简析丙烯酰胺体外遗传毒性评价试验优化

论文导读：成部分。建立一个具有良好特异性和敏感性并且操作简便的体外试验系统，可以在药物早期研发历程中提供重要的参考依据，降低研发风险。此外，在体外实验系统中采取合理的代谢活化条件，可以更加科学地评价化合物的遗传毒性。我们运用人淋巴瘤母细胞（TK6）建立了优化的遗传毒性组合试验系统。在同一处理条件下的不同时间点对受试物分
摘要：遗传毒性试验可以考察受试物是否具有潜在致癌性或者致突变性，是药物毒性评价和环境致癌物探讨的重要组成部分。建立一个具有良好特异性和敏感性并且操作简便的体外试验系统，可以在药物早期研发历程中提供重要的参考依据，降低研发风险。此外，在体外实验系统中采取合理的代谢活化条件，可以更加科学地评价化合物的遗传毒性。我们运用人淋巴瘤母细胞（TK6）建立了优化的遗传毒性组合试验系统。在同一处理条件下的不同时间点对受试物分别进行彗星试验，体外微核试验和TK基因突变试验。该系统的优点为TK6细胞为人源细胞，与常用的小鼠细胞相比，p53基因表达正常；此外，系统具有良好特异性与敏感性，操作简便；该检测策略覆盖了DNA损伤、染色体异常和基因突变三个遗传终点。在本探讨中我们运用该试验系统考察了中药单体——汉防己甲素和雷公藤甲素的遗传毒性。彗星试验结果显示汉防己甲素可能导致DNA的断裂，体外微核试验表明雷公藤甲素可能导致染色体损伤，提示两者都具有潜在的遗传毒性。在致癌物代谢活化中，细胞色素P450酶CYP1A1和CYP2E1是常见的两种代谢酶。本探讨运用可稳定表达CYP1A1的AHH-1细胞株和同时稳定表达CYP1A1和CYP2E1的h2E1V2细胞株，建立了体外TK基因突变实验系统，考察了环境致癌物丙烯酰胺通过CYP1A1和CYP2E1代谢后的遗传毒性。试验结果表明，丙烯酰胺对h2E1V2细胞具有致突变作用，表明CYP2E1在其代谢活化中发挥重要作用。综上所述，本探讨建立了两个优化哺乳动物细胞的遗传毒性试验组合系统，具有良好特异性、敏感性，并且操作简便。对两种中药单体受试物和一种环境致癌物进行了毒性评价和初步机制探讨，验证了实验系统并得到了毒性评价结果。关键词：遗传毒性论文汉防己甲素论文雷公藤甲素论文丙烯酰胺论文
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ABSTRACT6-12
第一章 引言12-20

1. 药物遗传毒性探讨12-15

1. 药物遗传毒性评价的标准组合试验13-14

1.

2. 组合试验有着的不足及进展走势14-15

中药的不良反应15-17 2.

1. 汉防己甲素的探讨进展16

2.2. 雷公藤甲素的探讨进展16-17

3. 体外实验中代谢活化条件17-18

4. 探讨思路18-20

第二章 建立采取 TK6 细胞优化的遗传毒性组合试验系统20-25

1. 组合试验的选择20

2. 所选试验的基本原理20-21

2.

1. 单细胞凝胶电泳试验20

体外微核试验20-21

2.

3. TK 基因突变试验21

细胞系的选择21-24 3.

1. L5178Y 细胞与 TK6 细胞的特点21-22

3.

2. TK6 细胞和 L5178Y 细胞 TK 基因突变试验的比较22-24

4. 试验流程的设计24-25

第三章 运用 TK6 细胞优化的遗传毒性组合试验系统评价中药单体25-39
第一节 汉防己甲素的遗传毒性探讨25-33

1. 运用优化的组合试验对汉防己甲素遗传毒性的探讨25-30

1. 材料25-26

1.2. 试验策略26-28

1.3. 结果28-30

2. 采取其他试验对汉防己甲素遗传毒性进行的探讨30-32

3. 本节结果与讨论32-33

第二节 雷公藤甲素的遗传毒性探讨33-38
1 运用优化的组合试验对雷公藤甲素的遗传毒性的探讨33-36

1.1 材料33

1.2 试验结果33-36

2 雷公藤甲素对肝肾细胞的毒性的探讨36-37

2.

1. 材料36-37

试验策略37

2.

3. 结果37

3 本节结果与讨论37-38 本章总结38-39
第四章 建立采取 AHH-1 和 h2E1V2 细胞的遗传毒性试验系统39-44
第一节 AHH-1 和 h2E1V2 细胞的介绍39
第二节 采取 AHH-1 和 h2E1V2 细胞的试验系统考察丙烯酰胺的遗传毒性39-43
1 材料39-40
2 试验策略40-41
3 试验结果41-42
4 本节结果与讨论42-43
本章总结43-44
参考文献44-51
致谢51-52
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文52