简析花黄加压溶剂法提取红三叶草异黄酮及其单体分离怎样

论文导读：
摘要：红三叶草(Trifopum Pratense.L)为豆科三叶草属多年生牧草，含有丰富的异黄酮类化合物，其中芒柄花黄素和鸡豆黄素含量相对较高。红三叶草异黄酮具有消炎、抗癌、抗肿瘤、调节人体激素平衡等多种生理意义。芒柄花黄素和鸡豆黄素还是制备大豆异黄酮苷元的重要原料。本试验从红三叶草为原料，探讨了红三叶草异黄酮的提取纯化、单体分离和抗氧化的生物活性。探讨了加压溶剂法和亚临界水法提取红三叶草总异黄酮，并对两种办法进行对比分析。通过单因素及正交试验确定加压溶剂法提取红三叶草总异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度125℃、提取时间5min、提取压力1.6MPa、液固比25ml/g，乙醇浓度70%，红三叶草总异黄酮最终粗得率为49.58mg·g-1。通过单因素及正交试验确定亚临界水法提取红三叶草总异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度120℃、提取时间15min、提取压力1.4MPa、液固比50ml/g，红三叶草总异黄酮最终粗得率为33.61mg·g-1。探讨结果表明加压溶剂法提取率高于亚临界水法。探讨了大孔树脂法纯化红三叶草总异黄酮的办法。通过静态吸附与剖析试验探讨了5种大孔吸附树脂的吸附效果，结果表明AB-8对红三叶草总异黄酮的综合性吸附效果最好。选取70%浓度乙醇作为洗脱液，用AB-8大孔吸附树脂进行动态试验，得到最佳纯化条件为：选择上样液浓度为0.2173mg/mL，样液体积为3BV，进样流速为1mL/min，洗脱液体积为2BV，洗脱流速为2mL/min，在从上条件下异黄酮回收率为96.61%，大孔树脂纯化前黄酮粗提液纯度为5.03%，纯化后样品纯度为65.58%。运用高速逆流色谱法对经过大孔树脂纯化的红三叶草异黄酮进行再次纯化，分离出芒柄花黄素和鸡豆黄素，确定最佳溶剂系统为：正己烷：氯仿：甲醇：水=1.5:3:3:2；HSCCC分离操作参数：主机温度为30℃，主机转速为900r/min，流动相流速为2mL/min，样品浓度5.26mg/mL。在上面陈述的条件下得到的芒柄花黄素和鸡豆黄素的纯度分别为92.87%和83.48%。探讨了芒柄花黄素和鸡豆黄素清除超氧自由基、清除羟自由基、清除DPPH能力极为还原能力。探讨结果表明，芒柄花黄素和鸡豆黄素的抗氧化能力随浓度的增大逐渐增大；相同浓度下，鸡豆黄素的抗氧化能力高于芒柄花黄素。关键词：红三叶草异黄酮论文加压溶剂提取论文芒柄花黄素论文鸡豆黄素论文分离纯化论文
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ABSTRACT9-11
1 前言11-21

1.1 立题背景及作用11-12

1.2 红三叶草极为红三叶草异黄酮介绍12-15

1.2.1 红三叶草的概况12

1.2.2 红三叶草的意义12

1.2.3 红三叶草异黄酮化合物的结构与性质12-14

1.2.4 异黄酮的生理意义14-15

1.3 红三叶草异黄酮提取办法简介15-16

1.3.1 加压溶剂法15

1.3.2 亚临界水提取法15-16

1.3.3 微波辅助萃取法16

1.3.4 超声波辅助提取法16

1.4 异黄酮的纯化分离办法16-18

1.4.1 大孔树脂的纯化16-17

1.4.2 高效逆流色谱分离纯化异黄酮17

1.4.3 高效液相色谱17-18

1.5 异黄酮类化合物抗氧化活性18-19

1.5.1 异黄酮类化合物清除自由基意义18-19

1.6 探讨的主要内容19-21

2 材料与办法21-34

2.1 试验材料21-23

2.

1.1 试验原料及来源21-22

2.

1.2 试验试剂22-23

2.

1.3 试验仪器设备23

2.2 试验办法23-34

2.1 试验流程23-24

2.2 红三叶草异黄酮各组分的测定24-25

2.3 提取红三叶草总异黄酮的办法探讨25-28

2.4 大孔树脂对红三叶草异黄酮的初步纯化28-30

2.5 高效逆流色谱法分离红三叶草异黄酮单体30-32

2.6 抗氧化清除自由基测定32-34

3 结果讨论与分析34-57

3.1 原料分析34-44

3.

1.1 标准曲线的测定34-36

3.

1.2 加压溶剂法提取红三叶草总异黄酮的探讨36-40

3.

1.4 亚临界法提论文导读：

取红三叶草总异黄酮的探讨40-44

3.2 大孔吸附树脂纯化异黄酮44-49

3.

2.1 五种大孔树脂对异黄酮的吸附率与剖析率对比44-45

3.

2.2 静态吸附与剖析曲线45-46

3.

2.3 吸附和剖析条件选择46-49

3.3 高速逆流色谱法分离红三叶草异黄酮49-54

3.1 两相系统的确定49

3.2 HSCCC 单因素试验结果与分析49-51

3.3 高速逆流色谱分离红三叶草异黄酮单体51-52

3.4 高效液相色谱检测各组分极为纯度测定52-54

3.4 异黄酮类化合物抗氧化性能的测定54-57

3.4.1 清除超氧自由基54

3.4.2 清除羟自由基54-55

3.4.3 清除 DPPH 能力55-56

3.4.4 还原能力56-57

4 结论57-58

4.1 本探讨创新点57

4.2 本实验结论57-58

致谢58-59
参考文献59-64
攻读硕士期间发表学术论文64