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谈述肾小管曲格列酮、高糖、IL-1β对人肾小管上皮细胞内皮细胞蛋白C受体影响一般

最后更新时间:2024-01-11 作者:用户投稿原创标记本站原创 点赞:9200 浏览:24493
论文导读:
摘要:目的通过流式细胞仪及RT-PCR办法观察人肾小管上皮细胞(HKC)上EPCR表达状况,及葡萄糖、IL-1β对HKC上EPCR表达的影响,旨在研究高糖、IL-1β致肾损害的机制。同时,观察曲格列酮对高糖、IL-1β调节内皮细胞蛋白C受体意义的影响,研究曲格列酮抑制肾间质纤维化达到肾保护的新机制。1、高糖、IL-1β对人肾小管上皮细胞内皮细胞蛋白C受体表达影响的探讨办法将人肾小管上皮细胞(HKC)进行细胞培养,然后采取流式细胞仪技术检测培养细胞上EPCR的表达。采取不同浓度(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、30mmol/L、50mmol/L)的D-葡萄糖意义于HKC细胞系,观察不同浓度D-葡萄糖对EPCR基因表达的影响;同时从50mmol/L的D-葡萄糖分别意义不同时间(0、3h、6h、12h、24h),观察D-葡萄糖不同意义时间对EPCR基因表达的影响。采取不同浓度(0ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)的IL-1β意义于HKC细胞系,观察不同浓度IL-1β对EPCR基因表达的影响;同时从20ng/ml的IL-1β分别意义不同时间(0h、3h、6h、12h、24h),观察IL-1β不同意义时间对EPCR基因表达的影响。结果1. EPCR在HKC上有很高表达,达97.9%。2.高糖显著下调HKC细胞中EPCR mRNA的表达,特别是在D-葡萄糖浓度为30mmol/L、50mmol/L时EPCR mRNA的表达呈明显性下降(p0.01)并有显著的剂量反应联系。50mmol/L的D-葡萄糖意义HKC细胞12h和24h时EPCR表达显著受到抑制(p0.01)。D-葡萄糖对EPCR mRNA表达的影响与意义时间有显著的线性联系。3. IL-1β在2ng/ml、5ng/ml时HKC细胞EPCR mRNA的表达量未见显著减低,在10ng/ml时HKC细胞EPCR mRNA的表达量开始显著降低(p0.01)。20ng/ml IL-1β处理3h时即能显著下调HKC细胞中EPCR mRNA的表达,EPCR mRNA的表达变化与意义时间呈显著的时效联系。结论1.人肾小管上皮细胞高表达EPCR。2. D-葡萄糖能显著抑制HKC上EPCR,呈时间、剂量依赖性。IL-1β能显著抑制HKC上EPCR,呈时间依赖性。3. EPCR表达下降可能是高糖、IL-1β致肾损害的机制之一。2、曲格列酮对高糖、IL-1β调节内皮细胞蛋白C受体意义的探讨办法将HKC细胞进行细胞培养,细胞生长至80%融合后分为三个组,第一组为空白对照组,同样条件下不加任何药物培养24小时。第二组为阳性对照组,分别加入含50mmol/L的D-葡萄糖、20ng/ml的IL-1β的培养基培养24小时,不加曲格列酮。第三组为实验组,分为四个系列,第一系列用含0μmol/L曲格列酮的培养基培养12h后分别加入含50mmol/L的D-葡萄糖、20ng/ml的IL-1β的培养基,再培养24h。第二系列、第三系列、第四系列培养办法与第一系列相同,但曲格列酮浓度分别为5umol/L、10umol/L、20umol/L。检测各组细胞EPCR的表达,观察不同浓度曲格列酮对葡萄糖、IL-1β调节内皮细胞蛋白C受体的意义。结果1.50mmol/L的D-葡萄糖、20ng/ml的IL-1β能显著抑制HKC细胞中EPCR的表达。2.在D-葡萄糖、IL-1β和曲格列酮共培养时,不同浓度的曲格列酮均能明显提升肾小管上皮细胞EPCR的表达,而且浓度越高,其改进EPCR表达的意义越显著。结论1. D-葡萄糖、IL-1β降低HKC细胞上EPCR的表达是肾间质纤维化的机制之一。2.曲格列酮具有肾保护意义,提升HKC上EPCR的表达可能是曲格列酮抑制肾间质纤维化达到肾保护的机制之一。关键词:内皮细胞蛋白C受体论文肾小管上皮细胞论文曲格列酮论文葡萄糖论文白细胞介素-1β流式细胞仪论文
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Abstract7-11
引言11-14
材料和办法14-18
1. 主要试剂和仪器论文导读:142.细胞培养143.流式细胞仪检测EPCR的表达14-154.几种药物意义历程15-165.mRNA的提取及逆转录-聚合酶链反应和适时定量PCR检测EPCR的表达16-176.统计分析17-18结果18-25讨论25-28结论28-29参考文献29-32综述32-39参考文献36-39英文缩写对照39-41致谢41-42上一页12
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2. 细胞培养14

3. 流式细胞仪检测 EPCR 的表达14-15

4. 几种药物意义历程15-16

5. mRNA 的提取及逆转录-聚合酶链反应和适时定量 PCR 检测 EPCR 的表达16-17

6. 统计分析17-18

结果18-25
讨论25-28
结论28-29
参考文献29-32
综述32-39
参考文献36-39
英文缩写对照39-41
致谢41-42