阐释活性氧非诺贝特降低ROS在高糖模拟糖尿病视网膜病变中作用机制要求

论文导读：摘要3-4ABSTRACT4-9第1章前言9-12第2章材料和策略12-232.1材料12-162.1.1细胞培养122.1.2抗体122.1.3蛋白免疫印迹12-132.1.4活性氧自由基的检测132.1.5实时定量RT-PCR132.1.6溶液配制13-152.1.7实验仪器15-162.2实验策略16-222.2.1细胞培养16-172.2.2Westernblotting检测17-192.2.3细胞内ROS产生的
摘要：目的：糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病重要的并发症之一，也是致盲的主要理由之一。以往的探讨发现非诺贝特（Feno）在治疗糖尿病并发症的发生进展中发挥着重要的作用，然而其详细机制尚未完全清楚，本探讨主要探讨非诺贝特降低活性氧自由基（ROS）在高糖体外模拟的糖尿病视网膜病变中的作用机制。策略：采取人视网膜色素上皮细胞系（ARPE19细胞）作为探讨对象，30mMD-glucose预处理ARPE19细胞48小时，接着给予不同浓度的非诺贝特处理ARPE19细胞16小时，5mM D-glucose加25mM L-glucose作为渗透压对照组。采取ROS敏感荧光探针CM-H2DCFDA检测ROS的产生；采取Western blot技术检测NADPH氧化酶4（Nox4），NADPH氧化酶2（Nox2），磷酸化低密度脂蛋白受体蛋白6（pLRP6）以及总的LRP6蛋白的表达情况；采取实时荧光定量PCR技术检测Nox4，Nox2在mRNA水平上的表达情况。结果：ROS分子探针检测提示高糖显著增加了ROS的产生，非诺贝特可以显著降低ROS的产生，并且出现剂量依赖。在蛋白表达水平上观察发现高糖显著升高ARPE19细胞中Nox4和Nox2的表达，非诺贝特处理后，显著逆转高糖的作用，降低Nox4和Nox2的表达；而在mRNA水平上也观察到高糖显著升高Nox4和Nox2的表达，同样也被非诺贝特显著减低。此外高糖显著增加pLRP6蛋白的表达，激活Wnt信号通路，非诺贝特处理后显著降低pLRP6，抑制Wnt信号通路。结论：非诺贝特通过降低高糖升高的NADPH氧化酶,进而降低ROS的产生，抑制Wnt信号通路，延缓糖尿病视网膜病变发生进展。关键词：非诺贝特论文活性氧自由基论文氧化应激论文Wnt信号通路论文糖尿病视网膜病变论文
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ABSTRACT4-9
第1章 前言9-12
第2章 材料和策略12-23

2.1 材料12-16

2.

1.1 细胞培养12

2.

1.2 抗体12

2.

1.3 蛋白免疫印迹12-13

2.

1.4 活性氧自由基的检测13

2.

1.5 实时定量 RT-PCR13

2.

1.6 溶液配制13-15

2.

1.7 实验仪器15-16

2.2 实验策略16-22

2.1 细胞培养16-17

2.2 Western blotting 检测17-19

2.3 细胞内 ROS 产生的检测19-20

2.4 实时定量 RT-PCR 检测20-22

2.3 统计学浅析22-23

第3章 结果23-27

3.1 非诺贝特降低高糖诱导 ARPE19 细胞 ROS 的产生23-24

3.2 非诺贝特降低高糖引起 ARPE19 细胞 Nox4 和 Nox2 蛋白水平的表达24-25
3.3 非诺贝特降低高糖诱导 ARPE19 细胞 Nox4 和 Nox2 在 mRNA 水平的表达25
3.4 非诺贝特抑制高糖诱导 ARPE19 细胞的 Wnt 信号通路的激活25-27
第4章 讨论27-31
第5章 结论31-32
致谢32-33
参考文献33-36
攻读学位期间的探讨成果36-37
综述37-44
参考文献41-44