探讨丝素丝素蛋白/rhBMP-2微球复合双相磷酸钙实验

论文导读：
摘要：第一部分丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2缓释微球的制备及异位成骨活性探讨目的：将丝素蛋白（）作为重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP-2）的缓释载体，制备合适粒径的丝素蛋白/rhBMP-2微球，并探讨其异位成骨活性，为后续试验提供材料基础。办法：采取冷冻干燥法制备/rhBMP-2微球及微球，扫描电镜观察其加入不同比例交联剂制备的/rhBMP-2微球形态，ELISA法测定不同时间点/rhBMP-2微球磷酸盐缓冲液中rhBMP-2浓度，计算微球rhBMP-2的累积释放量及微球载药率。将微球及/rhBMP-2微球、rhBMP-2分别植入24只大鼠大腿肌袋，微球组为对照组。术后1周、2周、4周处死大鼠，切除植入微球材料的周围组织，HE染色后行组织学观察。结果：/rhBMP-2微球呈规则圆形，随乙醇比例浓度的增多微球直径减小；微球含有的rhBMP-2其释放曲线符合双相动力学释药规律；组织形态学观察见实验组有软骨细胞及成骨细胞形成。结论：使用再生丝素蛋白溶液可从制备粒径大小不一、可负载rhBMP-2的丝素蛋白/rhBMP-2微球。丝素蛋白/rhBMP-2微球可保持rhBMP-2的活性，能延缓rhBMP-2的释放时间，释放具有双相规律；丝素蛋白/rhBMP-2微球具有持续诱导骨形成的特征。第二部分丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2/双相磷酸钙人工骨的制备生物学活性探讨目的：制备含/rhBMP-2微球的双相磷酸钙（BCP）人工骨材料，探讨其理化性能及组织相容性。办法：通过溶液共沉淀法合成m（HA）/m(β-TCP)=6:4的粉体。傅里叶变换红外光谱分析材料的成分；扫描电镜(SEM)观察材料微观形态。然后从30mg/g质量比将先前制备的微球与双相磷酸钙粉末混匀，加入50%、100%、150%比例的氯化钠作为制孔剂制备人工骨材料。使用生物力学测试机测试材料的抗压强度，描绘其压力-位移曲线；Micro-CT测试材料的孔隙率，在X线入射偏角为2θ条件下，行X射线衍射分析材料成分；将材料浸出液与人胎盘间充质干细胞（hPMSCs）共培养，cck-8法观测细胞的增殖生长状况；将材料与hPMSCs共培养7d后, SEM观察细胞在材料表面的粘附状况；将与胎盘间充质干细胞共培养10d后的细胞用0.25%胰酶消化后，茜素红染色及碱性磷酸酶（ALP）观察人工骨的诱导成骨能力。结果：加入150%制孔剂的人工骨材料抗压缩强度（约30Mpa）大于松质骨水平，孔隙率为78.83%。浸出液对细胞的生长增殖与正常培养组对比无统计学差别（P0.05）；经碱性磷酸酶及茜素红染色发现，生长在材料表面的干细胞表达成骨细胞特点。结论：丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2/双相磷酸钙人工骨材料的强度大于松质骨水平，其孔隙率及孔径可调；丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2/双相磷酸钙人工骨材料可从诱导粘附、生长在其表面的细胞向成骨方向分化，对细胞的增殖生长无影响，其作为组织工程骨的支架材料是可行的。关键词：丝素蛋白论文微球论文重组人骨形态发生蛋白2论文异位成骨论文双相磷酸钙论文生物相容性论文骨组织工程论文
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Abstract6-10
前言10-17
参考文献14-17
第一部分 丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2缓释微球的制备及异位成骨活性探讨17-31
材料与办法17-21
结果21-24
讨论24-26
结论26
参考文献26-28
附图28-31
第二部分 丝素蛋白/重组人骨形态发生蛋白2/双相磷酸钙人工骨的制备及生物学活性探讨31-47
材料与办法32-35
结果35-39
讨论39-40
结论40
参考文献40-43
附图43-47
综述47-54
参考文献52-54
英文缩略词表54-55
攻读学位期间公开发表的论文55-56
致谢56-57