水溶性低分子量壳聚糖（WSC）,二乙烯三胺五乙酸（DTPA）,纳米粒,BRL细胞,辐射防护,
最后更新时间：2024-01-21
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论文导读：后BRL细胞的SubG1峰显著降低（p＜0.05），而1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，BRL细胞的SubG1峰没有显著变化。流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Flou-3AM检测胞内钙离子荧光强度的变化、JC-1检测线粒体膜电位及荧光探针检测活性氧结果表明，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比
摘要：目的：合成WSC-DTPA聚合物，并将其制备成纳米粒，体外探讨其细胞摄取效果和辐射防护效果，为研制新型促排药物提供论述和实验依据。策略：通过N-乙酰化反应合成WSC-DTPA聚合物，离子凝胶法将其制备成WSC-DTPA纳米粒，对其结构及形态进行表征；利用FITC与WSC-DTPA纳米粒残余的氨基反应，制得FITC-WSC-DTPA纳米粒荧光探针，活细胞工作站（LCS）观察BRL细胞摄取FITC-WSC-DTPA纳米荧光探针的情况；采取MTT法检测不同浓度WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(~(60))Co_γ射线照射后48h大鼠正常肝细胞（BRL）存活率的影响；流式细胞仪PI单染法检测BRL细胞经不同浓度WSC-DTPA纳米粒及6Gy~(60)Co_γ射线联合作用后细胞周期分布的变化；流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡双染法、Flou-3AM法、JC-1及荧光探针法分别检测不同浓度WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞凋亡、胞内钙离子荧光强度、线粒体膜电位及活性氧的影响；克隆形成实验浅析不同浓度WSC-DTPA纳米粒联合不同照射剂量对BRL细胞存活率的影响，以多靶单击数学模型S=1-（1-e~(-D/D0)）~n拟合细胞存活曲线，计算D_0、D_q值及保护系数PF值，并评价其辐射防护效果。结果：TNBS法、傅里叶变换红外光谱及核磁共振氢谱均证实，通过N-乙酰化反应成功合成了游离氨基含量分别为92.7%、74.3%、14.1％、1.59%的WSC-DTPA聚合物。通过离子凝胶法制得的WSC纳米粒及游离氨基含量分别为92.7%、74.3%和1.59%的WSC-DTPA纳米粒，纳米激光粒度仪测量其平均粒度分别为7.31nm、8.42nm、8.34nm及14.53nm，且各个粒径测量值的PDI均小于0.03，透射电镜和扫描电镜观察其形态近似球形，大小均一。活细胞工作站检测表明，2h内WSC纳米粒及WSC-DTPA纳米粒能通过细胞膜，进入细胞，而非纳米化的WSC和WSC-DTPA聚合物则未进入细胞。MTT法结果表明，在1.56~50.0μg/mL浓度范围内WSC-DTPA纳米粒对BRL细胞无毒性，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比，1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，对6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞存活率无显著差别，而WSC、WSC纳米粒及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒使BRL细胞存活率显著提升（p＜0.05）。流式细胞仪PI单染法结果表明，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比，WSC加药组、WSC纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，使6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞的SubG1峰显著降低（p＜0.05），而1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，BRL细胞的SubG1峰没有显著变化。流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Flou-3AM检测胞内钙离子荧光强度的变化、JC-1检测线粒体膜电位及荧光探针检测活性氧结果表明，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比，1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，BRL细胞凋亡率、胞内钙离子荧光强度、线粒体膜电位及活性氧没有显著变化，而WSC加药组、WSC纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组细胞凋亡率显著降低，胞内钙离子荧光强度显著降低，线粒体膜电位显著升高，活性氧显著降低（p＜0.05）；且细胞内钙离子荧光强度与细胞凋亡率呈良好线性正相关，经统计浅析，R2在0.9~(60)3~0.9940之间，p均小于0.05，说明线性拟合度较高。克隆形成实验结果表明，1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组的PF值均小于1，而WSC加药组、WSC纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组的PF值均大于1。以上细胞实验结果基本一致，即WSC、WSC纳米粒及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞具有辐射防护作用，而1.59%WSC-DTPA纳米粒及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒对其无辐射防护作用。结论：本探讨通过N-乙酰化反应和离子凝胶法成功地制备出游离氨基含量分别为92.7%、74.3%、1.59%的WSC-DTPA纳米粒，采取活细胞工作站观察到2h内纳米粒可以透过细胞膜进入细胞，通过细胞实验证明了浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(60)Co_γ射线照射的BRL细胞具有一定的辐射防护作用，而为下一步探讨WSC-DTPA纳米粒的体内促排及防护作用奠定基础。关键词：水溶性低分子量壳聚糖（WSC）论文二乙烯三胺五乙酸（DTPA）论文纳米粒论文BRL细胞论文辐射防护论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要4-7
Abstract7-11
序言11-16
第一部分 WSC-DTPA 聚合物的制备与鉴定16-23
1．材料16
2 策略16-17
3 结果17-19
4 讨论19-22
5 小结22-23
第二部分 WSC-DTPA 纳米粒的制备与鉴定23-32
1 材料23
2 策略23-25
3 结果25-28
4 讨论28-31
5 小结31-32
第三部分 WSC-DT论文导读：PA纳米粒的辐射防护作用32-591材料32-332策略33-363结果36-524讨论52-575小结57-59全文总结59-61参考文献61-67综述：壳聚糖及其衍生物纳米粒作为药物载体的探讨进展67-78参考文献73-78攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文78-79附录79-80致谢80-82上一页12
PA 纳米粒的辐射防护作用32-59
1 材料32-33
2 策略33-36
3 结果36-52
4 讨论52-57
5 小结57-59
全文总结59-61
参考文献61-67
综述：壳聚糖及其衍生物纳米粒作为药物载体的探讨进展67-78
参考文献73-78
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文78-79
附录79-80
致谢80-82
摘要：目的：合成WSC-DTPA聚合物，并将其制备成纳米粒，体外探讨其细胞摄取效果和辐射防护效果，为研制新型促排药物提供论述和实验依据。策略：通过N-乙酰化反应合成WSC-DTPA聚合物，离子凝胶法将其制备成WSC-DTPA纳米粒，对其结构及形态进行表征；利用FITC与WSC-DTPA纳米粒残余的氨基反应，制得FITC-WSC-DTPA纳米粒荧光探针，活细胞工作站（LCS）观察BRL细胞摄取FITC-WSC-DTPA纳米荧光探针的情况；采取MTT法检测不同浓度WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(~(60))Co_γ射线照射后48h大鼠正常肝细胞（BRL）存活率的影响；流式细胞仪PI单染法检测BRL细胞经不同浓度WSC-DTPA纳米粒及6Gy~(60)Co_γ射线联合作用后细胞周期分布的变化；流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡双染法、Flou-3AM法、JC-1及荧光探针法分别检测不同浓度WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞凋亡、胞内钙离子荧光强度、线粒体膜电位及活性氧的影响；克隆形成实验浅析不同浓度WSC-DTPA纳米粒联合不同照射剂量对BRL细胞存活率的影响，以多靶单击数学模型S=1-（1-e~(-D/D0)）~n拟合细胞存活曲线，计算D_0、D_q值及保护系数PF值，并评价其辐射防护效果。结果：TNBS法、傅里叶变换红外光谱及核磁共振氢谱均证实，通过N-乙酰化反应成功合成了游离氨基含量分别为92.7%、74.3%、14.1％、1.59%的WSC-DTPA聚合物。通过离子凝胶法制得的WSC纳米粒及游离氨基含量分别为92.7%、74.3%和1.59%的WSC-DTPA纳米粒，纳米激光粒度仪测量其平均粒度分别为7.31nm、8.42nm、8.34nm及14.53nm，且各个粒径测量值的PDI均小于0.03，透射电镜和扫描电镜观察其形态近似球形，大小均一。活细胞工作站检测表明，2h内WSC纳米粒及WSC-DTPA纳米粒能通过细胞膜，进入细胞，而非纳米化的WSC和WSC-DTPA聚合物则未进入细胞。MTT法结果表明，在1.56~50.0μg/mL浓度范围内WSC-DTPA纳米粒对BRL细胞无毒性，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比，1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，对6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞存活率无显著差别，而WSC、WSC纳米粒及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒使BRL细胞存活率显著提升（p＜0.05）。流式细胞仪PI单染法结果表明，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比，WSC加药组、WSC纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，使6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞的SubG1峰显著降低（p＜0.05），而1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，BRL细胞的SubG1峰没有显著变化。流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Flou-3AM检测胞内钙离子荧光强度的变化、JC-1检测线粒体膜电位及荧光探针检测活性氧结果表明，与照射组（6Gy-0μg/mL）相比，1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组，BRL细胞凋亡率、胞内钙离子荧光强度、线粒体膜电位及活性氧没有显著变化，而WSC加药组、WSC纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组细胞凋亡率显著降低，胞内钙离子荧光强度显著降低，线粒体膜电位显著升高，活性氧显著降低（p＜0.05）；且细胞内钙离子荧光强度与细胞凋亡率呈良好线性正相关，经统计浅析，R2在0.9~(60)3~0.9940之间，p均小于0.05，说明线性拟合度较高。克隆形成实验结果表明，1.59%WSC-DTPA纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组的PF值均小于1，而WSC加药组、WSC纳米粒加药组及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒加药组的PF值均大于1。以上细胞实验结果基本一致，即WSC、WSC纳米粒及浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(60)Co_γ射线照射后BRL细胞具有辐射防护作用，而1.59%WSC-DTPA纳米粒及浓度在6.25μg/mL以下的92.7%WSC-DTPA纳米粒对其无辐射防护作用。结论：本探讨通过N-乙酰化反应和离子凝胶法成功地制备出游离氨基含量分别为92.7%、74.3%、1.59%的WSC-DTPA纳米粒，采取活细胞工作站观察到2h内纳米粒可以透过细胞膜进入细胞，通过细胞实验证明了浓度在6.25μg/mL以上的92.7%WSC-DTPA纳米粒对6Gy~(60)Co_γ射线照射的BRL细胞具有一定的辐射防护作用，而为下一步探讨WSC-DTPA纳米粒的体内促排及防护作用奠定基础。关键词：水溶性低分子量壳聚糖（WSC）论文二乙烯三胺五乙酸（DTPA）论文纳米粒论文BRL细胞论文辐射防护论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要4-7
Abstract7-11
序言11-16
第一部分 WSC-DTPA 聚合物的制备与鉴定16-23
1．材料16
2 策略16-17
3 结果17-19
4 讨论19-22
5 小结22-23
第二部分 WSC-DTPA 纳米粒的制备与鉴定23-32
1 材料23
2 策略23-25
3 结果25-28
4 讨论28-31
5 小结31-32
第三部分 WSC-DT论文导读：PA纳米粒的辐射防护作用32-591材料32-332策略33-363结果36-524讨论52-575小结57-59全文总结59-61参考文献61-67综述：壳聚糖及其衍生物纳米粒作为药物载体的探讨进展67-78参考文献73-78攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文78-79附录79-80致谢80-82上一页12
PA 纳米粒的辐射防护作用32-59
1 材料32-33
2 策略33-36
3 结果36-52
4 讨论52-57
5 小结57-59
全文总结59-61
参考文献61-67
综述：壳聚糖及其衍生物纳米粒作为药物载体的探讨进展67-78
参考文献73-78
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文78-79
附录79-80
致谢80-82