试论金雀异黄酮对体外培养大鼠成骨细胞和rBMSCs缺氧损伤保护作用-

论文导读：基因HIF-1α、Bcl-2、Runx2、Osterix和BMP-2mRNA的表达并抑制基因Caspase-3mRNA的表达，并且还提升Ⅰ型胶原的表达和钙化结节的形成面积。所以，金雀异黄酮对大鼠成骨细胞和rBMSCs的缺氧损伤具有保护作用并推动其成骨性分化。关键词：金雀异黄酮论文缺氧诱导因子-1α论文成骨细胞论文rBMSCs论文细胞周
摘要：金雀异黄酮具有抑制骨吸收和增加骨密度的作用。本论文主要探讨缺氧条件下，10-6mol/L、10-5mol/L和10-4mol/L的金雀异黄酮对大鼠成骨细胞（ROB）和10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L的金雀异黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）缺氧损伤与成骨性分化的影响。缺氧处理36或48小时后，浅析各组的细胞活力、细胞内ROS含量、LDH漏出率、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙盐沉积量，流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期，免疫组织化学染色浅析PCNA蛋白表达，钙化结节进行茜素红染色和von Kossa染色，免疫组织化学染色和western blotting蛋白印迹法浅析Ⅰ型胶原蛋白表达，并用定量RT-PCR法检测缺氧诱导因子（HIF-1α）、抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Caspase-3以及成骨性分化基因Runx2、Osterix和BMP-2的mRNA的相对表达水平。结果显示，金雀异黄酮增强细胞活力和提升ALP活性，降低ROS含量和LDH漏出率，抑制凋亡和PCNA蛋白表达，推动基因HIF-1α、Bcl-2、Runx2、Osterix和BMP-2mRNA的表达并抑制基因Caspase-3mRNA的表达，并且还提升Ⅰ型胶原的表达和钙化结节的形成面积。所以，金雀异黄酮对大鼠成骨细胞和rBMSCs的缺氧损伤具有保护作用并推动其成骨性分化。关键词：金雀异黄酮论文缺氧诱导因子-1α论文成骨细胞论文rBMSCs论文细胞周期论文凋亡论文增殖细胞核抗原论文活性氧簇论文
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摘要12-13
Abstract13-14
第一部分 绪论14-22

1. 骨系细胞的组成和骨组织的血供特点14-16

1.1 骨系细胞的组成14-15

1.2 骨组织的血供特点15-16

2. 缺氧对骨系细胞的影响16-20

2.1 缺氧对 BMSCs 的影响16

2.2 缺氧对成骨细胞的影响16-17

2.3 缺氧对骨细胞的影响17

2.4 缺氧对破骨细胞的影响17-18

2.5 缺氧影响骨系细胞的机理18-20

3. 金雀异黄酮的生物学作用20-21论文导读：材料28-291.2成骨细胞的体外培养291.3实验分组291.4细胞活力浅析29-301.5细胞结构与状态浅析301.6PCNA免疫组织化学染色301.7iNOS活性测定30-311.8利用荧光探针测定细胞内ROS含量311.9成骨细胞分化浅析311.10成骨细胞矿化能力浅析31-321.11RT-PCR浅析基因mRNA表达32-341.12统计学处理34

2.结果34-431对

3.1 金雀异黄酮雌激素样作用20-21

3.2 金雀异黄酮抗氧化作用21

3.3 金雀异黄酮抗肿瘤作用21

4 本课题主要探讨内容21-22
第二部分 大鼠成骨细胞体外培养与鉴定22-28
1 材料和策略22-26

1.1 材料22

1.2 试剂22

1.3 主要仪器22-23

1.4 主要试剂的配制23-24

1.5 大鼠成骨细胞（ROB）的培养与传代24

1.6 ROB 传代24-25

1.7 大鼠成骨细胞的鉴定25-26

2 结果26-27

2.1 形态学观察26

2.2 ALP 组织化学染色结果26

2.3 钙化结节的von Kossa染色结果26-27

2.4 钙化结节染色结果27

3 讨论27-28
第三部分 金雀异黄酮对体外培养成骨细胞抗缺氧28-45
1 材料与策略28-34

1.1 材料28-29

1.2 成骨细胞的体外培养29

1.3 实验分组29

1.4 细胞活力浅析29-30

1.5 细胞结构与状态浅析30

1.6 PCNA 免疫组织化学染色30

1.7 iNOS 活性测定30-31

1.8 利用荧光探针测定细胞内 ROS 含量31

1.9 成骨细胞分化浅析31

1.10 成骨细胞矿化能力浅析31-32

1.11 RT-PCR 浅析基因 mRNA 表达32-34

1.12 统计学处理34

2. 结果34-43

2.1 对缺氧成骨细胞活力的影响34-35

2.2 对 LDH 漏出率的影响35

2.3 对细胞凋亡率影响35-37

2.4 对细胞周期的影响37

2.5 对 PCNA 蛋白表达量的影响37-43

3 讨论43-45
第四部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定45-49
1 材料与策略45-47

1.1 材料45

1.2 试剂45

1.3 主要仪器45-46

1.4 rBMSCs 的分离培养46

1.5 rBMSCs 的传代46-47

1.6 rBMSCs 形态和成骨性分化观察47

2 结果47-48
3 讨论48-49
第五部分 金雀异黄酮对体外培养缺氧 rBMSCs 的影响49-59
1 材料与策略49-53

1.1 材料49

1.2 试剂49-50

1.3 主要仪器50

1.4 rBMSCs 的分离培养和传代50

1.5 实验分组50-51

1.6 细胞活力浅析51

1.7 向成骨分化能力浅析51-53

1.8 矿化能力浅析53

1.9 统计学处理53

2 结果53-58

2.1 对 rBMSCs 细胞活力的影响53-54

2.2 对ALP活性的影响论文导读：上一页123

54

2.3 对Ⅰ型胶原蛋白表达的影响54-55

2.4 对成骨分化相关基因 Runx2 和 BMP-2 mRNA 表达水平的影响55-56

2.5 对细胞基质钙盐沉积量的影响56

2.6 western blotting 检测Ⅰ型胶原蛋白的表达量56-57

2.7 对钙化结节形成面积的影响57-58

3 讨论58-59
结论59-60
参考文献60-68
致谢68-69
附：攻读学位期间所发表的学术论文目录69