简论抗病皱纹盘鲍肠道益生菌筛选与运用

论文导读：在益生菌，对潜在益生菌进行鉴定和安全性评价，进一步将潜在益生菌(1010cfug-1)进行为期120d的幼鲍饲喂试验，随后对得到的益生菌进行的生产运用试验。结果表明，筛选到的潜在益生菌ShewanellacolwelpanaWA64、ShewanellaolleyanaWA65能够提升幼鲍的存活率和生长性能，复合作用能够显著提升幼鲍增重率和存活率(P0.05)，并在生
摘要：益生菌作为抗生素的替代手段已被广泛接受，肠道菌群由于其对机体健康生长和抗病的重要作用，是筛选益生菌的重要来源。本探讨在皱纹盘鲍肠道菌群进行浅析的基础之上，对健康皱纹盘鲍肠道菌群采取体外产酶、拮抗与体内生长试验的策略以中筛选到两株益生菌，并进行生产运用试验和安全性评价。同时探讨其在饲料中添加投喂对皱纹盘鲍免疫机能和抗病力的影响，以期为皱纹盘鲍苗种生产专用微生态制剂创制奠定论述基础。该项目的探讨，对提升皱纹盘鲍苗种产量并实现绿色生态养殖具有重要的作用。本探讨取得了以下几个成果：1.比较浅析养殖和野生皱纹盘鲍(Hapotis discus hannai Ino)不同个体间肠道菌群数量和种类组成，并采取PCR-DGGE指纹技术比较浅析了二者肠道优势菌群的差别。结果表明：养殖和野生皱纹盘鲍肠道好氧及兼性厌氧菌总数分别为3.50±0.85×106cfu/g，3.03±1.10×106cfu/g；两组鲍鱼肠道优势菌基本相同，均为弧菌属(Vibrio)，次优势菌均为玫瑰杆菌属(Roseobacter)和希瓦氏菌属(Shewanella)。在养殖组中检测到芽胞杆菌属(Bacillus)，表明环境因素对皱纹盘鲍肠道细菌组成有一定的影响。同常规培养得到的结果吻合，二者的PCR-DGGE指纹图谱相似度很高，表明皱纹盘鲍对肠道细菌具有特异选择性。2.采取拮抗实验和产酶实试验以124株不具有溶血活性的鲍鱼肠道细菌中筛选到5株潜在益生菌，对潜在益生菌进行鉴定和安全性评价，进一步将潜在益生菌(1010cfu g-1)进行为期120d的幼鲍饲喂试验，随后对得到的益生菌进行的生产运用试验。结果表明，筛选到的潜在益生菌Shewanella colwelpana WA64、Shewanella olleyana WA65能够提升幼鲍的存活率和生长性能，复合作用能够显著提升幼鲍增重率和存活率(P0.05)，并在生产条件下显著降低幼鲍死亡量。抗生素敏感性检测表明益生菌不含耐药因子。3.将益生菌WA64和WA65添加到饲料中(109cfu g-1)饲养鲍鱼28d，通过测定不同时间处理后试鲍的免疫机能和抗病力。结果表明，益生菌处理组的细胞及体液免疫机能均有不同程度的增强，与对照组相比，WA64和WA65在不同的饲喂时间内显著增加了血细胞数目、增强了吞噬活力、提升了呼吸爆发活力(P0.05)；提升了溶菌酶活力并增加了总蛋白含量(P0.05)；WA64、WA65均能显著降低鲍鱼的死亡率(P0.05)。关键词：皱纹盘鲍论文肠道菌群论文益生菌论文免疫机能论文抗病力论文
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ABSTRACT7-11
第一章 文献综述11-21

1.1 前言11

1.2 益生菌11-13

1.2.1 益生菌的概念11-12

1.2.2 益生菌在人和陆生动物上的运用12

1.2.3 益生菌在水产养殖上的运用12-13

1.3 探讨近况13-16

1.3.1 水产益生菌的种类13-14

1.3.2 水产益生菌的作用机理14-16

1.4 水产益生菌的筛选策略16-18

1.5 水产益生菌运用的前景及挑战18-19

1.6 鲍鱼益生菌探讨进展19

1.7 本课题探讨目的与作用19-21

第二章 皱纹盘鲍肠道菌群组成及 PCR-DGGE 指纹图谱浅析21-30
摘要21

2.1 前言21

2.2 材料与策略21-24

2.1 样品采集21-22

2.2 肠道细菌分离22

2.3 细菌鉴定22

2.4 PCR-DGGGE 指纹图谱建立22-24

2.3 结果与浅析24-27

2.3.1 皱纹盘鲍肠道细菌数量和组成24

2.3.2 皱纹盘鲍肠道菌群比例24-26

2.3.3 PCR-DGGE 指纹图谱浅析26-27

2.4 讨论27-28

2.4.1 不同海域皱纹盘鲍肠道微生物组成差别27-28

2.4.2 养殖同野生鲍鱼肠道微生物组成差别28

2.5 小结28-30

第三章 皱纹盘鲍肠道潜在益生菌的筛选与安全性评价30-43
摘要30

3.1 前言30-31

3.2 材料和策略31-33

3.

2.1 潜在病原菌的剔除31

3.

2.2 潜在益生菌的体外筛选31-32

3.

2.3 潜在益生菌的鉴定32

3.

2.4 潜在益生菌的致病性检验32

3.

2.5 潜在益生菌的体内筛选32-33

3.

2.6 潜在益生菌生产运用试验33

3.

2.7 抗生素敏感性测定33

3.

2.8 数据统计33

3.3 结果与浅析33-41

3.1 潜在病原菌的剔除33

3.2 拮抗菌的筛选33-34

3.3 产酶能力定性测定34-36

3.4 潜在益生菌的鉴定36-39

3.5 潜在益生菌的致病性评价39

3.6 体内筛选结果39

3.7 潜在益生菌的生产运用效果39-40

3.8 抗生素敏感性试验结果40-41

3.4 讨论41-42

3.4.1 水产益生菌的来源41

3.4.2 水产益生菌的筛选策略41

3.4.3 希瓦氏菌的功能41-42

3.4.4 益生菌的安全性42

3.5 小结42-43

第四章 菌株 WA6

4、WA65 对皱纹盘鲍非特异性免疫机能及抗病力的影响43-52

摘要43

4.1 前言43-44

4.2 材料和策略44-46

4.

2.1 实验用菌珠44

4.

2.2 实验饲料的制作44

4.

2.3 试验动物分组与管理44-45

4.

2.4 样品采集与处理45-46

4.

2.5 统计浅析46

4.3 结果与浅析46-49
4.

3.1 饲料中益生菌含量46-47

4.

3.2 细胞免疫反应47

4.

3.3 体液免疫反应47-48

4.

3.4 攻毒试验48-49

4.4 讨论49-51

4.1 不同形式益生菌的效果49

4.2 益生菌对鲍鱼非特异性免疫的影响49-51

4.5 小结51-52

结论52-53
参考文献53-59
致谢59-60
作者介绍60