试谈基因治疗MicroRNA-494过表达与RNA干扰抑制survivin基因对前列腺癌移植瘤生长影响
最后更新时间：2024-02-06
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论文导读：-494与Ad-survivinshRNA腺病毒载体的扩增、效价测定及感染效率测定14-211材料和策略14-162结果16-183讨论18-20参考文献20-21第二部分Ad-pre-microRNA-494与Ad-survivinshRNA抑制survivin基因表达对PC-3细胞裸鼠移植瘤生长及凋亡相关基因表达的影响21-401材料与策略22-272实验结果27-333讨论33-36参考文献36-40结论
摘要：目的：采取过表达microRNA-494腺病毒载体(Ad-pre-microRNA-494)与负载survivin shRNA腺病毒载体(Ad-survivin shRNA)抑制人前列腺癌PC-3细胞中survivin基因的表达,探讨其对裸鼠前列腺癌移植瘤生长影响。策略：采取本课题小组前期已成功构建并被证实可过表达microRNA-494的腺病毒载体Ad-pre-microRNA-494(简称Ad-494)及负载survivin shRNA腺病毒载体Ad-survivin shRNA(简称Ad-sur)分别感染HEK-293T细胞,并用该细胞进行病毒纯化、效价测定及感染效率测定。PC-3细胞进行相应分组转染处理后,进行裸鼠皮下移植,每只裸鼠接种细胞数量约为1×107,裸鼠分组如下：PBS组、Ad-GFP组(空载体组)、Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组,每组5只。建立移植瘤模型,动态测量肿瘤体积及其生长变化的时间曲线。55天后处死各组裸鼠,瘤体称重、计算瘤重抑瘤率；瘤块HE染色法观察肿瘤细胞形态；Western blot检测移植瘤肿瘤中survivin基因的表达变化情况；免疫组化测定survivin蛋白及Caspase-3等凋亡相关因子的表达变化情况。结果：体外获得高纯度、高表达的各组腺病毒,其效价可达109pfu/ml,以50MOI作为腺病毒感染PC-3细胞的最佳感染剂量；裸鼠皮下移植瘤实验结果显示：Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组前列腺癌裸鼠移植瘤的生长显著被抑制,并且Ad-sur+Ad-494组效果较Ad-sur组、Ad-494组更为显著(P0.05),具有抑瘤增效的相加作用(Q=0.99)。免疫组化、Western blot,检测各组survivin基因的表达结果显不：Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组的survivin基因表达下降,与PBS组、Ad-GFP组相比具有统计学差别,而Ad-494、Ad-sur组间无显著差别,Ad-sur+Ad-494组较Ad-494、Ad-sur更为显著；免疫组化检测凋亡相关因子结果显示：Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组的Bax、p53、Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,且Ad-sur+Ad-494组效果优于Ad-sur组、Ad-494组。结论：过表达microRNA-494腺病毒载体nicroRNA-494与负载survivin shRNA腺病毒载体Ad-survivin shRNA均能有效地抑制survivin基因表达、抑制裸鼠前列腺移植瘤的生长,且二者联合效果更加显著,提示多靶点抑制单基因更有效,这可能成为晚期前列腺癌基因治疗的新的策略；microRNA-494下调survivin基因、抑制裸鼠前列腺移植瘤的生长可能与Bax、p53、Caspase-3的上调及Bcl-2下调有关。关键词：microRNA-494论文survivin论文基因治疗论文腺病毒论文前列腺癌论文RNA干扰论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。中文摘要4-6
Abstract6-9
引言9-14
参考文献11-14
第一部分 Ad-pre-microRNA-494与Ad-survivin shRNA腺病毒载体的扩增、效价测定及感染效率测定14-21
1 材料和策略14-16
2 结果16-18
3 讨论18-20
参考文献20-21
第二部分 Ad-pre-microRNA-494与Ad-survivin shRNA抑制survivin基因表达对PC-3 细胞裸鼠移植瘤生长及凋亡相关基因表达的影响21-40
1 材料与策略22-27
2 实验结果27-33
3 讨论33-36
参考文献36-40
结论40-41
综述41-52
参考文献49-52
中英文缩略词表52-53
攻读学位期间公开发表的文章53-54
致谢54
摘要：目的：采取过表达microRNA-494腺病毒载体(Ad-pre-microRNA-494)与负载survivin shRNA腺病毒载体(Ad-survivin shRNA)抑制人前列腺癌PC-3细胞中survivin基因的表达,探讨其对裸鼠前列腺癌移植瘤生长影响。策略：采取本课题小组前期已成功构建并被证实可过表达microRNA-494的腺病毒载体Ad-pre-microRNA-494(简称Ad-494)及负载survivin shRNA腺病毒载体Ad-survivin shRNA(简称Ad-sur)分别感染HEK-293T细胞,并用该细胞进行病毒纯化、效价测定及感染效率测定。PC-3细胞进行相应分组转染处理后,进行裸鼠皮下移植,每只裸鼠接种细胞数量约为1×107,裸鼠分组如下：PBS组、Ad-GFP组(空载体组)、Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组,每组5只。建立移植瘤模型,动态测量肿瘤体积及其生长变化的时间曲线。55天后处死各组裸鼠,瘤体称重、计算瘤重抑瘤率；瘤块HE染色法观察肿瘤细胞形态；Western blot检测移植瘤肿瘤中survivin基因的表达变化情况；免疫组化测定survivin蛋白及Caspase-3等凋亡相关因子的表达变化情况。结果：体外获得高纯度、高表达的各组腺病毒,其效价可达109pfu/ml,以50MOI作为腺病毒感染PC-3细胞的最佳感染剂量；裸鼠皮下移植瘤实验结果显示：Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组前列腺癌裸鼠移植瘤的生长显著被抑制,并且Ad-sur+Ad-494组效果较Ad-sur组、Ad-494组更为显著(P0.05),具有抑瘤增效的相加作用(Q=0.99)。免疫组化、Western blot,检测各组survivin基因的表达结果显不：Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组的survivin基因表达下降,与PBS组、Ad-GFP组相比具有统计学差别,而Ad-494、Ad-sur组间无显著差别,Ad-sur+Ad-494组较Ad-494、Ad-sur更为显著；免疫组化检测凋亡相关因子结果显示：Ad-sur组、Ad-494组、Ad-sur+Ad-494组的Bax、p53、Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,且Ad-sur+Ad-494组效果优于Ad-sur组、Ad-494组。结论：过表达microRNA-494腺病毒载体nicroRNA-494与负载survivin shRNA腺病毒载体Ad-survivin shRNA均能有效地抑制survivin基因表达、抑制裸鼠前列腺移植瘤的生长,且二者联合效果更加显著,提示多靶点抑制单基因更有效,这可能成为晚期前列腺癌基因治疗的新的策略；microRNA-494下调survivin基因、抑制裸鼠前列腺移植瘤的生长可能与Bax、p53、Caspase-3的上调及Bcl-2下调有关。关键词：microRNA-494论文survivin论文基因治疗论文腺病毒论文前列腺癌论文RNA干扰论文
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Abstract6-9
引言9-14
参考文献11-14
第一部分 Ad-pre-microRNA-494与Ad-survivin shRNA腺病毒载体的扩增、效价测定及感染效率测定14-21
1 材料和策略14-16
2 结果16-18
3 讨论18-20
参考文献20-21
第二部分 Ad-pre-microRNA-494与Ad-survivin shRNA抑制survivin基因表达对PC-3 细胞裸鼠移植瘤生长及凋亡相关基因表达的影响21-40
1 材料与策略22-27
2 实验结果27-33
3 讨论33-36
参考文献36-40
结论40-41
综述41-52
参考文献49-52
中英文缩略词表52-53
攻读学位期间公开发表的文章53-54
致谢54