探索蛋白神经调节蛋白1β在炎症气道黏液高分泌中作用生

论文导读：迹法检测磷酸化ErbB1、2、3、4水平141.2.5统计学策略142实验结果14-182.1IL-1β对HBE16细胞NRG-1β和MUC5ACmRNA的影响14-162.2IL-1β对HBE16细胞NRG-1β和MUC5AC蛋白表达的影响162.3不同浓度NRG-1β对HBE16细胞MUC5AC蛋白水平的影响16-172.4利用ErbB1-4抗体预处理后NRG-1β介导的MUC5AC蛋白表达
摘要：目的探讨神经调节蛋白（NRG)1β在炎症气道黏液高分泌中的作用。策略用IL-1β刺激人气道上皮细胞株HBE16细胞构建黏液高分泌模型，逆转录PCR法检测NRG1β mRNA和黏蛋白（MUC）5ACmRNA，ELISA法检测NRG1β和MUC5AC蛋白水平。用NRG1β刺激后，ELISA法检测MUC5AC表达，Western印迹法检测磷酸化人表皮生长因子受体（ErbB）1、2、3、4。预先分别给予ErbB1、2、3、4抗体及p38触分裂原活化蛋白（MAPK）特异性抑制剂、细胞外信号调节蛋白（ERK）1/2特异性抑制剂、丝裂原压力活性蛋白激酶（MSK）1特异性抑制剂、环磷酸腺苷（c-AMP）反应原件结合蛋白（CREB）单克隆抗体，再经NRG1β刺激后，ELISA法检测MUC5AC蛋白表达。结果IL-1β显著增加NRG1β、MUC5AC mRNA水平及其蛋白表达，且在蛋白水平呈现浓度正相关性。单独给予NRG1β（1、10、100、200nmol/L）刺激HBE16细胞， MUC5AC蛋白表达（0.328±0.055、0.364±0.086、0.650±0.134、0.586±0.068）较对照组（0.227±0.019）显著增加，差别均有统计学作用（均P0.05），同时磷酸化ErbB2、3呈阳性表达，而磷酸化ErbB1、4呈近似阴性表达。预先给予ErbB2、3抗体、p38MAPK特异性抑制剂、ERK1/2特异性抑制剂和MSK1抑制剂、CREB抗体再给予NRG1β刺激者MUC5AC蛋白表达（0.221±0.033、0.238±0.044、0.386±0.021、0.352±0.022、0.294±0.017、0.252±0.019）较单独给予NRG1β（0.650±0.134）显著降低，差别均有统计学作用（均P0.05）。结论IL-1β导致气道黏液高分泌可能通过NRG1β/ErbB2、3异二聚体信号通路，并激活后续的MAPK/MSK1/CREB信号路径实现。关键词：神经调节蛋白1论文白细胞介素1β论文黏蛋白类论文受体论文表皮生长因子论文
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英文摘要9-11
前言11-12
1 材料与策略12-14

1.1 主要材料与试剂12

1.2 实验策略12-14

1.2.1 细胞培养、分组以及各组处理12-13

1.2.2 逆转录-PCR 检测 NRG-1β和 MUC5AC mRNA13

1.2.3 ELISA 法检测细胞上清液内 NRG-1β和 MUC5AC 蛋白水平13-14
1.2.4 Western 印迹法检测磷酸化 ErbB

1、

2、3、4 水平14

1.2.5 统计学策略14 2 实验结果14-18
2.1 IL-1β对 HBE16 细胞 NRG-1β和 MUC5ACmRNA 的影响14-16
2.2 IL-1β对 HBE16 细胞 NRG-1β和 MUC5AC 蛋白表达的影响16
2.3 不同浓度 NRG-1β对 HBE16 细胞 MUC5AC 蛋白水平的影响16-17
2.4 利用 ErbB1-4 抗体预处理后 NRG-1β介导的 MUC5AC 蛋白表达变化17

2.5 利用各阻断剂后 NRG-1β诱导的 MUC5AC 蛋白表达变化17

2.6 Western 印迹法检测磷酸化 ErbB

1、

2、3、4 水平结果17-18

3 讨论18-20 全文结论20-21
参考文献21-24
文献综述：HSP70 及其在气道慢性炎症中的作用24-33
参考文献30-33
致谢33-34
攻读学位期间发表的学术论文目录34-35