探讨噬菌体鲍曼不动杆菌噬菌体分离鉴定及生物学特性

论文导读：Ab-1的一步生长曲线揭示：潜伏期为20min，爆发期为30min，爆发量约为190PFU/cell；（6）在宿主菌裂解谱的试验中，噬菌体ФAb-1能裂解3株来源不同的鲍曼不动杆菌；（7）采取不同的保存办法，测得噬菌体的滴度变化不显著。在完成噬菌体的分离和鉴定的基础上，本项探讨选择鲍曼不动杆菌作为致病菌，从BALB/c小鼠为感染对象，在氨苄青霉素和环
摘要：鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Ab），广泛有着于自然界的土壤、水和医院的环境中，是一种需氧非发酵糖类，氧化酶阴性，硝酸盐还原阴性的革兰氏阴性杆菌，在分类上属需氧非发酵革兰阴性杆菌中的不动杆菌属（包括鲍曼不动杆菌、醋酸钙不动杆菌、琼氏不动杆菌、鲁菲不动杆菌、溶血不动杆菌和约翰逊不动杆菌）。随着抗生素的广泛运用，各种致病菌和条件致病菌（如鲍曼不动杆菌）的耐药率不断的攀升，特别是有关多重耐药的“超级细菌”包括鲍曼不动杆菌的报道，已引起医学界的高度关注。由于细菌的耐药性已成为全球医学领域关注的焦点，特别是“超级细菌”的频频出现，人类正重新步入“前抗生素”时代的可能正成为现实。噬菌体是一种侵袭细菌的病毒，特别是毒性噬菌体裂解细菌的特异性和高效性，使得各国探讨机构重新开始探索使用噬菌体治疗细菌感染（特别是耐药菌株引起的感染）的可行性不足。本项工作从鲍曼不动杆菌作为宿主菌，以污水中分离出3株针对鲍曼不动杆菌的毒性噬菌体，分别命名为ФAb-1, ФAb-2和ФAb-3，并对噬菌体ФAb-1的生物学特性进行了初步分析。（1）通过电镜观察发现：3株噬菌体的头部呈二十面体立体对称，直径约为50nm，有一短尾，属于有尾病毒目，足尾噬菌体科；（2）噬菌体ФAb-1核酸电泳和限制性酶切图谱显示：噬菌体ФAb-1的核酸为双链DNA，其基因组大小约为40kb，且含有Hind III、EcoR V、Nde I、BamH I和Afl III的多个酶切位点，进一步的酶切初步证实：噬菌体ФAb-1的基因组为环状DNA；（3）通过噬菌体ФAb-1的SDS-PAGE分析，可观察到8-9个蛋白条带，分子量在29～116kDa之间；（4）最佳感染复数(Multippcity of Infection，MOI)的测定表明：噬菌体ФAb-1感染其宿主菌的MOI是10-2：（5）噬菌体ФAb-1的一步生长曲线揭示：潜伏期为20min，爆发期为30min，爆发量约为190PFU/cell；（6）在宿主菌裂解谱的试验中，噬菌体ФAb-1能裂解3株来源不同的鲍曼不动杆菌；（7）采取不同的保存办法，测得噬菌体的滴度变化不显著。在完成噬菌体的分离和鉴定的基础上，本项探讨选择鲍曼不动杆菌作为致病菌，从BALB/c小鼠为感染对象，在氨苄青霉素和环磷酰胺的意义下，经口感染建立肠源性脓毒血症的动物模型。通过给予噬菌体治疗，评价噬菌体疗法在肠源性细菌性脓毒血症中的疗效。结果表明；接受噬菌体治疗的动物，其生存率显著高于对照组，说明通过口服噬菌体对于由鲍曼不动杆菌引起的肠源性脓毒血症是有效的。我们期待有更多的进一步探讨和噬菌体疗法在抗感染中的运用。关键词：鲍曼不动杆菌论文噬菌体论文耐药论文噬菌体疗法论文
本论文由www.7ctime.com,需要可从关系人员哦。中文摘要4-6
Abstract6-11
第1章 文献回顾11-20
参考文献17-20
第2章 鲍曼不动杆菌噬菌体生物学特性的探讨20-49

2.1 材料和办法20-30

2.

1.1 菌株20

2.

1.2 实验动物20

2.

1.3 主要试剂20-21

2.

1.4 主要仪器21-22

2.

1.5 鲍曼不动杆菌进一步确认22-23

2.

1.6 鲍曼不动杆菌噬菌体的分离及初步纯化23-24

2.

1.7 噬菌体电镜观察24

2.

1.8 噬菌体基因组的提取和限制性内切酶的分析24-25

2.

1.9 噬菌体最佳感染复数的测定25-26

2.

1.10 噬菌体一步生长曲线实验26

2.

1.11 噬菌体蛋白的 SDS-PAGE 分析26-27

2.

1.12 噬菌体的裂解谱试验27

2.

1.13 噬菌体的纯化和内毒素含量的测定27-28

2.

1.14 噬菌体的保存28

2.

1.15 鲍曼不动杆菌所致肠源性脓毒血症动物模型的建立28-29

2.

1.16 噬菌体对肠源性脓毒血症治疗意义的观察29-30

2.2 结果30-42

2.1 鲍曼不动杆菌的进一步确认30

2.2 鲍曼不动杆菌噬菌体的分离与噬斑测定30-31

2.3 鲍曼不动杆菌噬菌体电镜观察31-32

2.4 噬菌体基因组的提取和酶切电泳32-34

2.2.5 噬菌论文导读：义422.3讨论42-47参考文献47-49第3章结论49-50个人介绍及在攻读硕士期间所得的科研成果50-51致谢51上一页12
体ФAb-1的最佳感染复数(MOI)的测定34-35

2.6 噬菌体ФAb-1的一步生长曲线35-37

2.7 噬菌体ФAb-1蛋白的SDS-PAGE分析37

2.8 噬菌体ФAb-1的裂解谱试验37-38

2.9 浓缩前后噬菌体溶液中内毒素含量的变化38-39

2.10 噬菌体的保存39-41

2.11 鲍曼不动杆菌最小致死量（MLD）的测定41-42

2.12 噬菌体疗法对鲍曼不动杆菌引肠源性脓毒血症的保护意义42

2.3 讨论42-47

参考文献47-49
第3章 结论49-50
个人介绍及在攻读硕士期间所得的科研成果50-51
致谢51