探讨活性氧虾青素通过Sp1/NR1通路拮抗MPP~+诱导PC12细胞氧化损伤

论文导读：l/L)+ATX(10umol/L)+MPP~+(500umol/L)组细胞Sp1、NR1蛋mRNA表达下降，差别有明显性作用(P0.01)。

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摘要：【背景】帕金森病（Parkinson Disease，PD）是老年人群中发病率很高的一种神经体系退行性疾病，氧化应激损伤在帕金森病的发生中起着关键意义已被广泛认可。Sp1是第一个被克隆和纯化的核转录因子，具有高度保守的DNA结合序列。Sp1通过自身极为下游基因表达的调节参与多种细胞的增殖、凋亡及相关疾病的发生进展和治疗。体内外实验探讨均证实，氧化应激条件下，Sp1的表达极为与NR1启动子结合活性均上调，进而上调NR1的表达，介导后续的兴奋毒性及细胞凋亡。N--D-天门冬氨酸(NMDA)受体在神经体系疾病中的意义越来越受到关注。NMDA受体主要有着突触前膜，是由NR1、NR2A-D、NR3A-B等亚单位构成的异四聚体。NR1是功能性NMDA受体的必须基团，PC12细胞中主要表达NR1。氧化应激后，兴奋性谷氨酸过度激活NMDA受体导致神经元胞内钙超载而触发的系列生化转变和诱导相关基因的表达可能是导致神经元损伤的重要理由，由此该受体通道的调控在氧化应激的治疗中可能是重要的靶点之一。近年来发现虾青素（astaxanthin，ATX）具有明显的抗氧化损伤、清除自由基、抗凋亡等生物学意义，可顺利通过血脑屏障，有望成为治疗神经退行性疾病的保护性药物。Sp1/NR1细胞信号通路在MPP~+诱导的PC12细胞氧化应激损伤中意义未见报道，ATX是否通过Sp1/NR1细胞信号通路拮抗MPP~+诱导的PC12细胞氧化应激损伤也未见报道。由此探讨ATX对MPP~+诱导的PC12细胞损伤的保护意义的机制，为寻求有效的保护和治疗PD提供新的思路，作用重大。【目的】1、研究ATX对MPP~+诱导的帕金森病细胞模型PC12细胞是否具有保护意义。2、研究ATX是否通过Sp1/NR1细胞信号通路拮抗MPP~+诱导的氧化应激损伤。【办法】1、PC12细胞（高分化）运用MPP~+(0、125、250、500、1000、2000umol/L)加入培养基中，制备帕金森病氧化损伤细胞模型。ATX(0、1.25、5、10、20umol/L)从及Sp1特异性抑制剂MIT(0、0.045、0.09、0.18、0.36、0.72umol/L)加入培养基中观察细胞生长状况。2、 MTT法检测细胞活力，观察不同浓度ATX、MIT、MPP~+培养细胞24h后细胞活力变化。3、流式细胞分析技术检测PC12细胞胞内的活性氧水平。4、免疫印迹法和Real time RCR分别检测PC12细胞内Sp1、NR1mRNA和蛋白的表达变化。5、细胞免疫荧光技术（共聚焦显微镜）检测Sp1、NR1蛋白在PC12细胞内的定位、表达及Sp1的核转移状况。6、统计学处理。【结果】1、MTT法测定MPP~+处理细胞生存率显著下降；ATX处理后细胞生存率较空白对照组上升，且有着剂量依赖联系；MIT在一定浓度范围内对细胞有着轻度损伤意义；ATX和MIT预干预都对MPP~+处理的细胞有较显著的保护意义。2、流式细胞分析技术检测PC12细胞内的活性氧水平，MPP~+处理后活性氧显著上升，ATX预处理2h后再加入MPP~+处理，胞内活性氧显著下降。3、免疫印迹法半定量PC12细胞内Sp1、NR1蛋白的表达变化，MPP~+处理组与空白对照组对比显著升高，差别有明显性作用(P0.01)；与MPP~+(500umol/L)组相比，ATX(10umol/L)+MPP~+(500umol/L)组、MIT(0.36umol/L)+MPP~+(500umol/L)组从及MIT(0.36umol/L)+ATX(10umol/L)+MPP~+(500umol/L)组细胞Sp1、NR1蛋白表达下降，差别均有明显性作用(P0.01)。4、Real-time RCR半定量PC12细胞内Sp1、NR1mRNA表达变化，MPP~+处理组细胞与空白对照组比显著升高，差别有明显性作用(P0.01)；与MPP~+(500umol/L)组相比，ATX(10umol/L)+MPP~+(500umol/L)组、MIT(0.36umol/L)+MPP~+(500umol/L)组从及从及MIT(0.36umol/L)+ATX(10umol/L)+MPP~+(500umol/L)组细胞Sp1、NR1蛋mRNA表达下降，差别有明显性作用(P0.01)。5、细胞免疫荧光论文导读：4-5中文摘要5-8Abstract8-10前言10-12材料与办法12-24结果24-31讨论31-34结论34-35参考文献35-39致谢39-40综述40-50参考文献49-50上一页12
技术表明蛋白Sp1在胞核和胞浆均有表达，NR1蛋白则主要在胞浆表达。在MPP~+干预后，Sp1还有着核转移，以胞浆转移至胞核，ATX、MIT均可在一定程度上抑制这种核转位意义。而且，我们还可从看到，Sp1、NR1蛋白的表达变化走势与免疫印迹法、Real-time RCR半定量法大致相当。【结论】1、 ATX、MIT对MPP~+诱导的PC12细胞模型损伤具有保护意义。2、 ATX对MPP~+诱导的PC12细胞模型损伤的保护意义可通过抑制Sp1/NR1路径实现。关键词：虾青素论文PC12细胞论文Sp1论文NR1论文活性氧产物论文
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英文缩略词表(Abbreviations and acronyms)4-5
中文摘要5-8
Abstract8-10
前言10-12
材料与办法12-24
结果24-31
讨论31-34
结论34-35
参考文献35-39
致谢39-40
综述40-50
参考文献49-50