简论分类学具抑菌活性放线菌JMC06001鉴定和次生代谢产物初步

论文导读：
摘要：以海洋微生物中提取药物及其先导化合物是目前世界新药研发的前沿领域之一。本课题组以中国南海硇洲岛高盐环境中分离到一株放线菌JMC06001,初步探讨表明,该菌株的发酵液具有较强的抗菌活性。本探讨对该菌进行分类学鉴定,用八种抑菌指示菌对发酵液和菌丝体抽提物进行抗菌活性筛选,用响应面法对发酵培养基进行优化,并对该菌的次生代谢产物进行了初步分离纯化和理化稳定性探讨。探讨表明,菌株JMC06001在多数培养基上生长良好,气生菌丝白色,基内菌丝淡至浅棕色。在燕麦琼脂(ISP3)、甘油-天门冬酰胺琼脂(ISP5)、葡萄糖-天门冬酰胺琼脂(glucose/asparagines agar)及马铃薯浸汁琼脂(potato extract agar)上产生可溶性色素,在酵母膏-麦芽膏琼脂(ISP2)、蛋白胨酵母膏铁盐琼脂(ISP6)和营养琼脂上产生棕色可溶性色素。生长温度范围为4℃-40℃,最适生长温度28℃。生长pH范围为6.0-9.0,最适pH7.0。能在含0～1.5mol/L NaCl的培养基上生长,最适生长盐浓度为0.2～0.5mol/L NaCl。根据其形态学特点、生理生化特点、细胞化学分类特点和基于16S rRNA基因序列的系统发育浅析结果,菌株JMC06001被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)的有效发表种波赛链霉菌(Speucetius)的一个菌株(S. peucetius JMC06001)。利用了藤黄八叠球菌(Sarcina lutea CGMCC1.880)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtips ATCC6051).大肠杆菌(Escherichia cop ATCC128)、黑曲霉(Asperillus niger NCPC1003).产气肠杆菌(Enterobacter aero genes ATCC8724)。变形杆菌(Proteus vulgar is ATCC8427)、白色念珠菌(Candida albicans NCPC1027)、青霉(Penicilpum. sp. ATCC12556)、铜绿假单胞菌(P. aeruginosa ATCC27853)9种指示菌,采取杯碟法,探讨了S. peucetius JMC06001菌株的发酵液和菌丝体中活性物质的抑菌谱,并对由该菌产生的抑菌物质对温度、酸碱度、抗紫外线的稳定性进行论文导读：工艺参数。采取响应面优化了S.peucetiusJMC06001发酵培养基,得出该培养基的最佳组合为：葡萄糖12g,麦芽糖7g,蛋白胨9g,大豆粉14g,NaC137g,CaCO31g,复合盐A液20mL,复合盐B液1mL,起始pH值7.0。在优化后的培养基中,对藤黄八叠球菌的抑菌圈直径为31.50mm,实际与预测值的相对偏差仅为1.71%,比基础培养基对藤黄八叠球菌的抑菌圈
了考察。结果表明,该菌对指示菌株中部分革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌有显著的抑制作用。稳定性试验结果显示,该菌产生的抑菌活性物质的最适温度为40℃,最佳pH值在7.0左右,具有较好的热稳定性和较宽的酸碱耐受范围,抗紫外线辐射能力强。本探讨还对S. peucetius JMC06001发酵液中次生代谢产物进行了初步的分离纯化探讨,通过薄层指导跟踪和抑菌活性跟踪对发酵液的乙酸乙酯萃取物浸膏进行了分离和纯化。经柱层析收集了386份馏分,通过薄层层析跟踪和抑菌活性跟踪,合并相同斑点且具有抑菌活性的馏分,得到了9个主要的组分,分别命名为JMH01～JMH09,组分中主要代谢产物的纯度经高效液相色谱仪进行了初步的检测,可为该菌的产业化运用提供可靠的工艺参数。采取响应面优化了S. peucetius JMC06001发酵培养基,得出该培养基的最佳组合为：葡萄糖12g,麦芽糖7g,蛋白胨9g,大豆粉14g, NaC137g, CaCO31g,复合盐A液20mL,复合盐B液1mL,起始pH值7.0。在优化后的培养基中,对藤黄八叠球菌的抑菌圈直径为31.50mm,实际与预测值的相对偏差仅为1.71%,比基础培养基对藤黄八叠球菌的抑菌圈直径26.52mm提升了18.8%。关键词：分类学鉴定论文波赛链霉菌论文抑菌谱论文响应面优化论文次生代谢产物论文
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ABSTRACT11-13
第1章 波赛链霉菌次生代谢产物探讨进展13-22

1.1 S. peucetius合成的蒽环类抗生素13-15

1.1 柔红霉素13-14

1.2 阿霉素14

1.3 表柔红霉素和表阿霉素14

1.4 洋红霉素14

1.5 13-脱氧洋红霉素14-15

1.2 S. peucetius产葸环类抗生素的合成途径15

1.3 途径工程在S. peucetius合成葸环类抗生素中的运用15-16

1.4 S. peucetius生物活性酶与其调控的产物16-19

1.4.1 聚酮合酶16

1.4.2 细胞色素P450酶16-17

1.4.3 洋红霉素4-O-转移酶17

1.4.4 Germacradien论文导读：27-282.2.2生理生化特点282.2.3细胞壁化学组分浅析282.2.4基于16SrRNA基因序列的系统发育浅析28-302.3本章小结与展望30-32第3章菌株S.peucetiusJMC06001抑菌活性物质特点探讨32-383.1材料与策略32-333.1.1菌株和培养基32-333.1.2发酵液制备333.1.3不同溶剂萃取物及菌丝体浸出物的制备和抑菌试验333.1.4抑菌物
ol synthase17

1.4.5 土臭素酶17

1.4.6 鲨烯-藿烯环化酶17

1.4.7 胞外几丁质酶17-19

1.5 总结与展望19

1.6 本探讨的目的、内容和技术路线19-22

1.6.1 本探讨的目的和作用19-20

1.6.2 探讨内容20

1.6.3 拟解决的关键不足20

1.6.4 本探讨的技术路线20-22

第2章 放线菌菌株JMC 06001的鉴定22-32

2.1 材料与策略22-27

2.

1.1 实验菌株22

2.

1.2 主要仪器设备和试剂22-23

2.

1.3 样品采集与处理23

2.

1.4 分离和发酵培养基23

2.

1.5 形态和培养特点23-24

2.

1.6 生理生化特点24

2.

1.7 细胞壁化学组分浅析24-25

2.

1.8 基于16S rRNA基因序列的系统发育浅析25-27

2.2 结果和浅析27-30

2.1 生理生化特点形态和培养特点27-28

2.2 生理生化特点28

2.3 细胞壁化学组分浅析28

2.4 基于16S rRNA基因序列的系统发育浅析28-30

2.3 本章小结与展望30-32

第3章 菌株S. peucetius JMC 06001抑菌活性物质特点探讨32-38

3.1 材料与策略32-33

3.

1.1 菌株和培养基32-33

3.

1.2 发酵液制备33

3.

1.3 不同溶剂萃取物及菌丝体浸出物的制备和抑菌试验33

3.

1.4 抑菌物质理化稳定性的测定33

3.2 结果与浅析33-37
3.

2.1 发酵液萃取物对多种指示菌的抑菌谱33-34

3.

2.2 菌丝体浸出物对多种指示菌的抑菌谱34-35

3.

2.3 温度对抑菌物质活性的影响性35-36

3.

2.4 pH值对抑菌物质活性的影响36

3.

2.5 紫外光对抑菌物质活性的影响36-37

3.

2.6 抑菌活性成分的初步分离37

3.3 本章小结与结论37-38
第4章 菌株 S. peucetius JMC 06001次生代谢产物分离纯化初步探讨38-47
ⅰ. 发酵液的预处理38
ⅱ. 化合物的提取38
ⅲ. 化合物的分离38-39
ⅳ. 化合物的鉴定39

4.1 材料与策略39-41

4.

1.1 菌株和培养基39

4.

1.2 仪器与试剂39-40

4.

1.3 菌株扩大发酵40

4.

1.4 有机溶剂萃取40

4.

1.5 硅胶柱层析40

4.

1.6 活性部位的确定40-41

4.

1.7 馏分抑菌谱探讨41

4.1.8 化合物的纯化41论文导读：2.3Box-Behnken设计及浅析结果50-545.2.4发酵培养基最优配方545.2.5验证实验545.3本章小结与结论54-55结束语55-56致谢56-57参考文献57-64作者在学期间取得的学术成果64-68附录A培养及发酵探讨用培养基68-71附录B馏分JMH02-09高效液相色谱检测图谱71-78上一页1234

4.2 结果与浅析41-46

4.

2.1 硅胶柱层析结果41-43

4.

2.2 抑菌效果探讨43-44

4.

2.3 液相色谱检测情况44-46

4.3 本章小结与结论46-47
第5章 菌株S. peucetius JMC 06001发酵培养基优化47-55

5.1 材料与策略47-48

5.

1.1 菌株47-48

5.

1.2 培养基及培养条件48

5.

1.3 抑菌实验48

5.

1.4 Minnimum Run Equireppcated Res IV设计48

5.

1.5 最陡爬坡实验48

5.

1.6 响应面浅析48

5.

1.7 验证实验48

5.2 结果与浅析48-54
5.

2.1 显著性影响因素的筛选48-50

5.

2.2 最陡爬坡实验确定中心实验点50

5.

2.3 Box-Behnken设计及浅析结果50-54

5.

2.4 发酵培养基最优配方54

5.

2.5 验证实验54

5.3 本章小结与结论54-55
结束语55-56
致谢56-57
参考文献57-64
作者在学期间取得的学术成果64-68
附录A 培养及发酵探讨用培养基68-71
附录B 馏分JMH 02-09高效液相色谱检测图谱71-78