简谈片状固定床式生物反应器培养TALL-104细胞及其细胞抗肿瘤活性

论文导读：无显著性差别；5.TALL-104细胞对于多种肿瘤细胞具有杀伤作用，且其细胞毒性与平板培养得到的并无显著性差别。结论:1.利用片状载体模拟固定床转瓶培养TALL-104细胞可以获得较大规模的细胞量；2.片状载体培养TALL-104细胞与平皿培养的TALL-104细胞其细胞毒性无显著性差别。关键词：TALL-104论文片状载体论文
摘要：目的:随着世界人口日趋老龄化，癌症正在成为引起人类非正常死亡的最重要理由，目前每年在全球有大约700万人死于各种癌症。癌症的发生理由非常的宽泛，除去病毒、细菌、物理、化学和遗传等因素外，自身机体免疫监视功能的降低也已经被认为是一种致病理由。在正常人体内，也会有细胞因为各种理由发生癌变，这时，人体免疫系统会将其在最初阶段发现并杀死。而免疫系统功能低下的机体，癌变的细胞则可能逃脱监视，以而引发疾病。对于癌症的治疗，一直是探讨的热点，通常的治疗策略有放疗、化疗和手术外科治疗等。细胞治疗作为一种生物治疗的策略，早在20实际70年代便盛行一时，但是由于细胞治疗有着着各种各样的技术难题和临床毒副作用，导致细胞治疗在临床运用上在40年间并没有长足的进步。本实验的探讨对象是一种CD8+的非MHC限制性细胞毒性T细胞，是Daniela Santop上个世纪90年代在探讨中发现的，该细胞是小儿急性淋巴癌细胞中筛选出的一个白介素-2依赖性细胞株，在白介素-2的刺激下可以在体外无线增殖，并分泌细胞因子，在白介素-2缺失的情况下增殖缓慢，但能够继续分泌细胞因子达到8h。该细胞与化学药物甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate)目前正在欧洲进行治疗慢性粒细胞白血病(Chronic Myelogenous Leukemia，CML)的二期临床探讨，也证明了该细胞具有作为一个异体治疗的细胞药物的潜在价值，由于在治疗历程中，该细胞的消耗量巨大，所以面对着体外扩增的难题。本实验探讨利用片状载体模拟固定床式生物反应器进行培养、收获的TALL-104细胞的工艺，浅析该工艺下与普通的平板培养的TALL-104细胞的细胞毒性的差别。策略：1.该细胞为半贴壁细胞，首先通过培养悬浮状态下的TALL-104细胞，测定不同浓度白介素-2对于悬浮状态的TALL-104细胞的刺激作用；2.细胞收获时的胰酶浓度，利用浓度为0、0.015%、0.06%、0.25%的EDTA-胰酶消化不同时间(10s、30s)，细胞计数，然后得出收获细胞的比例；3.利用片状载体模拟固定床反应器在转瓶中培养TALL-104细胞，接种量为2×105cells/mL，转速为50rpm，每天添加白介素-2至终浓度为100IU/mL。每天取样，测定pH，根据pH的变化情况，确定换液的频率，最后收获细胞后测定细胞量，并利用培养期间的葡萄糖含量换算出细胞浓度，做出生长曲线以及乳酸代谢曲线；4.通过监测葡萄糖浓度实时监控细胞浓度，并且利用MTT对收获的细胞进行细胞毒性测定。结果：1. TALL-104细胞增殖需要贴壁生长，白介素-2浓度为100IU/mL；2.利用0.25%EDTA-胰酶30s可以消化得到目的细胞67%，由于胰酶对于细胞表面的蛋白有损伤，所以尽可能的利用较短时间；3.利用固定床(片状载体)培养TALL-104细胞可以获得较大规模的细胞量，TALL-104细胞扩增23倍，细胞浓度达到了4.6×106cells/mL；4利用固定床(片状载体)培养的TALL-104细胞与平皿培养的TALL-104细胞其细胞毒性无显著性差别；5. TALL-104细胞对于多种肿瘤细胞具有杀伤作用，且其细胞毒性与平板培养得到的并无显著性差别。结论:1.利用片状载体模拟固定床转瓶培养TALL-104细胞可以获得较大规模的细胞量；2.片状载体培养TALL-104细胞与平皿培养的TALL-104细胞其细胞毒性无显著性差别。关键词：TALL-104论文片状载体论文固定床论文细胞毒性论文
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Abstract8-10
目录10-12
第一章 绪论12-23

1.1 癌症介绍12

1.2 治疗癌症的策略12-13

1.3 细胞治疗13-18

1.3.1 L 细胞治疗14

1.3.2 TIL 细胞治疗14-15

1.3.3 CIK 细胞治疗15-16

1.3.4 DC-CIK 细胞治疗16-17

1.3.5 自体治疗与异体治疗17-18

1.4 TALL-104 细胞治疗18

1.5 非纺型 PET 载体18-19

1.6 固定床式生物反应器论文导读：.7TALL-104细胞固定床式生物反应器培养历程中pH的检测272.2.8TALL-104细胞固定床式生物反应器培养历程中乳酸浓度测定272.2.9TALL-104细胞固定床式生物反应器培养历程中葡萄糖浓度测定27-282.2.10TALL-104细胞固定床式生物反应器培养历程中细胞浓度计算282.2.11不同培养方式下TALL-104细胞细胞毒性的比较28-29第
19-20

1.7 课题作用及探讨内容20-21

1.8 实验案例设计21-23

第二章 材料与策略23-29

2.1 实验材料、仪器与试剂23-25

2.

1.1 实验材料23

2.

1.2 实验试剂23-24

2.

1.3 实验仪器24-25

2.2 实验策略25-29

2.1 DMEM 培养液的配制25

2.2 TALL-104 细胞培养及传代25

2.3 TALL-104 细胞悬浮培养25-26

2.4 悬浮型 TALL-104 细胞培养中 rhIL-2 浓度的确定26

2.5 TALL-104 细胞贴壁能力测定26

2.6 TALL-104 细胞固定床式生物反应器接种26-27

2.7 TALL-104 细胞固定床式生物反应器培养历程中 pH 的检测27

2.8 TALL-104 细胞固定床式生物反应器培养历程中乳酸浓度测定27

2.9 TALL-104 细胞固定床式生物反应器培养历程中葡萄糖浓度测定27-28

2.10 TALL-104 细胞固定床式生物反应器培养历程中细胞浓度计算28

2.11 不同培养方式下 TALL-104 细胞细胞毒性的比较28-29

第三章 实验结果与讨论29-37

3.1 TALL-104 细胞悬浮培养29

3.2 悬浮型 TALL-104 细胞培养条件的确定29-30

3.3 TALL-104 细胞贴壁能力测定30-31

3.4 TALL-104 细胞固定床式生物反应器培养历程中乳酸浓度测定31-32

3.5 TALL-104 细胞固定床式生物反应器培养历程中葡萄糖浓度的测定32-34

3.6 TALL-104 细胞平皿培养与固定床片状载体培养的比较34-35

3.7 TALL-104 细胞毒性实验35-37

第四章 实验结论与展望37-41

4.1 免疫细胞治疗可行性37

4.2 TALL-104 细胞作为药物的认可度37-38

4.3 大规模生产细胞成为走势38-39

4.4 TALL-104 细胞大规模培养39-41

参考文献41-45
附录 1 符号说明45-47
附录 2 溶液配制47-50
附录 3 文章50-53
致谢53-54
硕士期间发表或接受录用论文及专利54