研讨抗肿瘤苹果类黄酮及其磺化衍生物抗肿瘤作用

论文导读：
摘要：本论文基于合作导师杨兴斌教授的国家自然科学基金项目的资助,测定了粉红女士苹果果肉和果皮的类黄酮总含量,探讨了粉红女士苹果类黄酮的体外抗氧化活性。以槲皮素为原料通过磺化反应合成了两种新的槲皮素衍生物槲皮素-5’,8-磺酸钠(QS)和槲皮素-4',7-硫酸钠(QOS)。选用对数生长期的人结肠癌LoVo和乳腺癌MCF-7两种细胞系为实验对象,采取MTT法测定肿瘤细胞的存活率、LDH活力测定法评价黄酮类化合物对肿瘤细胞的毒性、利用Nikon-TS100倒置显微镜观察肿瘤细胞的形态学损伤、Hoechst33258染色法在倒置荧光显微镜下观察肿瘤细胞核的形态变化情况,流式细胞仪浅析肿瘤细胞的周期分布和肿瘤细胞中活性氧的产生情况、双变量流式细胞仪检测细胞进入早晚期的凋亡情况,探讨了粉红女士苹果类黄酮、芦丁、槲皮素及其衍生物槲皮素-5’,8-磺酸钠(QS)和槲皮素-4',7-硫酸钠(QOS)对人结肠癌LoVo和乳腺癌MCF-7的抗肿瘤活性。探讨结果摘要如下：(1)粉红女士苹果果皮、果肉类黄酮的含量分别为24.05±0.14mg/g和10.98±0.25mg/g,类黄酮的得率分别为0.192%和0.088%。(2)粉红女士苹果类黄酮具有较强的体外抗氧化活性,且呈浓度相关性,果皮类黄酮清除自由基的能力高于果肉类黄酮,对O2·-的清除效果最好。0.8mg/mL的果皮类黄酮对DPPH·和02·-的清除率分别为64.38%和84.84%,总还原力为0.175。(3)粉红女士苹果类黄酮具有抗肿瘤活性,果皮类黄酮抑癌效果强于果肉类黄酮。果皮、果肉类黄酮对人结肠癌LoVo和乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率和毒性随着浓度的增加而逐渐增大,100mg/mL的果皮类黄酮对MCF-7细胞增殖的抑制率为57.25%。(4)粉红女士苹果类黄酮可诱导LoVo及MCF-7细胞产生大量活性氧,推动肿瘤细胞凋亡。(5)以槲皮素为原料通过磺化反应合成的槲皮素衍生物槲皮素-5’,8-磺酸钠(QS)和槲皮素-4',7-硫酸钠(QOS)具有很好的水溶性,纯度97%,分子结构式均为C15H8Na2013S2,属于同分异构体。(6)槲皮素及其衍生物对人结肠癌LoVo和乳腺癌MCF-7细胞抗癌活性体现出剂量相关性,对乳腺癌MCF-7细胞系的敏感度高于结肠癌LoVo细胞系。槲皮素、槲皮素-5',8-磺酸钠(QS)、槲皮素-4',7-硫酸钠(QOS)和芦丁四种黄酮类化合物的抗癌活性强弱次序为：槲皮素-5’,8-磺酸钠(QS)槲皮素芦丁槲皮素-4',7-硫酸钠(QOS),100μM的槲皮素-5’,8-磺酸钠对MCF-7细胞的增殖抑制率可达92.38%,能诱导90.66%的肿瘤细胞发生凋亡。关键词：苹果类黄酮论文LoVo和MCF-7细胞论文槲皮素论文槲皮素-5'论文8-磺酸钠(QS)论文抗肿瘤论文
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Abstract5-9
第1章 绪论9-19

1.1 结肠癌及乳腺癌的探讨进展9-10

1.2 黄酮类化合物生物活性的探讨进展10-13

1.3 饮食类黄酮的药理学与癌症联系的探讨进展13-19

第2章 论文探讨的立论依据、主要内容和目的作用19-23

2.1 立论依据19

2.2 探讨内容19-21

2.3 目的作用21-23

第3章 苹果类黄酮对人结肠癌LoVo及乳腺癌MCF-7细胞抗肿瘤活性的探讨23-47

3.1 材料与策略23-30

3.

1.1 材料23

3.

1.2 试剂23-24

3.

1.3 实验仪器24

3.

1.4 策略24-30

3.2 结果与浅析讨论30-47
3.

2.1 芦丁的标准曲线30

3.

2.2 苹果果皮、果肉中类黄酮的含量30-31

3.

2.3 苹果果皮、果肉类黄酮的抗氧化活性31-33

3.

2.4 苹果类黄酮对肿瘤细胞增殖抑制的影响33-35

3.

2.5 苹果果皮类黄酮对肿瘤细胞形态变化的影响35-36

3.

2.6 苹果果皮、果肉类黄酮对肿瘤细胞的毒性36-38

3.

2.7 苹果果皮、果肉类黄酮对肿瘤细胞凋亡的影响38-42

3.

2.8 苹果果皮、果肉类黄酮对肿瘤细胞活性氧(ROS)的诱导效果42-47

第4章 天然黄酮类化合物对人结肠癌LoVo及乳腺癌MCF-7细胞抗肿瘤活性的探讨47-73

4.1 材料与策略47-53

4.

1.1 材料47

4.

1.2 试剂47-48

4.

1.3 实验仪器48

4.

1.4 策略48-53

4.2 结果与浅析讨论53-73
4.

2.1 槲皮素衍生物的化学结构鉴定53-54

4.

2.2 芦丁、槲皮素及其衍生物对肿瘤细胞存活率的影响54-56

4.

2.3 槲皮素-5’,8-磺酸钠(QS)对肿瘤细胞形态变化的影响56-58

4.

2.4 芦丁、槲皮素及其衍生物对肿瘤细胞的毒性58-59

4.

2.5 芦丁、槲皮素及其衍生物对肿瘤细胞周期的影响59-63

4.

2.6 芦丁、槲皮素及其衍生物对肿瘤细胞凋亡的影响63-67

4.

2.7 槲皮素及其衍生物对肿瘤细胞活性氧(ROS)产生的影响67-70

4.

2.8 槲皮素-5’,8-磺酸钠(QS)对肿瘤细胞核形态变化的影响70-73

结论73-75
参考文献75-83
致谢83-85
攻读硕士学位期间的探讨成果85