浅析乙型肝炎B、C基因型乙型肝炎病毒调控元件活性差别及机制书写

论文导读：3-30讨论30-32小结32-33第二部分B、C基因型HBV调控元件活性的比较浅析33-45引言33-34材料与策略34-38结果38-42讨论42-44小结44-45第三部分B、C基因型HBV增强子Ⅱ活性差别机制的初步探讨45-68引言45-46材料与策略46-54结果54-64讨论64-67小结67-68结论68-69参考文献69-76附录一英文缩略词表76-78附录二试剂配方78-
摘要：尽管安全有效的疫苗运用至今已有近三十年，但乙型肝炎病毒的感染仍然是全球重大的公共卫生不足之一。基于HBV基因组序列的差别目前将其分为A~J十个基因型，我国是HBV感染的高发区，广泛分布的主要是B和C两种基因型。探讨发现B、C基因型HBV感染者在病毒学、临床体现及对干扰素的反应方面有着较大差别。但目前为止引起B、C基因型HBV体现差别的具体机制尚未完全阐明。HBV全长3.2kb，其调控元件包含C、S1、S2与X四个启动子以及EnhI和EnhII两个增强子。鉴于HBV调控元件对其复制、转录及蛋白表达的重要调控作用，我们通过对B、C基因型HBV调控元件的活性进行比较浅析，以期找出两个基因型体现差别的理由及机制。本探讨第一部分通过对B、C基因型HBV序列进行同源浅析，分别获得这两个基因型HBV基因组的保守序列。之后以本实验室保存的病毒株作为模板进行调控序列的扩增，并将差别位点序列突变为保守序列，成功构建了B、C基因型保守的HBV各调控元件的萤火虫荧光素酶报告质粒，为后续探讨奠定了基础。第二部分通过比较B、C基因型保守的HBV各调控元件的活性发现Xp-EnhI、Xp、及BCp活性B、C基因型间无统计学差别，Cp-EnhII、Cp及SpI活性B型高于C型，而SpII活性B型低于C型。随后通过对SpII进行B、C基因型3’端置换发现两个区域对SpII活性均有较大影响。第三部分通过比较证实B、C基因型HBV EnhII活性确实有着差别，并在B型EnhII序列中进行四个C型序列突变，发现1635-1640与1654位点对B、C基因型EnhII活性差别起重要作用。随后通过凝胶迁移阻滞实验初步鉴定出细胞内有着与B型1635-1640位点结合的核蛋白，并通过DNApull down筛选以及质谱鉴定获得PARP1、PQ、NonO、Ku70及Ku80五个候选结合蛋白。我们的结果表明转录因子与EnhII1635-1640位点的结合及对其活性的影响可能是B、C基因型HBV体现差别的一个重要机制。关键词：乙型肝炎病毒论文基因型论文增强子论文启动子论文
本论文由www.7ctime.com,需要论文可以联系人员哦。摘要4-5
Abstract5-7
前言7-9
第一部分 B、C 基因型 HBV 调控元件保守序列的确定及报告质粒的构建9-33
引言9-10
材料与策略10-23
结果23-30
讨论30-32
小结32-33
第二部分 B、C 基因型 HBV 调控元件活性的比较浅析33-45
引言33-34
材料与策略34-38
结果38-42
讨论42-44
小结44-45
第三部分 B、C 基因型 HBV 增强子Ⅱ活性差别机制的初步探讨45-68
引言45-46
材料与策略46-54
结果54-64
讨论64-67
小结67-68
结论68-69
参考文献69-76
附录

一、英文缩略词表76-78

附录

二、试剂配方78-81

附录

三、主要仪器设备81-82

致谢82-83
综述 乙型肝炎病毒转录调控元件的探讨进展83-94
参考文献91-94