微核及微核细胞命运探讨

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摘要：微核产生与细胞中的DNA损伤密切本科毕业论文答辩。辐射引起细胞产生微核是一个的现象。在肿瘤放疗中，微核产生与肿瘤的辐射敏感性，因此微核率可用于评价放疗预后。尽管如此，应用传统的细胞遗传学技术对微核细胞命运做深入研究，因此微核作为评价细胞辐射敏感性的依据尚不清楚。本研究中以鼻咽癌细胞为模型，选用对辐射不敏感的CNE1细胞和对辐射敏感的CNE2细胞，考察X射线辐射引起的微核细胞的命运。这两种细胞具有良好的形态及较慢的运动速度，因此于活细胞摄影追踪论文模板。为在活细胞中研究微核，稳定转染用红色荧光蛋白(mCherry)标记组蛋白H2B。长时间活细胞实时摄影X射线诱导的微核细胞的。分析活细胞实时摄影在微核细胞中有如下发现大学毕业论文格式。，在X射线照射后对辐射敏感的细胞相对于对辐射不敏感的细胞会产生更多微核。同时，含有微核的细胞比不含有微核的细胞更容易发生细胞周期停滞和细胞死亡，并且细胞中所含有的微核越多，引起细胞周期停滞和细胞死亡的效应就越强烈。当微核细胞分裂时通常会以染色体（而非染色体桥）的方式将微核传给子细胞政治论文。用人泛着丝粒探针荧光原位杂交大约70%的由辐射引起的染色体及微核中均不含丝粒信号。，磷酸化H2AX和磷酸化p38荧光免疫染色发现微核细胞相对于不含微核的细胞含有更多的DNA损伤和更强的应激激酶通路的活化。综上，的发现微核的产生与DNA损伤，并影响细胞命运。揭示了微核细胞增殖能力减弱的原因毕业设计论文模板。为将微核发生作为细胞辐射敏感性的指标了判断依据和理论基础。细胞含有异常数目的染色体称为非整倍体毕业设计论文网。非整倍体是引起人类自发流产和智力发育障碍的原因，同时也是肿瘤细胞的主要特性之一毕业论文格式。在有丝分裂中微管与着丝粒形成的错误连接，尤其是merotepc连接（单个着丝粒被来自两极的微管连接）导致分裂后期形成的染色体与形成非整倍体子细胞密切论文大全。同时，染色体可能形成微核而导致遗传物质丢失进而导致非整倍体形成论文的格式。，染色体对非整倍体产生的贡献尚存在争议。对染色体及微核命运的推测大多基于对固定细胞的研究，染色体及微核在活细胞中的如何尚不清楚学年论文范文。为了避免使用固定细胞带来的不便，早期曾使用荧光蛋白标记染色体，在活细胞中初步研究了染色体、微核的形成及其存在对细胞命运的影响（如在中所讨论的）。但是，用荧光蛋白标记染色体并不能在活细胞摄影时明确的追踪染色体及微核的命运。为解答这一问题寻找新的实验方案。在本研究中，使用结肠直肠癌细胞HCT116作为研究染色体及微核的细胞职称论文范文。稳定表达红色荧光蛋白(mCherry)偶联的组蛋白H2B，标记的染色体。在这些细胞中转染GFP偶联的大肠杆菌乳糖操纵子调控基因(LacRepressor, LacI)和大肠杆菌乳糖操纵子顺式作用元件(LacOperator, LacO)文化论文。GFP-LacRepressor会在整合于单条染色体上的LacOperator序列，该染色体便被GFP特异标记论文 格式。可在活细胞中追踪这条被GFP特异标记的染色体论文。借助活细胞实时摄影追踪被GFP标记的由merotepc连接导致的染色体的命运。发现绝大多是染色体运动到正确的子细胞中并形成微核。这些在正确子细胞中的微核并不影响细胞的增殖。当这些微核细胞分裂时几乎微核中的遗传物质均能正常的凝集、正确的聚集在赤道板上，进而像主核中的染色体一样分离、分配至两个子细胞中，形成两个不带微核的子细胞毕业生论文网。的研究绝大多数染色体并不能导致非整倍体产生，并揭示了微核形成并不一定代表遗传物质丢失。关键词：放疗论文辐射敏感性论文微核论文细胞命运论文活细胞实时摄影论文非整倍体论文染色体论文微核论文细胞命运论文
X 射线诱导鼻咽癌细胞微核产生对细胞命运的影响8-49
摘要8-9
ABSTRACT9-11
第1章 绪论11-33

1.1 微核的概述11-12

1.1 微核的及研究历史11

1.2 微核的种类和起源11-12

1.2 微核的性质12-20

1.2.1 微核中 DNA 的复制12-13

1.2.2 微核中 DNA 的转录13-16

1.2.3 微核中 DNA 的损伤修复16-20

1.3 微核的应用20-25

1.3.1 胞质分裂阻滞微核实验（CBMN）概述20-21

1.3.2 CBMN 实验检测辐射敏感性21-23

1.3.3 CBMN 实验与癌症风险评估23-24

1.3.4 微核实验在其他领域的应用24-25

1.4 应用活细胞实时摄影技术研究微核的起源25-31

1.5 鼻咽癌31-33

1.5.1 鼻咽癌的概述31

1.5.2 鼻咽癌的辐射治疗31-33

第2章 和方法33-37

2.1 实验33

2.

1.1 试剂33

2.

1.2 细胞系33

2.2 实验方法33-37

2.1 建立稳定表达 H2B-mCherry 融合基因的细胞系33-34

2.2 细胞辐射34

2.3 活细胞实时摄影34

2.4 活细胞实时摄影分析标准34

2.5 荧光原位杂交(FISH)34-35

2.6 荧光免疫染色和荧光定量分析35-36

2.7 统计分析36-37

第3章 研究结果和讨论37-49

3.1 背景介绍37-38

3.2 实验结果38-46

3.

2.1 转染 H2B-mCherry 对微核率的影响38

3.

2.2 X 射线辐射引起 CNE2 细胞产生更多微核38-40

3.

2.3 微核产生对细胞命运的影响40-42

3.

2.4 微核细胞分裂时染色体导致产生含微核的子细胞42-44

3.

2.5 微核细胞中 DNA 损伤修复通路的激活44-46

3.3 结果讨论46-48

3.4 小结48-49

后期染色体及微核命运的研究49-79
摘要49-50
ABSTRACT50-52
第1章 绪论52-61

1.1 非整倍体52-58

1.1 非整倍体概述52

1.2 染色体错误分离引起非整倍体52-54

1.3 Merotepc 连接引起染色体分离异常54-55

1.1.4论文片段—放疗论文,辐射敏感性论文,微核论文,细胞命运论文,活细胞实时摄影论文,非整倍体论文,落后染色体论文,微核论文,细胞命运论文,
黏合蛋白突变引起非整倍体55-56

1.5 引起非整倍体的其他机制56

1.6 非整倍体细胞的命运56-58

1.2 微核及微核细胞的命运58-61

1.2.1 微核细胞的命运58

1.2.2 微核的命运58-61

第2章 和方法61-65

2.1 实验61

2.

1.1 试剂61

2.

1.2 细胞系61

2.2 实验方法61-65

2.1 建立 GFP 标记单条染色体的细胞系61-62

2.2 鉴定 GFP 标记的染色体62-63

2.3 Nocodazole 处理细胞63

2.4 CREST 和 α-tubupn 荧光免疫染色63

2.5 共聚焦显微成像63-64

2.6 活细胞实时摄影64-65

第3章 研究结果和讨论65-79

3.1 背景介绍65

3.2 实验结果与讨论65-78

3.

2.1 染色体单标细胞系的建立及实验体系的验证65-68

3.

2.2 Nocodazole 处理引起染色单体68-69

3.2.3 Merotepc 连接是 nocodazole 引起染色体的主要原因69-70
3.

2.4 后期染色体的命运70-71

3.

2.5 微核细胞的命运71-75

3.

2.6 微核的命运75-78

3.3 小结78-79
参考文献79-98
附录98-102
致谢102-104