猪链球菌对四环素耐药机制探讨及耐药基因三重PCR检测策略建立

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摘要：猪链球菌病是由多种不同群的链球菌引起的猪不同临床诊断类型传染病的总称。可致猪脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎、多发性浆膜炎和局部脓肿,同时该病还可导致生猪从业人员感染和死亡,是一种的人畜共患病。抗生素在国内外养猪业中的广泛应用,猪链球菌耐药性已严重,并呈现一定的区域特征论文怎么写。因此在具体治疗中,应了解当地菌株的耐药特点,选择敏感性药物治疗,才能取得良好的治疗效果。四环素作为治疗猪链球菌感染的主要药物,广泛用于畜牧养殖后,使得猪链球菌对其耐药性严重,因此,本试验对四环素耐药性及耐药基因的研究,力求在分子上为阐明猪链球菌对四环素的耐药机制依据。同时,对四环素耐药基因的三重PCR检测方法的建立,使猪链球菌对四环素耐药性的实验室检测可能毕业论文格式要求。本试验主要从以下几个了研究:1.检测我国不同地区猪链球菌对常用抗生素的整体耐药情况。药敏试验检测了1998年—2007年自我国不同地区分离鉴定的106株猪链球菌对10种临床常用抗生素头孢吡肟、头孢曲松、红霉素、克拉霉素、四环素、万古霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、氯霉素、克林霉素的耐药性情况。整体上看,所测菌株对四环素有的耐药性,耐药率达100 %;对于对头孢曲松、红霉素、克拉霉素、克林霉素有一定的耐药性,耐药率在15 %~20 %之间;对头孢吡肟、万古霉素和氯霉素仍保存良好的敏感性。多重耐药率为33 %,多重耐药现象主要以2耐为主(17株,16.1 %),主要耐药菌株及多重耐药的菌株出现在江苏、四川和重庆如何写论文。本试验为掌握我国大地区猪链球菌的耐药性情况及临床药物治疗了依据毕业论文理工。2.从分子上为研究猪链球菌对四环素的耐药机制依据标准论文格式范文。将耐药菌株对四环素的最低抑菌浓度测定,并对四环素耐药基因tet(M)、tet(O)、tet(K)、tet(L)、tet(Q)、tet(S)、tet(T)和tet(W)扩增和序列分析论文格式模板下载。试验结果,所测菌株99%以上均为四环素耐药菌株,我国大地区猪链球菌对四环素耐药现象严重;本试验检测的猪链球菌对四环素的耐药基因为tet(M)(80.2 %)、tet(O)(18.9 %)和tet(L)(14.2 %),我国的猪链球菌对四环素的耐药机制主要是由tet(M)基因介导的核糖体保护作用;同时本试验的检测结果,同为编码核糖体保护蛋白的tet(M)、tet(O)基因单独存在时,tet(M)基因的耐药高于tet(O)基因;本试验所检测的tet(M)、tet(O)基因与GenBank中我国不同地区的同种和不同种细菌的耐药基因具有的同源性(95 %~100 %,95 %~99 %),tet基因在猪源与人源及其它动物源不同种属细菌间存在广泛的交换,为猪链球菌对四环素耐药机制的研究奠定基础。3.成功建立了四环素常见耐药基因的三重PCR检测方法毕业论文范文格式。对临床所测四环素耐药基因tet(M)、tet(O)和tet(L)的序列分析比对,分别在其保守区设计3对特异性引物,建立并优化了三重PCR检测耐药基因的方法论文结论范文。应用该方法检测15株猪链球菌对四环素的耐药性,并与药敏试验结果比较,结果,该方法具有敏感、特异、性好等优点,与药敏结果率达到100 %,建立了实验室准确检测猪链球菌对四环素耐药性的方法本科生毕业论文。关键词：猪链球菌论文药敏试验论文最低抑菌浓度论文耐药基因论文三重PCR论文
缩略词4-8
中文摘要8-10
Abstract10-12
1 引言12-29

1.1 猪链球菌研究进展12-18

1.1 猪链球菌的血清型12

1.2 猪链球菌的毒力因子12

1.3 猪球菌流行病学特征12-18

1.2 兽医临床常用的四环素类18-20

1.2.1 土霉素（Oxytetracycpne）18-19

1.2.2 四环素（Tetracycpne）19-20

1.2.3 多西环素（Doxycycpne）20

1.3 猪链球菌的耐药现状20-21

1.4 猪链球菌对四环素类药物耐药现状21-23

1.4.1 国外猪链球菌对四环素类药物耐药现状21-22

1.4.2 国内猪链球菌对四环素类药物耐药现状22-23

1.5 猪链球菌对四环素类抗生素的耐药机制23-26

1.5.1 外排泵蛋白（Efflux protein）23-24

1.5.2 核糖体保护蛋白（Ribosomal protection proteins，RPPs）24-25

1.5.3 耐药基因的表达和调节25

1.5.4 tet 基因的分布及转移25-26

1.6 多重PCR 技术26-29

1.6.1 多重PCR 的技术要素26-27

1.6.2 多重PCR 技术的应用27-29

2 和方法29-39

2.1 猪链球菌耐药性的研究29-32

2.

1.1 29-31

2.

1.2 方法31-32

2.

1.2.1 细菌培养与菌液制备31

2.

1.2.2 药敏试验31-32

2.2 猪链球菌对四环素耐药机制的研究32-35

2.1 32-33

2.2 方法33-35

2.1 最低抑菌浓度(MIC)的测定33-34

2.2 四环素耐药基因的检测34

2.3 PCR 产物的纯化回收34

2.4 耐药基因的克隆、酶切鉴定34

2.5 耐药基因的测序及序列分析34-35

2.3 四环素耐药基因tet (M)、tet(O)、tet(L)三重PCR 检测方法的建立35-39

2.3.1 35-36

2.3.2 方法36-39

2.3.1 引物设计36

2.3.2 模板的制备36

2.3.3 单项PCR 扩增条件的优化36-37

2.3.4 测序分析37

2.3.5 三重PCR 扩增条件的优化37-38

2.3.6 特异性试验38

2.3.7 敏感性试验38

2.3.8 三重PCR 方法与药敏试验率检测38-39

3 结果与分析39-48

3.1 猪链球菌耐药性的研究39-41

3.

1.1 耐药率检测结果39

3.1.2 耐药率与地论文片段—.2.2最佳引物浓度44-453.3.2.3最佳dNTP浓度45-463.3.3三重PCR检测的特异性463.3.4三重PCR检测的敏感性46-473.3.5三重PCR方法与药敏试验率检测结果47-484讨论48-5252-53参考文献53-61致谢61-62论文发表情况62-63硕士学位论文内容简介及自评63上一页12猪链球菌论文,药敏试验论文,最低抑菌浓度论文,耐药基因论文,三重PCR论文,
区统计结果39-40
3.

1.3 多重耐药检测结果40-41

3.2 猪链球菌对四环素耐药机制的研究41-43
3.

2.1 最低抑菌浓度（MIC）结果41

3.

2.2 耐药基因检测结果41

3.

2.3 耐药性和耐药基因的关系41-42

3.

2.4 耐药基因序列比对和同源性分析结果42-43

3.

2.4.1 tet(M)基因序列比对结果42-43

3.

2.4.2 tet(O)基因序列比对结果43

3.3 四环素耐药基因tet (M)、tet(O)、tet(L)三重PCR 检测方法的建立43-48

3.1 单项PCR 方法的建立和产物序列分析43-44

3.3.

1.1 单项PCR 方法的建立43-44

3.3.

1.2 扩增产物序列分析44

3.3.2 三重PCR 扩增条件的确立44-46
3.3.

2.1 最佳退火温度44

3.3.

2.2 最佳引物浓度44-45

3.3.

2.3 最佳dNTP 浓度45-46

3.3.3 三重PCR 检测的特异性46

3.4 三重PCR 检测的敏感性46-47

3.5 三重PCR 方法与药敏试验率检测结果47-48

4 讨论48-52
52-53
参考文献53-61
致谢61-62
论文发表情况62-63
硕士学位论文内容简介及自评63