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浅论非诺贝特纳米混悬液制备及大鼠体内药动学

最后更新时间:2024-01-09 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:22249 浏览:97094
论文导读:noZS90分析仪(英国Malvern),J-5900型扫描电镜(日本电子)。非诺贝特(徐州恩华),HPMCK100m、碳酸氢钠、柠檬酸(天津百世),磷脂(上海亨代劳),无水乙醇、甲醇(天津科密欧),力平之胶囊(法国利博福尼)。2制备策略与结果2.1制备工艺将HPMCK100m撒入水中,搅拌并放置过夜,待完全溶胀后,将碳酸氢钠100mg溶解在其中
摘 要:目的:尝试新的策略制备非诺贝特纳米混悬剂,为制备纳米制剂寻求新的突破。策略:基于泡腾的原理,用碳酸氢钠与柠檬酸反应产生大量的气泡,由气泡产生的搅拌与剪切力,使水溶性极低的非诺贝特在水中结晶成纳米状态,并迅速分散到水中。通过体外药动学和体内代谢情况,考查该混悬剂。结果:该策略具有一定的可行性。
关键词:非诺贝特:纳米混悬剂;泡腾原理;制备工艺;溶出浓度;体内代谢
非诺贝特(fenofibrate, FB)能抑制HMG-CoA还原酶而减少胆固醇合成,临床常用于治疗TC,TG和混合性高脂血症。同时也可用于老年人动脉粥样硬人、血管疾病的防治。但FB水溶性低,口服吸收差,生物利用度低。普通制剂Po只有60%被吸收。剂量较大时人增加肾代谢负荷。[1]
纳米混悬剂将难溶性药物制成纳米级后悬浮于分散介质中,从而增加药物的溶出速率,提高生物利用度。常用的制备策略有:溶剂挥发法(纳米沉淀法),球磨法及高压匀质法。溶剂挥发法所需仪器简单,但易产生有机溶剂残留。球磨法有一定重现性,样品粒径也较小,但生产效能低。高压匀质法重现性好,样品粒径均一,但仪器要求较高,且仪器金属会污染样品。本研究将采用新的策略制备FB纳米混悬剂。[2]
1仪器与试剂
磁力搅拌器(德国IKA),XHZ-D(III)旋转蒸发仪(河南予华),RCZ-8A溶出试验仪(上海天精),UV-2100紫外可见光分光光度计(美国UNICO公司),高效液相(上海伍丰),GWA-VN2-F20纯化水器(北京普析),Zetasizer Nano ZS90分析仪(英国Malvern),J-5900型扫描电镜(日本电子)。
非诺贝特(徐州恩华),HPMC K100m、碳酸氢钠、柠檬酸(天津百世),磷脂(上海亨代劳),无水乙醇、甲醇(天津科密欧),力平之胶囊(法国利博福尼)。
2制备策略与结果

2.1制备工艺

将HPMC K100m撒入水中,搅拌并放置过夜,待完全溶胀后,将碳酸氢钠100mg溶解在其中;另外将FB 30mg 、磷脂30mg 、柠檬酸120mg水浴超声溶于1ml无水乙醇中。用1ml注射器将乙醇溶液快速注入水溶液中。静置待溶液表面的气泡基本上消失,置旋转蒸发仪旋转去掉大部分乙醇。取样加纯化水稀释检测。

2.2工艺筛选与优化

2.1泡腾程度对Z-Ave、PDI的影响

处方中其他不变,碳酸氢钠与柠檬酸按5:6的比例调整。以粒径和PDI为指标,结果如下(x±s,n=5):
由图1可知:随着泡腾程度的加剧,气泡产生的搅拌与剪切力就越大,制成的纳米粒子就越小;但到一定程度后,随着泡腾程度的加剧,粒子和PDI反而变大,这可能是由于反应过程中,气泡把药液挤到气泡表面,这使得小结晶不能快速分散到水溶液中,从而加长结晶时间、晶体与晶体接触更多,晶习更快,所以粒径、PDI更大。[3]

2.2表面活性剂的量对粒径、PDI的影响

其他组分比例不变,分别调整HPMC K100m、磷脂的量,以粒径和PDI为指标,结果如下(x±s,n=5):
由图2图3可知:HPMC K100m越小,相应的粒径就越小,但综合考虑制剂的稳定性理由,最终选择HPMC K100m的溶度为0.3%(w/v)。适量的磷脂能使制剂减小,但量继续加大时,粒径不再变小,反而加大,这个与磷脂的性质有关。磷脂是表面活性剂,在处方中的主要作用是吸附在纳米结晶表面,使结晶外加的附带亲水的功能,增加混悬液的稳定性。随着量的增加,结晶表面吸附得越多,相应的粒径就会越大。

2.3药物浓度对粒径、PDI的影响

处方中其他组分比例不变,更改FB的量,对粒径、PDI进行考查,结果如下(x±s,n=5):

2.4稳定性实验

按2.1策略制备纳米混悬制剂,室温下放置一段时间后,摇匀,取中段液,加适量纯化水稀释,进行检测,结果如下表:
表1纳米混悬剂的稳定性(x±s,n=3)
由表1可知:3小时内制剂基本上处于稳定状态,这满足了后期工业生产的需求。

2.5其他表征

按最优处方制备的纳米混悬液呈乳白色状液体,带蓝色荧光,用纯化水稀释后,蓝色荧光更明显,透光性好。久置后,有少量白色沉淀,轻摇能迅速分散开来。粒径分布如图5,电镜扫描如图6。
平均粒径为223.7±28.4nm,分散系数(PDI)为0.374±0.049。经电镜扫描可见,粒子显球状、椭圆形状,未见针状结晶。

2.3体外溶出

2.3.1标准曲线的建立

精密称取FB对照品20mg置100ml量瓶中,用少量无水乙醇溶解,用溶出介质定容,得贮备液。分别精密移取适量用溶出介质稀释成浓度为5、7.5、10、12.5、15、17.5、20 μg/ml的系列溶液,以溶出介质为空白,于286nm处测定吸光度(Y),将Y对浓度(X)线性回归,得标准曲线方程Y=0.0505X-0.031,r=0.9955。表明FB浓度在5~20μg/ml范围内与吸光度线性关系良好。[4]

2.3.2溶出测定策略

照中国药典2010年版XC第二法考察纳米混悬剂、原药、微粉化的体外溶出特性。溶出条件为(37+0.5)℃、转速100r/min,溶出介质0.5%SDS 900ml。取FB纳米混悬剂(30mg),另取FB原药和微粉化FB各30mg分散到等体积水[含HPMCK100m、磷脂]中,装入经预处理的透析袋中,两端扎紧。分别于5、l0、20、40、60、90、120、180和240min取样5ml(同时补充同温等量介质),经0.45μm微孔滤膜过滤,以溶出介质为空白,取续滤液在286nm波长处测定Y,由标准曲线计算浓度。平行试验6次。溶出曲线见图7。结果表明,FB纳米混悬剂的溶出速率显著高于原药和微粉化制剂。
3药动学试验

3.1血样处理策略

取血样100μl,置1.5ml离心管中,加入100μg/mlSTP内标液20μl,涡旋1min,再加入甲醇与1mol/L盐酸以95:5(v/v)配制的蛋白沉淀剂300μl,涡旋1min,然后以12000论文导读:-水(80:20),磷酸调PH值至3.0;色谱柱:DiamonsilTMC18(4.6*250mm,5μm);柱温:室温;流速:1ml/min;检测波长:286nm;进样量:20μl。按3.1血样处理策略得样品后,由高效液相检测得到:由上图可知,空白血液成份不会影响内标物与药物代谢产物的检测,血样处理策略和检测条件适合。3.3线性范围取非诺贝特20.03mg置100ml容量
r/min,离心10min,氮气吹干,100μl流动相复溶(涡旋1min,然后以12000r/min,离心10min),取上清液20μl进样,测定峰面积。[5]

3.2色谱条件

伍丰LC-100紫外检测器;流动相:甲醇-水(80:20),磷酸调PH值至3.0;色谱柱:DiamonsilTMC18 (4.6*250mm,5μm);柱温:室温;流速:1ml/min;检测波长:286nm;进样量:20μl。按3.1血样处理策略得样品后,由高效液相检测得到:
由上图可知,空白血液成份不会影响内标物与药物代谢产物的检测,血样处理策略和检测条件适合。

3.3线性范围

取非诺贝特20.03mg置100ml容量瓶中,甲醇溶解定溶,再稀释成0.4、0.8、2、4、8、20、40μg/ml系列浓度;各取50μl,氮气吹干,加空白血浆100μl,涡旋1min,得血药浓度0.2、0.4、1、2、4、10、20μg/ml的样品,再按2策略处理血样,取20μl进样。浓度为横座标,非诺贝特吸收峰面积与内标物吸收峰面积比为纵座标,线性回归得线性方程y=0.2633x+0.1544,r=0.9974, 结果表明,2浓度在0.2~20μg/ml范围内与峰面积线性关系良好。检测限为100ng/ml,定量限为200ng/ml。

3.4动物试验

18只SD大鼠随机分成3组(原药组、微粉化组、纳米混悬剂组),每组6只。试验前禁食12h,自由饮水。为消除辅料的影响,试验前将FB原药和微粉化制剂照“2.1”项下策略,用含相应浓度表面活性剂的水溶液进行预分散,3组动物均按25mg/kg的剂量灌胃给药。给药后分别于0.25、0.5、l、2、4、6、8、12h从剪尾取血约0.5ml,置经肝素钠处理过的1.5ml离心管中,离心(12000rpm,5min),所得血清液照“3.2”项下策略处理后测定。其体内活性成分非诺贝特酸血浆浓度的经时变化见图12;用WinNonlin+3.3软件计算药动学参数,结果见表2。(x±s,n=3)
表2大鼠灌胃后主要药动学参数
4讨论
4.1基于泡腾的原理,用碳酸氢钠与柠檬酸反应产生大量的气泡,由气泡产生的搅拌与剪切力,在表面活性剂存在的条件下,制备难溶性药物FB的纳米混悬剂是本研究一个创新点。所需试剂、仪器简单,制备策略简单,耗能小。对今后纳米混悬剂的制备有一定的参考价值。
4.2本研究通过泡腾策略成功制得FB纳米混悬剂,并筛选了制剂处方,优化了制备工艺。电镜扫描表明所得纳米混悬剂颗粒呈无定形态。体外溶出试验表明,制成纳米混悬剂后,溶出速率较微粉化原药显著提高。体内药动学试验结果表明,纳米混悬剂组的AUC和Cmax 是原药组的3倍以上,显著高于微粉化组,生物利用度提高。因此,对减少给药剂量、提高生物利用度有重要作用。
参考文献:
[1]Vogt M,Kunath K,Dresan JB.Dissolution enhancement of fenofibrate by micronization,cogrinding and spray-drying:comparison with commercial preparations[J].Eur J Pharm Biopharm,2008,68(2):28

3.288.

[2]Keck CM,M 011er RH.Drug nanocrystals of poorly soluble drugs produced by high pressure homogenisation[J].Eur J Pharm Biopharm,200

6.62(1):3—l

[3]Elaine ML.Nanocrystals:Resolving Pharmaceutical Formulation lssues Associated with Poorly Water-soluble Compounds[M].Orlando Florida:Marcel Dekker Press,2002:45.
[4]李学明,顾立,王永禄,等.熔融乳化法制备非诺贝特纳米混悬剂[J].中国医药工业杂志,2009,40(5):349.
[5]She ZY,Ke X,Ping QN,et a1.Preparation of breviscapine nanosuspension and its pharmacokinetic behior in rats[J].ChinJNatMedJan,2007,5(1):50—55.
作者简介:
陈桂江(1984年-),广东饶平人,硕士,实验师,广东岭南职业技术学院药学院。研究方向:纳米制剂。