过整合快速提取基因组DNA， PCR和构建基于侵袭蛋白A（invA）基因的电化学DNA传感器，进展了一种简单的检测沙门氏菌的对策，该对策能够实现简单、快速、灵敏的检测沙门氏菌，为临床诊断、食品安全和环境监测等领域中致病性微生物的检测提供了有力的工具。本探讨主要包括以下三个部分：基于invA基因的DNA电化学传感器的构建通过GeneBank数据库，根据致病性沙门菌特异性invA基因设计靶序列和DNA探针，引物和探针特异性均用局部序列比对基本检索工具（BLAST）比对证实其特异性。通过减少非特异性吸附引起的背景信号，结合链霉亲和素-生物素耦合系统和酶催化底物的作用放大电化学信号来提升传感器的灵敏度。对电极表面的组装和杂交历程进行电化学阻抗（EIS）、方波伏安法（SWV)和表面等离子共振（SPR）表征，该传感器对靶序列响应的线性范围为1pM~(-1)0nM，相联系数为0.9984，检出限（LOD）达0.5pM。传感器的高灵敏度主要是由于电极表面较低的非特异性吸附，生物素链霉亲和素的结合能力及碱性磷酸酶强大的催化能力。通过检测三种不同序列的核苷酸的电化学信号考察传感器的特异性；同时考察两个不同浓度5nM和100pM的靶序列的重现性，变异系数均小于5%。本部分成功构建了针对invA基因的灵敏度高、选择性和重现性好的电化学DNA传感器。电化学传感器检测沙门氏菌培养鼠伤寒沙门氏菌，用水煮破细胞法快速提取细菌基因组DNA，用特异性引物扩增invA基因，作2%琼脂糖凝胶电泳，紫外凝胶电泳成像仪验证PCR产物，结果表明，成功扩增沙门氏菌invA基因靶序列，片段大小为284bp。提取不同浓度细菌的DNA模板，PCR扩增后，将PCR产物加热后冰浴变性获得单链DNA，在最优的实验条件下，电化学DNA传感器对沙门菌的响应范围为10~(-1)0~5CFU mL~(-1)，灵敏度远远高于其它检测沙门氏菌的传感器包括SPR传感器，荧光传感器，磁电传感器，电容免疫传感器，石英晶体微量天平，光纤传感器及压电免疫传感器。整个检测历程仅需要3.5h，本对策具有灵敏度高，操作方便快速，成本低的优点，为医学疾病诊断，环境和食品卫生中微生物的筛选和检测提供了便利的平台。关键词：电化学生物传感器论文DNA检测论文PCR论文沙门氏菌论文invA基因论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。英汉缩略语名词对照6-8
摘要8-11
ABSTRACT11-15
前言15-17
第一章 DNA电化学传感器的构建及策略学验证17-31
1 引言17-19
2 靶序列和寡核苷酸设计19
3 实验部分19-21

3.1 材料和仪器19-20

3.2 试验策略20-21

4 实验结果21-26

4.1 电化学表面表征21-24

4.2 实验条件的优化24-25

4.3 线性范围考察25

4.4 特异性考察25-26

5 小结26-27
参考文献27-31
第二章 电化学传感器检测沙门氏菌31-39
1 引言31
2 实验部分31-34

2.1 材料和仪器31-32

2.2 试验策略32-34

3 实验结果34-36

3.1 凝胶成像34-35

3.2 沙门氏菌超灵敏快速的检测35-36

4 小结36-37
参考文献37-39
文献综述：生物传感器在食源性微生物检测中的运用进展39-51
参考文献47-51
致谢51-52
攻读硕士期间发表的文章52-54