简论基质心理应激对大鼠髁突软骨结构影响及机理结论

论文导读：白对照组、（4周、8周和12周）心理应激组和（4周、8周和12周）药物对抗组。参照文献，建立慢性轻度不可预见性心理应激模型。在应激4周、8周和12周时间点，测量大鼠体重，进行血清皮质酮（corticosterone,CORT）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropichormone,ACTH）水平检测，采取旷场实验进行行为学观察。探讨结果显示，心理应激组
摘要：应激是生物体在受到外部、内部环境以及心理-社会环境刺激时体现出的一系列全身性的非特异反应。以某种作用上来讲，机体总是处于一种应激状态，时刻都在对复杂多变的外部环境和内部环境刺激产生适应性和对抗性的反应。现代社会激烈的竞争、快速的工作节奏、逐渐增大的生活压力等时刻都在影响着人类的生理和心理，使人类长期处于一种心理应激状态。随着医学方式由单纯的生物医学方式向生物-心理-社会医学方式的转变，并伴随疾病双轴论述的提出和不断改善，心理应激在疾病发生中的作用受到日益重视，关于心理应激在疾病发生、进展和治疗中作用的探讨已成为目前医学探讨的热点。目前针对心理应激对口颌系统影响的探讨已经证实，心理应激可以引起口颌肌结构异常和功能紊乱，然而，口颌系统是一个统一的功能整体，口颌肌、颌骨和颞下颌关节任一环节的转变都将引起其它环节发生转变，以而影响整个系统功能的发挥。由口颌肌引发的肌-骨效应是否会对心理应激状态下颞下颌关节结构和功能产生影响？心理应激后髁突软骨形态、细胞外基质分泌以及软骨下骨的改建等会出现如何转变均有待进一步探讨证实。基于以上理由，本探讨拟通过建立慢性轻度不可预见性应激（chronicunpredictable mild stress, CUMS）模型，模拟人类心理应激状态，以形态学和分子生物学角度，探讨心理应激对髁突软骨结构的影响及其作用机理，为探讨心理因素致口颌系统疾患的发病机理及防治措施提供实验依据。本探讨共分为2个部分：第一部分为心理应激动物模型的建立及评价。将大鼠随机分为空白对照组、心理应激组和药物对抗组；然后每个大组又再次根据取材时间点的不同分成3个亚组，即（4周、8周和12周）空白对照组、（4周、8周和12周）心理应激组和（4周、8周和12周）药物对抗组。参照文献，建立慢性轻度不可预见性心理应激模型。在应激4周、8周和12周时间点，测量大鼠体重，进行血清皮质酮（corticosterone, CORT）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone, ACTH）水平检测，采取旷场实验进行行为学观察。探讨结果显示，心理应激组大鼠体重增加量显著减少，与同时间点的空白对照组和药物对抗组相比有着统计学差别（p＜0.05）；心理应激大鼠在旷场实验中移动总距离显著减少（p＜0.05），停留时间显著增加（p＜0.05）；心理应激组各时间点血清中CORT和ACTH的含量与同时间点的空白对照组和药物对抗组相比显著升高（p＜0.05）。结果证实，本探讨所采取CUMS模型可以有效保证大鼠长期处于心理应激状态。第二部分为心理应激对大鼠髁突软骨结构的影响及机理探讨。首先，采取HE染色、扫描电镜和Micro CT策略探讨心理应激后髁突软骨的组织形态学变化；然后，观察这种病理性转变是否同时伴随炎性因子的大量释放，炎性因子表达异常是否会引起与其密切相关的基质金属蛋白酶（matrixMetallo Proteinases, MMPs）和金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor of metalprotease, TIMP）等的表达转变，MMPs的变化是否会造成细胞外基质的合成和降解代谢失衡，细胞外基质会出现怎样的变化；炎性因子是否会激活OPG/RANK/RANKL系统进而导致软骨下骨质破坏，根据上面陈述的不足我们展开了以下五个方面的探讨，探讨心理应激致大鼠髁突结构转变的分子生物学机制，结果如下：1.心理应激后大鼠髁突软骨的组织形态学观察发现，心理应激8周和12周组大鼠髁突软骨表面出现胶原纤维排列紊乱以及纤维断裂等病理性转变；HE染色和Micro CT结果证实髁突软骨出现典型的退行性病变和软骨下骨破坏，破坏程度随着应激时间的延长而加重，病变发生部位与髁突功能密切相关。2.心理应激4周、8周和12周组髁突软骨内炎性因子白介素-1β（interleukin1β, IL-1β）、白介素-6（interleukin-6, IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）表达水平均显著升高，显著高于同时间点的空白对照组和药物对抗组（p＜0.05），并且心理应激12周组显著高于4周组（p＜0.05）；各时间点药物对抗组的IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著高于同时间点的空白对论文导读：
照组（p＜0.05）。3.心理应激4周、8周和12周组髁突软骨内MMP-3和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平显著升高，均显著高于同时间点的空白对照组和药物对抗组（p＜0.05），应激组表达随着应激时间的延长呈逐渐上升走势（p＜0.05）；4周和8周时间点的空白对照组和药物对抗组相比无显著性差别（p＞0.05），药物对抗12周组MMP-3的mRNA和蛋白表达均高于同时间点的空白对照组（p＜0.05）；TIMP-1在心理应激12周组的mRNA和蛋白表达与同时间点的空白对照组和药物对抗组相比显著升高（p＜0.05）。4.心理应激8周和12周组髁突软骨内aggrecan和collagen II的mRNA和蛋白表达均显著低于同时间点的空白对照组和药物对抗组（p＜0.05）；其中，心理应激12周组显著低于4周和8周组（p＜0.05）；同时间点的药物对抗组和空白对照组相比无显著差别（p＞0.05）。5.心理应激8周和12周组大鼠髁突软骨内骨保护素（osteoprotegerin,OPG）的mRNA水平和蛋白水平显著低于同时间点空白对照组和药物对抗组（p＜0.05）；心理应激8周和12周组核因子-kB受体活化因子配体（receptoractivator of NF-kB pgand, RANKL）的mRNA水平和蛋白水平以及RANKL/OPG比值均显著高于同时间点的空白对照组和药物对抗组（p＜0.05），心理应激12周组显著高于心理应激4周和8周组（p＜0.05）。实验结论：1.慢性轻度不可预见性应激模型以心理应激为主效应，减低躯体因素对探讨结果的影响，使大鼠长期处于心理应激状态，是一种较为理想的心理应激动物模型。2.心理应激引起髁突软骨发生器质性转变，而这种器质性转变可能是引起颞下颌关节疾病的病理学基础之一。3.心理应激导致髁突软骨内炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的大量释放，进而诱导髁突软骨细胞MMP-3、MMP-9、TIMP-1的分泌和表达增加，引起大鼠髁突软骨细胞外基质中aggrecan和collagen II的降解代谢活动增强，导致软骨细胞外基质aggrecan和collagen II表达降低，随着应激时间的延长，这一作用更加显著，其可能是心理应激导致髁突软骨细胞外基质破坏的机制之一。4.心理应激导致髁突软骨内炎性因子大量释放，激活髁突软骨内的OPG/RANK/RANKL系统，使OPG表达水平逐渐降低，RANKL表达和RANKL/OPG比值逐渐增大，进而造成髁突软骨下骨破坏，其变化走势与心理应激导致的骨质破坏程度密切相关，其可能是心理应激导致髁突软骨下骨破坏的机制之一。5.药物对抗能够显著减轻心理应激效果，但不能完全对抗心理应激作用，应激作用不断累积超过机体代偿能力时出现了早期组织损伤。关键词：心理应激论文慢性轻度不可预见性应激论文颞下颌关节论文髁突软骨论文炎性因子论文基质金属蛋白酶论文细胞外基质论文OPG/RANK/RANKL系统论文
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中文摘要7-11
Abstract11-16
前言16-18
文献回顾18-41

一、心理应激探讨进展18-29

二、心理应激在口颌系统疾病发病中作用的探讨29-41

第一部分 心理应激动物模型的建立及评价41-49
1 材料41-43
2 策略43-44
3 结果44-47
4 讨论47-49
第二部分 心理应激对大鼠髁突软骨结构的影响及机理探讨49-93
实验

一、心理应激对大鼠髁突软骨影响的组织形态学观察49-60

1 材料49-50
2 策略50-53
3 结果53-58
4 讨论58-60
实验

二、心理应激后大鼠髁突软骨内炎性因子表达的探讨60-70

1 材料60-61
2 策略61-64
3 结果64-67
4 讨论67-70
实验

三、心理应激后大鼠髁突软骨内细胞外基质降解相关因子表达的探讨70-78

1 材料70-71
2 策略71-73
3 结果73-76
4 讨论76-78
实验

四、心理应激后大鼠髁突软骨内细胞外基质合成相关因子表达的探讨78-85

1 材料78
2 策略78-80
3 结果80-83
4论文导读：讨论83-85实验五心理应激后大鼠髁突软骨内骨吸收相关因子表达的探讨85-931材料85-862策略86-883结果88-914讨论91-93小结93-95参考文献95-107附录107-111个人简历和探讨成果111-112致谢112上一页123
讨论83-85
实验

五、心理应激后大鼠髁突软骨内骨吸收相关因子表达的探讨85-93

1 材料85-86
2 策略86-88
3 结果88-91
4 讨论91-93
小结93-95
参考文献95-107
附录107-111
个人简历和探讨成果111-112
致谢112