谈信号红景天苷对骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化影响

最后更新时间：2024-03-14 作者：用户投稿原创标记

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论文导读：
摘要：大量探讨表明，传统的中药单体能够诱导骨髓间充质干细胞（bone marrow-derivedmesenchymal stem cells, BMSCs)向神经细胞分化。本探讨利用传统的中药单体红景天苷(sapdrosides, SD)分别诱导BMSCs和小鼠D1细胞系(CRL-10915)，探讨并探讨了红景天苷对MSCs分化为神经元样细胞的影响及信号转导的分子机制。选取来自第2代Wistar大鼠BMSCs,实验分为3组：红景天苷诱导组、全反式维甲酸(retinoic acid-induced，RA)诱导组和空白对照组(未诱导的BMSCs)。每组进行同步实验，采取荧光免疫细胞化学染色策略检测诱导12h,24h,48h,72h,6d和12d后3组神经元微管蛋白III (β-Tubupn-III，β-tub)蛋白、神经细胞神经特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)蛋白、微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2，MAP2)、神经胶质纤维酸性蛋白(gpal fibrillary acidic protein, GFAP)蛋白和神经干细胞巢蛋白（nestin，NES）的表达情况。运用RealTime-PCR技术检测分别诱导30min,1h,3h,6h,9h,12h和24h后3组相关基因nestin、β-Tubupn III、NSE、核受体因子-1基因(nuclear receptor related factor1,Nurr1)、MAP2及GFAP表达情况， Western blot策略检测β-Tubupn III和NSE蛋白分别诱导12h,24h,48h,72h和96h的3组表达。实验选择体外培养的D1细胞系，采取红景天苷和维甲酸分别诱导D1细胞12h、24h、48h和72h，荧光免疫细胞染色策略分别检测神经细胞相关蛋白β-Tubpn Ⅲ、NSE、MAP2、NES和GFAP的表达；Real Time-PCR检测神经细胞相关标记基因NSE、MAP2、Nurr1、NES; Westem blot检测NSE和β-tubupn Ⅲ蛋白的表达；加入Notch信号特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂(DAPT，)预先作用30min，再加入红景天苷和维甲酸分别诱导D1细胞24h，利用荧光免疫细胞染色策略、Real T论文导读：殖分化论文信号通路论文Notch信号论文本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要2-4Abstract4-8缩略上一页123下一页
ime-PCR和Westem blot分别检测Notch信号通路下游基因蛋白在BMSCs定向分化为神经元样细胞历程中的作用方式和分子机制.结果表明，诱导后细胞于不同时间点NES、β-tubupn Ⅲ和MAP2阳性表达率均高于对照组(P 0.01)；维甲酸组GFAP阳性表达率显著高于红景天苷组(P0.01)。RealTime-PCR结果显示，维甲酸和红景天苷诱导不同时间，两组细胞均有NSE、β-tubupn ⅢmRNA表达，与诱导时间息息相关且不完全相同，两组间GFAP mRNA的高丰度出现于诱导早期；诱导后两组NSE的表达随时间延长显著增加，β-tubupn Ⅲ表达出现于诱导早期。该结果表明红景天苷能推动骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化，其诱导效应与维甲酸相似，且向神经元样细胞定向分化方面优于维甲酸。在探讨Notch信号通路的作用方式和分子机制中，荧光免疫细胞染色结果显示，红景天苷组中NSE、MAP2、β-Tubupn Ⅲ阳性表达率显著高于维甲酸组，红景天苷组NES和GFAP阳性率显著低于维甲酸组；红景天苷组NSE、Nurr1、NES基因表达水平显著高于维甲酸组且与对照组相比具均有统计学作用(P0.01)。维甲酸组NSE蛋白表达显著高于红景天苷组，且组间相比具有统计学作用(P0.01)，红景天苷组β-Tubupn Ⅲ蛋白表达高于维甲酸组，且与其他组相比具有统计学作用(P0.01)。阻断后诱导，荧光免疫细胞染色检测表明Notch信号通路中Notch-1阳性率均低于对照组68.41%; jadge-1阳性率亦低于对照组87.14%，与其他组相比较差别均有显著性差别(P 0.05)；Notch信号通路中神经细胞相关标记基因和相关蛋白的表达均显著高于维甲酸组；诱导前对照组未检测到神经相关标记基因和相关蛋白的表达。上面陈述的结果表明，红景天苷具有诱导BMSCs定向分化为神经元样细胞的功效，且Notch信号通路与其增殖与分化调控密切相关.关键词：神经样细胞论文红景天苷论文维甲酸论文增殖分化论文信号通路论文Notch信号论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要2-4
Abstract4-8
缩略论文导读：神经元样细胞定向分化相关蛋白的影响48-504讨论50-52第四章NOTCH信号通路介导红景天苷诱导BMSCS向神经元样细胞定向分化52-601前言522材料与策略52-552.1材料52-532.2策略53-553结果55-583.1荧光免疫染色Notch信号通路相关蛋白的影响55-563.2Notch信号通路下游相关基因的影响56-573.3Notch信号通路相关蛋白的影响5
词8-10
第一章文献回顾诱导骨髓间充质干细胞于神经系统疾病修复与重建的探讨进展10-15

1. BMSCS探讨背景12

2. BMSCS探讨进程12

3. BMSCS诱导趋向12-13

4 传统中药单诱导案例13
5 诱导相关信号转导机制13-14

5.1 Notch信号通路13-14

5.2 BMP信号通路14

6 结论14-15
第二章红景天苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的基础探讨15-42
1 引言15
2 材料与策略15-26

2.1 材料15-20

2.2 实验策略20-26

3 实验结果26-39

3.1 BMSC光学形态观察26-27

3.2 BMSCs免疫荧光形态观察27

3.3 骨髓间充质干细胞的鉴定结果27-28

3.4 Brdu检测BMSCs的增殖28-29

3.5 荧光免疫细胞化学染色结果29-36

3.6 红景天苷对BMSCs表达神经相关基因的影响36-38

3.7 红景天苷对BMSCs 表达神经相关蛋白的影响38-39

4 讨论39-42
第三章红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞42-52
1 前言42
2 材料和策略42-44

2.1 实验所需要材料42

2.2 策略42-44

3 结果44-50

3.1 红景天苷对D1 细胞向神经元样细胞定向分化的影响44-47

3.2 红景天苷对D1 细胞向神经元样细胞定向分化相关基因的表达47-48

3.3 红景天苷对D1 细胞向神经元样细胞定向分化相关蛋白的影响48-50

4 讨论50-52
第四章 NOTCH信号通路介导红景天苷诱导BMSCS向神经元样细胞定向分化52-60
1 前言52
2 材料与策略52-55