鸡白细胞介素6单克隆抗体研制与鉴定

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摘要：鸡白细胞介素-6 (chIL-6)是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子,是免疫学研究的热点之一。,chIL-6的生物学检测主要依赖于淋巴细胞增殖试验或细胞因子依赖性细胞增殖试验,,这些试验费时、费力、敏感性低,受因素如培养物、抑制因子以及其它生长因子的影响。因此,迫切一种简单、、敏感的chIL-6检测方法本科毕业论文。本研究chIL-6真核表达质粒作为免疫原,原核表达产物作为筛选抗原,研制出抗chIL-6的单克隆抗体,为建立一种快捷检测chIL-6的方法奠定基础。将含chIL-6基因的质粒(云水丽构建)克隆至真核高效表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA-IL-6重组表达质粒,经双酶切鉴定重组质粒构建正确,用脂质体法将重组质粒转染COS-1细胞,细胞上清,利用白介素-6生长依赖细胞株7TD1检测,结果细胞上清可促进7TD1细胞的生长,证明pcDNA-IL-6在COS-1细胞中能产生具有生物活性的chIL-6。将chIL-6 cDNA分段克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-IL6-1和pET-IL6-2,重组质粒可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE检测,两种表达蛋白以上清的形式存在。以鼠抗chIL-6多抗血清Western-blot试验,证明两种蛋白均具有良好的抗原性。将诱导后的工程菌超声波裂解,离心后取上清,带HIS标签的蛋白纯化柱子纯化,了浓度分别为1.8mg/mL和1.0mg/m L的纯化蛋白论文致谢怎么写。以重组表达质粒pcDNA-IL-6作为免疫原,免疫8周龄的BALB/c小鼠,每只每次肌肉注射100μg,每隔2星期免疫1次,免疫5次后,取小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0-AG-14融合论文网。以chIL-6原核表达纯化蛋白作为筛选的抗原,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤筛选论文大全。经亚克隆后共3株鸡IL-6特异性单抗,分别命名为11E8、15B6和18H9,11E8、15B6两株单抗均属于lgG亚类,18H9单抗属于IgM亚类;腹水的间接ELISA效价分别为:10×214、10×215和10×211。三株单抗以间接免疫荧光法检测pcDNA-IL-6转染COS-1细胞,均产生特异性绿色荧光,其中15B6荧光强度最强文学论文。本研究成功构建了表达chIL-6的真核重组质粒和原核重组质粒,并真核表达质粒免疫,原核表达产物筛选的方式了3株chIL-6的单抗,为研究chIL-6的生物学特性及其功能奠定了基础。关键词：鸡白介素-6论文真核表达论文原核表达论文单克隆抗体论文研制论文
中文摘要4-6
英文摘要6-10
符号10-11
章 白介素-6 研究进展11-22
1 IL-6 的研究背景11-13
2 IL-6 的功能13-17
3 IL-6 的应用前景17-20
4 IL-6 的生物活性检测20
5 IL-6 新型细胞因子重组基因工程疫苗20-22
章 鸡白细胞介素-6 真核表达载体的构建及鉴定22-29
1 22-23
2 方法23-25
3 结果25-28
4 讨论28-29
章 鸡白细胞介素-6 原核表达载体的构建及鉴定29-40
1 29-30
2 方法30-34
3 结果34-38
4 讨论38-40
章 鸡白细胞介素-6 单克隆抗体的研制与鉴定40-49
1 40-41
2 方法41-44
3 结果44-47
4 讨论47-49
参考文献49-56
致谢56