简谈CCK-8对依赖戒断细胞模型中强啡肽/κ受系统统影响-
最后更新时间：2024-04-05
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论文导读：运用Real-TimePCR技术观察依赖及戒断PC12细胞模型中κ阿片受体、强啡肽原（PDYN）及CCK1和CCK2受体mRNA水平的转变；同时，在建立依赖及戒断细胞模型的基础上，观察不同剂量的CCK-8对κ阿片受体及强啡肽原mRNA的影响，以探讨CCK-8是否通过对强啡肽/κ受系统统的调节进而参与了依赖和戒断历程。首先100μM作用48小
摘要：目的：阿片受体主要分为3种亚型，即μ、 δ、 κ阿片受体，其中κ阿片受体通过与特异性配体强啡肽结合参与产生机体镇痛、神经内分泌、情感行为、认知等生理活动[1]，并且参与依赖的形成及戒断后负性情绪的产生。探讨证实强啡肽/κ阿片受系统统在物质成瘾[2]中可以抑制中脑边缘多巴胺神经系统功能，以而发挥其在依赖及戒断历程中的作用。八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide，CCK-8）是中枢神经系统内含量最高、作用最强的抗阿片肽，参与调节机体疼痛、认知、奖赏和学习记忆历程。有报道证实[3]CCK-8可以翻转κ阿片受体参与介导的镇痛作用。然而，有关CCK-8与κ阿片受体在依赖及戒断历程中的相互作用尚未见报道。本探讨通过建立依赖和戒断细胞模型，观察CCK-8对依赖及戒断历程的影响，并且观察CCK-8是否通过对强啡肽/κ受系统统的调节进而参与了依赖和戒断历程，以进一步明确CCK-8参与依赖和戒断的具体机制。策略：1以100μM作用48h建立PC12细胞依赖模型，并给予10μM纳洛酮作用15min进行催促戒断，采取时间分辨免疫荧光浅析法检测细胞内cAMP水平，以cAMP超射为指标鉴定细胞模型是否成功。给予不同浓度CCK-8（10-12-10-6M）与100μM共同孵育细胞48h后，10μM纳洛酮作用15min进行催促戒断，观察CCK-8对依赖及戒断细胞模型的影响，并且单独给予CCK-8作用48h，观察CCK-8本身对cAMP水平的影响。2运用Real-Time PCR技术观察依赖及戒断PC12细胞模型中κ阿片受体、强啡肽原（PDYN）及CCK1和CCK2受体mRNA水平的转变；同时，在建立依赖及戒断细胞模型的基础上，观察不同剂量的CCK-8对κ阿片受体及强啡肽原mRNA的影响，以探讨CCK-8是否通过对强啡肽/κ受系统统的调节进而参与了依赖和戒断历程。首先100μM作用48小时建立依赖模型；100μM作用48小时后给予10μM纳洛酮作用15分钟建立戒断模型。观察上面陈述的模型中κ受体、PDYN、CCK1受体以及CCK2受体的mRNA的表达变化。其次，以不同浓度的CCK-8（10~(-12)-10~(-6)M）分别单独作用或作用于依赖及戒断PC12细胞48小时，以观察不同剂量CCK-8对依赖及戒断模型中κ受体及PDYN mRNA表达的变化的影响。结果：1100μM作用于PC12细胞48h后给予10μM纳洛酮作用15min，可见PC12细胞内cAMP含量增加至3.98±0.26pM，与空白对照组2.75±0.37pM及依赖组3.16±0.10pM相比较有显著差别，形成了cAMP超射，证实依赖戒断细胞模型建立成功。2100μM作用于PC12细胞48h、10μM纳洛酮催促戒断15min后， κ受体、 PDYN以及CCK1和CCK2受体mRNA均显著上调，与对照组相比具有统计学作用。3不同浓度CCK-8（10~(-12)-10~(-6)M）与100μM共同孵育PC12细胞48小时后，给予10μM纳洛酮作用15min，诱导cAMP超射的形成。结果显示，10~(-7)、10~(-6)M的CCK-8可显著抑制慢性孵育后纳洛酮催促戒断细胞模型的cAMP超射，与戒断组相比具有统计学作用；而10~(-12)、10~(-10)、10~(-8)M的CCK-8对cAMP含量无显著影响。单独给予不同浓度CCK-8（10~(-12)-10~(-6)M）孵育细胞48h对cAMP无显著作用。410~(-7)、10~(-6)M的CCK-8与共同孵育PC12细胞48小时，可显著降低κ受体及PDYN mRNA的表达水平，与依赖组相比具有统计学作用。10~(-12)、10~(-10)和10~(-8)M的CCK-8对κ受体及PDYN mRNA表达无显著影响。单独给予10~(-7)、10~(-6)M的CCK-8作用于PC12细胞48小时同样可降低κ受体及PDYN mRNA的水平，而10~(-12)、10~(-10)、10~(-8)M的CCK-8对κ受体及PDYN mRNA水平无显著影响。510~(-7)、10~(-6)M的CCK-8与共同孵育PC12细胞48小时后给予10μM纳洛酮作用15分钟，可显著抑制κ受体及PDYN mRNA水平在戒断后的上调，与戒断组相比具有统计学作用。10~(-12)、10~(-10)和10-8M的CCK~(-8)对κ受体及PDYN mRNA表达无显著影响。结论：1本实验以“cAMP”超射做为观察指标，成功建立了依赖和戒断细胞模型。2在依赖及戒断细胞模型基础上，给予CCK-8干预可显著抑制依赖及戒断的形成，且呈剂量依赖性。3在依赖及戒断细胞模型中κ阿片受体及强啡肽原mRNA表达增加，CCK-8可剂量依赖地降低κ阿片受体及强啡肽原mRNA的表达，提示CCK-8可能通过抑制κ阿片受体及强啡肽原的表达抑制戒断的发生。关键词：依赖论文戒断论文八肽胆囊收缩素论文κ阿片受体论啡肽原论文cAMP论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要4-7
ABSTRACT7-10
英文缩写10-11
前言11-13
材料与策略13-22
结果22-26
附图26-32
附表32-37
讨论37-41
结论41-42
参考文献42-46
综述 阿片受体及内源性阿片肽探讨进展46-55
参考文献50-55
致谢55-56
个人简历56
摘要：目的：阿片受体主要分为3种亚型，即μ、 δ、 κ阿片受体，其中κ阿片受体通过与特异性配体强啡肽结合参与产生机体镇痛、神经内分泌、情感行为、认知等生理活动[1]，并且参与依赖的形成及戒断后负性情绪的产生。探讨证实强啡肽/κ阿片受系统统在物质成瘾[2]中可以抑制中脑边缘多巴胺神经系统功能，以而发挥其在依赖及戒断历程中的作用。八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide，CCK-8）是中枢神经系统内含量最高、作用最强的抗阿片肽，参与调节机体疼痛、认知、奖赏和学习记忆历程。有报道证实[3]CCK-8可以翻转κ阿片受体参与介导的镇痛作用。然而，有关CCK-8与κ阿片受体在依赖及戒断历程中的相互作用尚未见报道。本探讨通过建立依赖和戒断细胞模型，观察CCK-8对依赖及戒断历程的影响，并且观察CCK-8是否通过对强啡肽/κ受系统统的调节进而参与了依赖和戒断历程，以进一步明确CCK-8参与依赖和戒断的具体机制。策略：1以100μM作用48h建立PC12细胞依赖模型，并给予10μM纳洛酮作用15min进行催促戒断，采取时间分辨免疫荧光浅析法检测细胞内cAMP水平，以cAMP超射为指标鉴定细胞模型是否成功。给予不同浓度CCK-8（10-12-10-6M）与100μM共同孵育细胞48h后，10μM纳洛酮作用15min进行催促戒断，观察CCK-8对依赖及戒断细胞模型的影响，并且单独给予CCK-8作用48h，观察CCK-8本身对cAMP水平的影响。2运用Real-Time PCR技术观察依赖及戒断PC12细胞模型中κ阿片受体、强啡肽原（PDYN）及CCK1和CCK2受体mRNA水平的转变；同时，在建立依赖及戒断细胞模型的基础上，观察不同剂量的CCK-8对κ阿片受体及强啡肽原mRNA的影响，以探讨CCK-8是否通过对强啡肽/κ受系统统的调节进而参与了依赖和戒断历程。首先100μM作用48小时建立依赖模型；100μM作用48小时后给予10μM纳洛酮作用15分钟建立戒断模型。观察上面陈述的模型中κ受体、PDYN、CCK1受体以及CCK2受体的mRNA的表达变化。其次，以不同浓度的CCK-8（10~(-12)-10~(-6)M）分别单独作用或作用于依赖及戒断PC12细胞48小时，以观察不同剂量CCK-8对依赖及戒断模型中κ受体及PDYN mRNA表达的变化的影响。结果：1100μM作用于PC12细胞48h后给予10μM纳洛酮作用15min，可见PC12细胞内cAMP含量增加至3.98±0.26pM，与空白对照组2.75±0.37pM及依赖组3.16±0.10pM相比较有显著差别，形成了cAMP超射，证实依赖戒断细胞模型建立成功。2100μM作用于PC12细胞48h、10μM纳洛酮催促戒断15min后， κ受体、 PDYN以及CCK1和CCK2受体mRNA均显著上调，与对照组相比具有统计学作用。3不同浓度CCK-8（10~(-12)-10~(-6)M）与100μM共同孵育PC12细胞48小时后，给予10μM纳洛酮作用15min，诱导cAMP超射的形成。结果显示，10~(-7)、10~(-6)M的CCK-8可显著抑制慢性孵育后纳洛酮催促戒断细胞模型的cAMP超射，与戒断组相比具有统计学作用；而10~(-12)、10~(-10)、10~(-8)M的CCK-8对cAMP含量无显著影响。单独给予不同浓度CCK-8（10~(-12)-10~(-6)M）孵育细胞48h对cAMP无显著作用。410~(-7)、10~(-6)M的CCK-8与共同孵育PC12细胞48小时，可显著降低κ受体及PDYN mRNA的表达水平，与依赖组相比具有统计学作用。10~(-12)、10~(-10)和10~(-8)M的CCK-8对κ受体及PDYN mRNA表达无显著影响。单独给予10~(-7)、10~(-6)M的CCK-8作用于PC12细胞48小时同样可降低κ受体及PDYN mRNA的水平，而10~(-12)、10~(-10)、10~(-8)M的CCK-8对κ受体及PDYN mRNA水平无显著影响。510~(-7)、10~(-6)M的CCK-8与共同孵育PC12细胞48小时后给予10μM纳洛酮作用15分钟，可显著抑制κ受体及PDYN mRNA水平在戒断后的上调，与戒断组相比具有统计学作用。10~(-12)、10~(-10)和10-8M的CCK~(-8)对κ受体及PDYN mRNA表达无显著影响。结论：1本实验以“cAMP”超射做为观察指标，成功建立了依赖和戒断细胞模型。2在依赖及戒断细胞模型基础上，给予CCK-8干预可显著抑制依赖及戒断的形成，且呈剂量依赖性。3在依赖及戒断细胞模型中κ阿片受体及强啡肽原mRNA表达增加，CCK-8可剂量依赖地降低κ阿片受体及强啡肽原mRNA的表达，提示CCK-8可能通过抑制κ阿片受体及强啡肽原的表达抑制戒断的发生。关键词：依赖论文戒断论文八肽胆囊收缩素论文κ阿片受体论啡肽原论文cAMP论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要4-7
ABSTRACT7-10
英文缩写10-11
前言11-13
材料与策略13-22
结果22-26
附图26-32
附表32-37
讨论37-41
结论41-42
参考文献42-46
综述 阿片受体及内源性阿片肽探讨进展46-55
参考文献50-55
致谢55-56
个人简历56