简析基因治疗IL-8对前列腺癌进展作用机制实验

论文导读：IL-8为靶点治疗前列腺癌的可行性探讨国内外均未见报道。目的：探讨IL-8在前列腺癌发生进展中的作用,进一步探讨沉默IL-8基因对前列腺癌进展的影响,为以IL-8基因为靶点治疗前列腺癌提供实验依据。内容：①前列腺癌组织中IL-8和AR的表达及其与前列腺癌病理分级分期的相关性,激素依赖性与非依赖性前列腺癌细胞中IL-8的表达及其作用
摘要：前列腺癌(prostate cancer,PCa)是欧美男性中最常见的恶性肿瘤,在我国前列腺癌的发病率也逐年上升。雄激素阻断疗法是当前治疗前列腺癌的一种常规疗法,但会因为非雄激素依赖型前列腺癌(androgen independent prostate caner,AIPC)的出现而失败。由雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer,ADPC)进展成为雄激素非依赖性前列腺癌的历程需要有多种分子及其信号途径的参与。雄激素非依赖现象的出现是抗雄激素治疗前列腺癌历程中的一个重大难题。白介素-8(interleukin-8, IL-8)是1987年由Yoshimura等发现的,由人单核细胞产生的一种具有趋化作用的细胞因子,它在正常的前列腺组织和雄激素依赖性前列腺癌组织中呈低表达,但在非雄激素依赖性前列腺癌中呈高表达,而且随着前列腺癌的恶性度增加而增高。迄今为止,以IL-8为靶点治疗前列腺癌的可行性探讨国内外均未见报道。目的：探讨IL-8在前列腺癌发生进展中的作用,进一步探讨沉默IL-8基因对前列腺癌进展的影响,为以IL-8基因为靶点治疗前列腺癌提供实验依据。内容：①前列腺癌组织中IL-8和AR的表达及其与前列腺癌病理分级分期的相关性,激素依赖性与非依赖性前列腺癌细胞中IL-8的表达及其作用；②IL-8推动人激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞株生长的体外实验探讨；③RNAi沉默IL-8基因对人前列腺癌细胞生长抑制的体外实验探讨策略：运用免疫组织化学策略检测ADPC和良性前列腺增生(Benign Prostatic Hypertrophy,BPH)组织标本中IL-8的表达情况,运用免疫组化自动浅析系统进行浅析,结果以积分光密度(integrated optical density, IOD)表示；运用RT-PCR和Western blot的策略半定量浅析IL-8在LNCaP及DU145细胞中的表达情况,探讨IL-8在ADPC和AIPC细胞中表达的差别。运用不同浓度和作用时间的人重组白介素-8(rhIL-8)刺激人前列腺癌细胞系LNCaP, DU145,运用MTT实验检测细胞增殖情况,运用流式细胞仪检测细胞周期变化情况,运用Western blot、运用浓度为100ng/ml的rhIL-8与LNCaP细胞共浴24h、48h和72小时,RT-PCR检测AR在蛋白和mRNA水平的变化；构建三种重组质粒pGC-siIL-8,经过酶切、PCR及测序验证后将三种质粒转染入人前列腺癌细胞系DU145与PC-3中。通过RT-PCR策略筛选出最为有效的干扰片段。采取Western blot、RT-PCR检测干扰前后蛋白和mRNA水平IL-8变化,运用MTT实验检测细胞生长抑制情况,运用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期变化情况。结果：免疫组织化学结果显示IL-8的表达与前列腺癌的分级和分期密切相关(P0.01)。.RT-PCR和Western blot显示,IL-8在DU145有表达,而在LNCaP细胞中均无表达(P0.01)。MTT实验显示rhIL-8能够推动LNCaP和DU145细胞的增殖(P0.01)。流式细胞仪检测细胞周期结果也显示浓度为100ng/ml的rhIL-8组与对照组相比LNCaP和DU145的S期细胞分别增加了(25.44±4.55)%、(9.63±2.35)%(P0.01),G1期细胞分别减少了(32.77±3.78)%、(44.75±2.26)%(P0.01)。RT-PCR及Western blot结果显示浓度为100ng/ml的rhIL-8刺激LNCaP细胞,24h组、48h组及72h组与PBS空白对照组相比AR的蛋白和mRNA水平均有所增加且差别有统计学作用(P0.01)。pGC-siIL-8-2干扰载体可以在蛋白质和mRNA水平抑制IL-8的表达,pGC-siIL-8-2质粒能显著性的抑制DU145和PC-3细胞增殖,抑制率为分别为(43.12±5.94)%和(46.15±5.06)%。同时,pGC-siIL-8-2重组质粒能够推动DU145和PC-3细胞的凋亡,使进入S期的肿瘤细胞数量显著降低,细胞周期受到阻滞。结论：IL-8的表达与前列腺癌的病理分期分级密切相关,rhIL-8能够推动激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞系的增殖,IL-8可能在前列腺癌的进展中具有重要作用。同时,IL-8可以调节前列腺癌LNCaP细胞中AR的水平。pGC-siIL-8-2干扰质粒能抑制激素非依赖性前列腺癌细胞系DU145和PC-3的增殖,并导致其凋亡。上面陈述的实验表明IL-8基因也许可以作为前列腺癌基因治疗的高效靶点,这也为将来以IL-8为靶点的前列腺癌基因治疗体内实验探讨奠定了基础。关键词：IL-8论文RNAi论文前列腺癌论文基因治疗论文雄激素受体论文
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Abstract6-9
符号说明9-11
前言11-14
探讨近况、成果11-13
探讨目的、策略13-14
一、雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌组织和细胞中IL-8的表达及其与前列腺癌的联系14-39

1.1 对象和策略14-28

1.2 结果28-34

1.3 讨论34-38

1.4 小结38-39

二、IL-8对人雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞株生长的影响39-60

2.1 对象和策略39-48

2.2 结果48-57

2.3 讨论57-59

2.4 小结59-60

三、RNAi沉默IL-8基因对人前列腺癌细胞生长抑制的体外实验探讨60-98

3.1 对象和策略60-75

3.2 结果75-91

3.3 讨论91-97

3.4 小结97-98

结论98-100
参考文献100-109
发表论文和参加科研情况说明109-110
附录110-112
综述112-119
综述参考文献116-119
致谢119